CN119487152A 改进的测定组合物和方法 （贝克曼库尔特有限公司）

2025.01.02PCT/US2023/0696672023.07.05WO2024/011149EN2024.01.11开内容还描述了用于免疫测定的物质组合物和21-6烷基或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或39.权利要求1至8中任一项所述的容器，其中所述化学发光化合物19.前述权利要求中任一项所述的容器，其中与所述酶缀合的抗体或抗原包含抗肌钙21.权利要求20所述的容器，其中所述免疫测定分析仪或仪器包含使用一次性尖端从仪器性能的反馈的图像捕获装置和/或相机单元、在将洗涤流体添加至反应器皿之前加热模拟电路，其被配置成基于在所述一段时间内从所述测定发射的电压和经优化的线性函数来计算在所述一段时间内从所述测定发射的光子的相对光单位4其中所述免疫测定分析仪或仪器包含使用一次性尖端从样品中取出样品等分试样的模拟电路，其被配置成基于在所述一段时间内从所述测定发射的电压和经优化的线性函数来计算在所述一段时间内从所述测定发射的光子的相对光单位25.权利要求24所述的免疫测定分析仪或仪器，其中所述容器还包含待由所述免疫测其中所述免疫测定分析仪或仪器包含使用一次性尖端从样品中取出样品等分试样的模拟电路，其被配置成基于在所述一段时间内从所述测定发射的电压和经优化的线性函数来计算在所述一段时间内从所述测定发射的光子的相对光单位27.权利要求24至26中任一项所述的免疫测定仪器，其中所述容器包含体积为最多2μ529.权利要求26至28中任一项所述的免疫测定仪器，其中所述样品等分试样是血清等31.权利要求26至30中任一项所述的免疫将底物组合物添加至所述容器或器皿以形成内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+的浓度的3500倍的范围内；并且1-6烷基或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或33.权利要求32所述的方法，其中当所述组合物在37℃下储存多至3天时，所述抗体组34.权利要求32或33所述的方法，其中当所述组合物在2℃至6℃范围内的温度下储存6围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的700倍至游离围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的200倍至游离Zn2+的浓度的3500倍的范围内；的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的100倍至游离Zn2+的浓度的1000倍的范围36.权利要求35所述的方法，其中当所述组合物在37℃下储存多至3天时，所述抗体组37.权利要求35或36所述的方法，其中当所述组合物在2℃至6℃范围内的温度下储存39.权利要求32至38中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物中的所述缓冲剂包含44.权利要求32至43中任一项所述的方法，其中与ALP缀合所述与ALP缀合的抗体包含抗肌钙蛋白(c游离Zn2+的浓度在100μM至500μM的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的150游离Zn2+的浓度在5μM至100μM的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的500倍7游离Zn2+的浓度在50μM至150μM的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的150游离Zn2+的浓度在5μM至100μM的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的700倍d)0.05至20g/L的所述不含有羧酸酯基团的醚连接的非离子表面活性剂；或亲水性聚857.权利要求32至56中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在将所述底物组合物58.权利要求32至57中任一项所述的方法，其中所述方法还包括确定所述样品中分析61.权利要求32至56中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在将所述底物组合物62.权利要求32至61中任一项所述的方法，其中所述怀疑包含靶分析物的样品包含血63.权利要求32至62中任一项所述的方法，其中所述怀疑包含靶分析物的样品是血清64.权利要求32至63中任一项所述的方法，其中所述方法包括使包含分析物的样品与67.