新冠病毒核酸检测考核题库附答案

新冠病毒核酸检测考核题库附答案一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分。每题只有一个最佳选项。）1.新型冠状病毒核酸检测最常用的方法是（）。A.病毒分离培养B.实时荧光RT-PCRC.宏基因组测序D.胶体金抗原检测答案：B解析：实时荧光RT-PCR是目前新冠病毒核酸检测的首选方法。2.下列临床标本中，新冠病毒核酸检测阳性率通常最高的是（）。A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.下呼吸道痰液D.全血答案：C解析：下呼吸道标本病毒载量较高，痰液阳性率常高于上呼吸道拭子。3.鼻咽拭子采集时，拭子应沿鼻道插入至鼻咽部，其深度一般约为（）。A.鼻尖至耳垂距离的1/3B.鼻尖至耳垂距离的1/2C.鼻尖至耳垂距离的2/3D.鼻尖至下颌距离的1/2答案：C解析：鼻咽拭子插入深度一般为鼻尖至耳垂距离的2/3左右。4.用于新冠病毒核酸检测的灭活型采样管中，起主要灭活作用的成分是（）。A.氯化钠B.胍盐C.葡萄糖D.肝素钠答案：B解析：胍盐可裂解病毒并灭活，同时保护核酸。5.标本采集后若不能立即送检，24小时内可暂存于（）。A.37℃B.室温C.4℃D.-20℃答案：C解析：24小时内可4℃暂存，超过24小时需-70℃或以下保存。6.实时荧光RT-PCR中，Ct值的定义是（）。A.反应到达平台期所需循环数B.荧光信号超过设定阈值时对应的循环数C.扩增产物开始出现所需时间D.模板变性温度答案：B解析：Ct值指荧光信号超过设定阈值时对应的扩增循环数。7.模板进行10倍系列稀释后，Ct值理论上约增加（）。A.1.0B.2.0C.3.3D.10.0答案：C解析：扩增效率100%时，10倍稀释Ct约增加3.32。8.新冠病毒核酸检测中，常作为内标基因监控采样和提取质量的是（）。A.ORF1abB.N基因C.E基因D.人RNaseP基因答案：D解析：人RNaseP基因可监控标本采集、提取和扩增全过程。9.核酸提取操作最适宜在实验室的哪个功能区进行（）。A.试剂准备区B.样本制备区C.扩增区D.产物分析区答案：B解析：样本制备区用于核酸提取和加样，应保持负压。10.在扩增产物分析区，最容易导致实验室污染的是（）。A.扩增产物气溶胶B.引物二聚体C.蛋白质残留D.盐离子结晶答案：A解析：扩增产物气溶胶是PCR实验室最常见的污染来源。11.为防止PCR扩增产物污染，可在反应体系中加入（）。A.甜菜碱B.UNG酶C.二甲基亚砜D.牛血清白蛋白答案：B解析：UNG酶可降解含dUTP的扩增产物，预防产物污染。12.在样本制备区操作含新冠病毒标本时，人员的个人防护应为（）。A.一级防护B.二级防护C.三级防护D.无需特殊防护答案：C解析：操作可能含病毒标本时，应采用生物安全三级个人防护。13.对含新冠病毒标本进行热灭活，常采用的温度为（）。A.56℃30minB.65℃30minC.100℃5minD.37℃60min答案：A解析：56℃30min可有效灭活新冠病毒。14.下列基因中，不属于新冠病毒核酸检测常用靶标的是（）。A.ORF1abB.N基因C.E基因D.16SrRNA基因答案：D解析：16SrRNA基因是细菌鉴定常用靶标，不用于新冠病毒检测。15.某次实验中，阳性对照无扩增曲线，阴性对照和空白对照均无扩增，最可能的原因是（）。A.样本存在抑制物B.试剂失效或扩增程序设置错误C.标本病毒载量过低D.内标基因降解答案：B解析：阳性对照无扩增而阴性对照正常，提示试剂或程序异常。16.痰液标本若需长期保存，应置于（）。A.-20℃B.-70℃或以下C.4℃D.室温答案：B解析：长期保存应-70℃或以下，避免RNA降解。17.下列操作中，容易导致标本间交叉污染的是（）。A.使用带滤芯吸头B.每份标本使用独立加样槽C.在生物安全柜外开盖并剧烈震荡标本D.操作后更换外层手套答案：C解析：开盖震荡易产生气溶胶，造成交叉污染。18.关于Ct值与模板初始量的关系，正确的是（）。