权利要求57至66中任一项所述的方法，其中所述方法包括使包含分析物的样品与对所述分析物具有特异性的抗体接触以形成包含所述分析物的复合物，洗涤所述复合物，68.权利要求35至67中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在免疫测定中使用所69.权利要求68所述的方法，其中所述方法还包括在免疫测定中使用所述组合物之前将所述抗体组合物在2℃至6℃范围内的温度下储存多至6个月或多至1年。71.权利要求35至70中任一项所述的方法，其中所述靶分析物包含心肌肌钙蛋白I72.权利要求35至71中任一项所述的方法，其中所述靶分析物包含心肌肌钙蛋白I73.权利要求35至72中任一项所述的方法，其中所述靶分析物包含心肌肌钙蛋白I975.权利要求35至72中任一项所述的方法，其中所述靶分析物包含促甲状腺激素76.权利要求35至72中任一项所述的方法79.权利要求78所述的免疫测定方法，其中所述免疫测定分析仪或仪器包含使用一次分析仪或仪器性能的反馈的图像捕获装置和/或相机单元、在将洗涤流体添加至所述反应模拟电路，其被配置成基于在所述一段时间内从所述测定发射的电压和经优化的线性函数来计算在所述一段时间内从所述测定发射的光子的相对光单位将化学发光底物添加至所述反应器皿，其中所述化学发光底物是式I化学发光化合物1-6烷基或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或83.权利要求78至82中任一项所述的免疫测定方法，其中所述免疫测定方法还包括允许所述化学发光化合物产生信号并对由所述化学发光化合物产生的所84.权利要求78至83中任一项所述的免疫测定方法，其中所述免疫测定方法还包括确85.权利要求78至84中任一项所述的免疫测定方法，其中所述分析物的量根据存储的86.权利要求78至85中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的分87.权利要求78至85中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的分90.权利要求78至89中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的分91.权利要求78至89中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的分92.权利要求78至89中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的分93.权利要求78至89中任一项所述的免疫测定方法，其中通过所述免疫测定检测的所使怀疑包含AFP的样品和与酶缀合的抗AFP抗体接触以形成混合将化学发光底物添加至所述容器或器皿以形成根据由所述反应混合物产生的光来检测所述样品中AF其中所述免疫测定方法的空白限(LoB)为0.08至0.16ng/mL，使怀疑包含TSH的样品和与酶缀合的抗TSH抗体接触以形成混合将化学发光底物添加至所述容器或器皿以形成根据由所述反应混合物产生的光来检测所述样品中TS其中所述免疫测定方法的空白限(LoB)为0.001至0.002uIU/mL，所述免疫测定方法的101.在样品中检测β人绒毛膜促性腺激素(βhCG)的免疫测定方法，其中所述免疫测定使怀疑包含βhCG的样品和与酶缀合的抗βhCG抗体接触以将化学发光底物添加至所述容器或器皿以形成根据由所述反应混合物产生的光来检测所述样品中β其中所述免疫测定方法的空白限(LoB)为0.0至0.1mIU/mL，所述免疫测定方法的检测使怀疑包含T4的样品和与酶缀合的抗T4抗体接触以形成混合物将化学发光底物添加至所述容器或器皿以形成反应混合物；其中所述根据由所述反应混合物产生的所述光来检测所述样品中T其中所述免疫测定方法的空白限(LoB)小于01-6烷基或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或104.权利要求103所述的免疫测定方法，其中所述免疫测定方法使用免疫测定分析仪105.权利要求104所述的免疫测定方法，其中所述免疫测定分析仪或仪器包含使用一定分析仪或仪器性能的反馈的图像捕获装置和/或相机单元、在将洗涤流体添加至反应器模拟电路，其被配置成基于在所述一段时间内从所述测定发射的电压和经优化的线性函数来计算在所述一段时间内从所述测定发射的光子的相对光单位[0002]本发明涉及并要求于2022年7月5日提交的美国临时专利申请序列号63/358,514和于2022年7月14日提交的美国临时专利申请序列号63/389,136的优先权的权益，其各自[0004]碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)是在免疫测定中与比色试剂或化学发或有色荧光信号。