A.Ct值越高，初始模板量越高B.Ct值越低，初始模板量越高C.Ct值与初始模板量无关D.Ct值越高，扩增效率越高答案：B解析：初始模板量越高，荧光信号越早达到阈值，Ct值越低。19.某些荧光定量PCR试剂中，ROX染料的主要作用是（）。A.报告荧光信号B.淬灭背景荧光C.校正孔间荧光差异D.增加引物特异性答案：C解析：ROX作为参比染料，用于校正孔间荧光信号差异。20.口咽拭子采集时，擦拭的重点部位是（）。A.舌面中部B.两侧腭弓、咽后壁及扁桃体隐窝C.硬腭D.牙龈答案：B解析：口咽拭子应擦拭两侧腭弓、咽后壁及扁桃体隐窝。二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分。每题有2个或2个以上正确答案，少选得1分，错选不得分。）1.新冠病毒核酸检测可采用的临床标本包括（）。A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.痰液D.肺泡灌洗液E.粪便答案：ABCDE解析：以上标本均可用于新冠核酸检测，呼吸道标本最常用。2.实时荧光RT-PCR实验中应设置的质量控制包括（）。A.阳性对照B.阴性对照C.空白对照D.弱阳性质控品E.内标基因答案：ABCDE解析：完整质控应包括阳性、阴性、空白、弱阳性和内标。3.下列哪些因素可能导致新冠核酸检测假阴性（）。A.标本采集不规范B.病毒载量低于检出限C.标本运输中RNA降解D.反应体系中存在PCR抑制物E.引物结合区发生变异答案：ABCDE解析：以上均为假阴性常见原因。4.关于核酸检测实验室分区和气流，正确的有（）。A.试剂准备区应保持正压B.样本制备区应保持负压C.扩增区应保持负压D.产物分析区应保持负压E.各区物品可逆向流动答案：ABCD解析：各区物品不得逆向流动，E错误。5.含胍盐病毒保存液的作用包括（）。A.灭活病毒B.裂解细胞C.抑制核酸酶D.稳定RNAE.促进病毒复制答案：ABCD解析：胍盐不能促进病毒复制。6.进行新冠核酸检测样本制备操作时，三级个人防护装备包括（）。A.N95口罩或更高级别呼吸器B.防护服C.护目镜或面屏D.双层手套E.靴套或防水鞋套答案：ABCDE解析：三级防护需全面覆盖，以上均需配备。7.防止RNA降解的措施有（）。A.使用无RNase耗材B.加入RNase抑制剂C.低温操作D.避免反复冻融E.使用DEPC处理水答案：ABCDE解析：以上措施均可减少RNA降解。8.在质控成立的前提下，新冠核酸检测结果判为阳性的条件通常包括（）。A.ORF1ab和N基因双靶标Ct值均≤试剂盒阈值B.单靶标Ct值≤阈值，经原样本或重新采样复测仍为阳性C.只要内标基因阳性即可判阳性D.阳性对照成立E.阴性对照无扩增答案：ABDE解析：内标阳性只能说明采样和提取质量，不能单独判阳性。9.实验室可采用的消毒措施包括（）。A.75%乙醇擦拭B.含氯消毒剂擦拭C.紫外线照射D.过氧化氢蒸汽消毒E.高压蒸汽灭菌答案：ABCDE解析：以上均为实验室常用消毒灭菌方法。10.关于新冠核酸检测标本运输，正确的有（）。A.采用三层包装B.外包装应有UN3373标识C.应冷藏运输D.标本可与食物混放E.运输箱外应有生物危害标识答案：ABCE解析：标本严禁与食物混放。三、填空题（共20空，每空1分，共20分。）1.新冠病毒属于______属，其基因组为______。答案：β冠状病毒；单股正链RNA2.鼻咽拭子采集后，应将拭子头浸入含______的采样管中，并在管口折断尾部。答案：病毒保存液（或含胍盐保存液）3.实时荧光RT-PCR中，荧光信号超过______时对应的循环数称为Ct值。答案：设定阈值4.新冠病毒核酸检测最常用的两个靶标基因为______和______。答案：ORF1ab；N基因5.标本采集后应在______小时内送检；若24小时内不能检测，应置于______℃以下保存。答案：4；-70（或-80）6.核酸提取常用的方法有______和______。答案：磁珠法；柱提取法（或硅胶膜柱法）7.实验室台面被病毒污染时，常用有效氯浓度为______mg/L的含氯消毒剂擦拭。答案：10008.UNG酶可降解含______的扩增产物，用于预防PCR产物污染。答案：dUTP9.含胍盐保存液的主要作用为______和______。答案：灭活病毒；裂解细胞并稳定核酸10.试剂准备区应保持______压，样本制备区应保持______压。答案：正；负11.阳性对照成立、阴性对照出现扩增时，提示可能存在______。答案：污染12.靶标基因阴性但内标基因无扩增时，提示______或______。答案：采样不合格；核酸提取失败或存在PCR抑制物13.常用TaqMan探针的5′端标记______基团，3′端标记______基团。答案：报告荧光；淬灭14.新冠病毒分离培养必须在生物安全______级实验室进行。答案：三15.痰液标本在核酸提取前常需加入______进行液化处理。答案：痰消化液（或N-乙酰-L-半胱氨酸等）四、简答题（共4题，每题5分，共20分。）1.简述鼻咽拭子采集的操作要点及注意事项。答案：核对患者信息，向患者解释；操作者采取三级防护；将拭子沿鼻孔缓慢插入，深度约为鼻尖至耳垂距离的2/3，到达鼻咽部遇阻力后轻轻旋转3～5圈，停留数秒后取出；将拭子头浸入含保存液的采样管，折断尾部，旋紧管盖；注意动作轻柔，避免拭子插入过深或用力过猛；观察患者有无不适，防止出血；标本标识清楚并及时送检。2.简述新冠核酸检测实验室的室内质量控制措施。答案：每批试验设置阳性对照、阴性对照、空白对照和弱阳性质控品；检测内标基因RNaseP，监控采样、提取和扩增全过程；定期校准荧光定量PCR仪；验证新批号试剂；参加室间质量评价；记录和分析质控数据，发现失控立即停止报告并查找原因；对实验室环境定期监测。3.列出至少5种导致新冠核酸检测假阴性的原因。答案：采样时机过早或过晚；采样部位不规范；标本保存运输不当导致RNA降解；病毒载量低于试剂盒检出限；核酸提取效率低或失败；反应体系中存在PCR抑制物；引物或探针结合区发生基因变异；试剂失效或操作错误；仪器故障。4.简述实验室防止核酸扩增产物污染的主要措施。答案：严格分区操作，试剂准备区、样本制备区、扩增区和产物分析区物品和人员单向流动；使用带滤芯吸头；在生物安全柜内开盖操作；扩增后产物管不得在样本制备区打开；使用UNG酶防污染；定期用75%乙醇或含氯消毒剂消毒台面和仪器；高压灭菌废弃耗材；监测实验室环境气溶胶。五、综合应用题（共3题，每题10分，共30分。）1.结果判断与复核：某实验室新冠核酸检测试剂盒阳性判断值为Ct≤38。某样本检测结果：ORF1abCt=35.2，N基因Ct=36.8，内标RNasePCt=28.5；阳性对照ORF1abCt=30.1、N基因Ct=31.0；阴性对照无Ct；空白对照无Ct。请判断该样本结果，并说明理由；若结果需要复核，请写出复核流程。答案：该样本判为阳性。理由：阳性对照、阴性对照、空白对照均正常，质控成立；内标RNasePCt=28.5，说明采样和提取质量合格；ORF1abCt=35.2和N基因Ct=36.8均≤38，双靶标阳性，符合阳性判断标准。无需复核。若为单靶标阳性，复核流程为：用原样本或重新采集样本对单靶标阳性靶标进行重复检测，同时可增加另一品牌试剂验证；若复测仍为阳性，判为阳性；若复测为阴性，应结合临床和流行病学资料综合判断，必要时重新采样检测。2.稀释计算与应用：某实验室购买的双链DNA质粒标准品（含新冠N基因片段，长度3000bp）浓度为150ng/μL。请计算该标准品的拷贝数（拷贝/μL），并设计一个两步稀释方案，使最终得到浓度约为1.0×10^6copies/μL的工作标准品，写出各步取液体积和稀释液体积。答案：双链DNA质粒拷贝数计算公式为：拷需稀释倍数为：两步稀释方案：第一步，取10μL原液加入990μL稀释液，得到100倍稀释液，浓度为4.56×10^8copies/μL；第二步，取10μL上述100倍稀释液加入4550μL稀释液，得到456倍稀释，总稀释倍数100×456=45600，最终浓度约为1.0×10^6copies/μL。注意使用低吸附管和带滤芯吸头，稀释液可用TE缓冲液，操作在生物安全柜内进行。3.综合分析：某实验