在测定中使用的酶(例如AL1-6烷基R12-R13或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或杂环体系函数来计算在一段时间内从测定发射的光子的相对测定分析仪或仪器包含使用一次性尖端从样品中取出样品等分试样的系统、分配控制系统、可用于实时提供关于免疫测定分析仪或仪器性能的反馈的图像捕获装置和/或相机单测定分析仪或仪器包含使用一次性尖端从样品中取出样品等分试样的系统、分配控制系对靶分析物的抗体或与ALP缀合的抗原；包含锌盐和镁盐的缓冲剂；其中当组合物的pH在5.5至6.4的范围内时，缓冲剂游离Zn2+的浓度游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+的浓度的3500倍的范围内；并且其中底物组合物包含：1-6烷基R12-R13或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或杂环体系疑包含分析物的样品与0.1μg至100μg颗粒接触；以及(a)在[0034]在本方面的另一个实施方案中，本公开内容涉及在样品中检测促甲状腺激素应混合物产生的光来检测样品中TSH的浓度；其中免疫测定方法的空白限(LoB)为0.001至定量限(LoQ)为0.0008至0.001uI[0035]在本方面的另一个实施方案中，本公开内容涉及在样品中检测β人绒毛膜促性腺法的定量限(LoQ)为0.1至0.2mI[0036]在本方面的另一个实施方案中，本公开内容涉及在样品中检测游离甲状腺素4将混合物在容器或器皿中进行孵育；将化学发光底物添加至容器或器皿以形成反应混合以及根据由反应混合物产生的光来检测样品中T4的浓度；其中免疫测定方法的空白限[0037]这些不同方面和实施方案并不旨在描述本公开内容的每个公开的实施方案或每[0040]图3示出了定量比较研究的结果，该定量比较研究将DxI9000免疫测定分析仪上[0041]图4示出了根据CLSIEP05_A3在DxI9000免疫测定分析仪上对三个试剂批次中的[0042]图5示出了根据CLSIEP17_A2在DxI9000免疫测定分析仪上对三个试剂批次中的[0043]图6示出了根据CLSIEP06_Ed2在DxI9000免疫测定分析仪上跨3个试剂批次的[0044]图7示出了AccesshsTnI测定的再现性，如根据CLSIEP05_A3在DxI9000和[0045]图8A至图8B示出了定量比较研究的结果，该定量比较研究将DxI9000免疫测定分AccesshsTnI测定进行比较。除了与测定迁移指南中[0046]图9示出了根据CLSIEP05_A3在DxI9000免疫测定分析仪上对三个试剂批次中的[0047]图10示出了根据CLSIEP17_A2在DxI9000免疫测定分析仪上对三个试剂批次中[0048]图11示出了根据CLSIEP06_Ed2在DxI9000免疫测定分析仪上跨3个试剂批次的[0049]图12示出了根据本公开内容的底物LUMI_PHOSPRO(Lumigen,Inc.,Southfield,MI)中包含的APS_5(二氢吖啶磷酸酯)的示例实施方案。[0050]图13示出了当在包含ALP的试剂包在4℃下储存6个月之前(四月曲线)和之后(十[0051]图14A至图14C示出了在37℃下在pH6(图14A)、pH7(图14B)和pH8(图14C)下改变锌和镁的浓度在3天之后对ALP活性的百分比变化的于那些方法中的测定底物和制剂，以及/或者提供相对于现有技术具有改善的性能或其他本文中所述示例实施方案的包含测定底物(例如，内容提供了包含根据本文中所述示例实施方案的测定底物和至少一种测定制剂的组合的混合物在容器或器皿中进行孵育；以及将底物组合物添加至容器或器皿以形成反应混合Zn2+的浓度在5μM至1mM的范围内并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+中使用的术语LoB、LoD和LoQ与CLSIEP17_A2中提供的定义一致。(参见CLSI.EvaluationofDetectionCapabilityforClinicalLaboratoryMeasurementProcedures；ApprovedGuideline–SecondEdition.CLSI文件EP17_A2Wayne,PA:Clinicaland书中的情况下不具有限制性含义。这样的术语将被理解为暗指包括所述步骤或要素、或者步骤或要素的组，而非排除任何其他步骤或要素、或者步骤或要素的组。相比之下，术语“由......组成”意指包括并限于短语“由......组成”之后的任何内容。因此，短语[0063]当在本文中使用时，关于数值的术语“范围内”(intherange)或“范围内”[0064]对于包括离散步骤的本文中公开的任何方法，步骤可以些示例实施方案中，抗体片段通常包含重链可变结构域的三个CDR序列(HCDR1、HCDR2、物活性的抗体片段(例如抗原结合部分)、二硫键连接的Fv(dsFv)和抗独特型(anti_CHH4)构成的恒定结构域(constantdomain，CH)。VH包含三个互补决定区定结构域的两种同种型kappa(ĸ)和lambIgE和IgM。Fc区可以是天然序列Fc区或经改变的Fc区。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒的CH2结构域和CH3结构域。[0073]本文中总体上描述的抗体或其抗原结合片段可包含与靶分析物的表位结合的结性磷酸酶缀合的单克隆抗cTnI抗体与包含表面活性剂的缓冲剂和样品一起添加至反应器[0080]在一些实施方案中，所述方法包括使用ACCESShsTnI(可从BeckmanCoulter,[0081]在一些实施方案中，所述方法包括将cTnI浓度与正常群体中的cTnI浓度进行比常群体中的cTnI浓度之间的差异可用于评估对象的测定平台)上的再现性相比，在DxI9000免疫测定分析仪上进行的cTnI测定的再现性述的示例实施方案表明，对于小于10ng/L的血浆中cTnI浓度，cTnI的测量可表现出小于[0085]同样如本文中所述的示例实施方案所示，对于大于15ng/L的血清中cTnI浓度，[0086]用于计算变化系数或标准偏差(SD)或二者的测量的再现性条件包括地点间清或羊水的样品)中甲胎蛋白(AFP)的浓度捕获装置或相机单元的免疫测定分析仪或仪器中检测AFP。包含根据本公开内容的图像捕获装置或相机单元的示例性免疫测定分析仪或仪器包括但不限于美国专利号11,263,433从BeckmanCoulter,Inc.,Brea,California获得)来检[0092]在一些方面中，所述方法包括使用ACCESSAFP(可从BeckmanCoulter,Inc.,Brea,California获得)来的AFP浓度之间的差异可用于评估对象的[0094]在一些方面中，所述方法还包括使用包含化学发光化合物的底物制剂来测量AFP定平台)相比，在DxI9000免疫测定分析仪上进行的AFP测定的再现性(即，精确度和灵敏制系统和可用于实时提供关于分析仪或仪器性能的反馈的图像捕获装置或相机单元)、本[0097]用于计算变化系数或标准偏差(SD)或二者的测量的再现性条件包括地点间和批善的测定可归因于仪器平台(例如，包括改进例如使者适用于使流体脱气的机械装置)、本文中公开的底物制剂的使用和/或ALP制剂中的一者消耗更少的试剂并且同样提供了每单位试剂的提高的同或相似的测定性能相关，在通常TSH浓度下表现出2％至6％的变化系数(CV)、0.001至[0103]用于计算变化系数或标准偏差(SD)或二者的测量的再现性条件包括仪器间方差抗体优选为单克隆抗βhCG抗体。通常来说，用于检测βhCG的方法可根据上文(对于AFP和批准的测定平台)上获得的再现性相比时，至少维持了在DxI9000免疫测定分析仪上进行于实时提供关于分析仪或仪器性能的反馈的图像捕获装置或相机单元)、本文中公开的底的显著改善，在通常hCG浓度下(即高于LoQ)表现出2.5％至5％的变化系数(CV)、0.0至[0109]用于计算变化系数或标准偏差(SD)或二者的测量的再现性条件包括仪器间方差用于检测游离T4的方法可包含生物素作为特测定平台)上获得的再现性相比时，至少维持了在DxI9000免疫测定分析仪上进行的游离器性能的反馈的图像捕获装置或相机单元)、本文中公开的底物制剂的使用和/或ALP制剂和0.18ng/mL的空白限(LoB)。更新测定还表现出对于游离T4分析物测量的检测限(LoD)和[0115]用于计算变化系数或标准偏差(SD)或二者的测量的再现性条件包括地点间和批仪器平台(例如，包括改进例如分配控制系反馈的图像捕获装置或相机单元)、本文中公开的底物制剂的使用和/或ALP制剂中的一者抗体优选为单克隆抗SHBG抗体。通常来说，用于检测SHBG的方法可根据上文(对于AFP和台)上获得的再现性相比时，在DxI9000免疫测定分析仪上进行的SHBG测定的再现性(即，仪器平台(例如，包括改进例如分配控制系反馈的图像捕获装置或相机单元)、本文中公开的底物制剂的使用和/或ALP制剂中的一者台)上获得的再现性相比时，在DxI9000免疫测定分析仪上进行的CA19_9测定的再现性的反馈的图像捕获装置或相机单元)、本文中公开的底物制剂的使用和/或ALP制剂中的一[0133]与ALP反应的底物包括例如以下的组合：硝基蓝四唑硫化物(nitrobluetetrazoliumchloride，NBT)和5_溴_4_氯_3_吲哚基磷酸酯(BCIP)、对硝基苯磷酸酯(p_Plus(Lumigen,Inc.,Sout703,971中所述。在一些方面中，化学发光底物可包括LUMIGENAPS_5(Lumigen,Inc.,R1选自C5_14芳1_6烷基7或R8_R9或R9_R10或R11_R12或R12_R13或R13_R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳烷基的一吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基[0148]d)0.05至20g/L的不包含羧酸酯R21_4烷基1_4NO3_C622烷基取代的环烷基和经C622烷基单取代或经[0166]在一些另外的实施方案中，底物制剂包含选自以下的醚连接的非离子表面活性剂：聚氧乙二醇烷基醚(BRIJ)、聚氧乙二醇辛基苯酚醚(TRITON)或聚氧乙烯壬基苯基醚[0172]在一些另外的实施方案中，底物制剂在使用中适用于提供一种或更多种测定特[0174]b)在4℃下储存300天之后，在暴露于碱性磷酸酶之后可表现出≤10％的原始RLU[0175]c)当在4℃下储存300天或更长时间时，与原始RLU相比表现出≥90％或≥95％的[0177]e)当在30℃下储存15天之后可表现出的以(％[0180]较新的ALP_反应性底物，例如美国专利号10,703,971中描述的那些和APS_5(图12)，与包含例如LUMI_PHOS530的化合物的市售底物相比，表现出更快的周转时间示，在包含LUMI_PHOS530(LP530)的测定中，观察到很少或没有剂量偏差。在包含LUMI_[0182]当在免疫测定的情况下使用ALP来检测分析物的存在或不存在或者浓度时，剂量抗体或抗原的长期稳定性所需的Zn2+和Mg2+浓度是pH[0185]因为免疫测定在特定pH下进行，并且因为与ALP缀合的抗体和抗原需要在特定pH的范围内，并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+的浓度的3500倍的范的浓度的700倍至游离Zn2+的浓度的1500倍的范围内，游离Mg2+的浓度可在游离Zn2+的浓度至游离Zn2+的浓度的1500倍的范围内，游离Mg2+的浓度可在游离Zn2+的浓度的150倍至游离的范围内，并且游离Mg2+的浓度在游离Zn2+的浓度的200倍至游离Zn2+的浓度的3500倍的范得了与在2℃至8℃下孵育ALP(其类似地包被或缀合)3至6个月相似的结果。可改变ALP中的金属结合位点与一种或更多种金属离子之间的相互作用。[0198]与ALP缀合的抗体可包括适用于免疫测定的任何抗体。本文中使用的术语“抗体”[0201]与ALP缀合的抗原可包括适用于免疫测定的任何抗原。在一些示例性方面中，与度可在游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+的浓度的500倍的范围内。在实施例3D中进一步游离Zn2+的浓度的500倍至游离Zn在游离Zn2+的浓度的150倍至游离Zn2+的浓度的500倍的范围内。在实施例3A中进一步描述且游离[Mg2+]/游离[Zn2+]的比剂以及/或者样品可与组合物、试剂和/或样品的一种或更多种组合来组合、接触和/或混[0212]容器可以是任何合适的容器。在一些方面中，容器可以是包括例如反应器皿Fe2O3至约6g/L、或约0.5至约10g/L的范围内的浓度存在。在一些情况下，化学发光化合物以1-6烷基R12-R13或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或杂环体系分钟)的更旧化学发光底物相比，使用表现出更快周转时间(TAT)的更新ALP反应性底物允[0235]在另一些实施方案中，底物和/或底物制剂提供了提高的测定运行数目/试剂单提供了降低反应中使用的试剂的量同时保持测定性能还可包括使ALP抗体分析物复合物与与固相结合的抗分析物抗体接触，以及洗去未与固和/或疾病风险下的患者群体。所述方法和测定可用于评估患有一种或更多种与靶抗原相者群体的一些非限制性实例包括患有癌症或致瘤性疾病或者处于发生癌症或致瘤性疾病妊娠患者；患有自身免疫病症或者一种或更多种与自身免疫病症相关的临床症状的患者；患者；患有内分泌和/或激素失衡(例如甲状腺失衡)或者处于发生内分泌和/或激素失衡[0244]在又一个方面中，本公开内容涉及用于在样品中检测靶分析物或抗原的试剂用的装置。本公开内容考虑了可包含在试剂盒中的用于进行研究测定和/或诊断测定的组机构规定的形式的通告，该通告可反映该制造、使用或销售机构对用于人用途/诊断的批关于如何适当地解读使用中的特定测定结果的其他信息材料。在一些另外的实施方案中，合物和试剂盒可用于商业销售(例如由BeckmanCoul些实施方案中，所述方法可优选包括使用DxI9000免疫测定分析仪(可从Beckman[0251]免疫测定分析仪或仪器可与如本文中所述的酶和/或酶组合物组合使用。免疫测定仪器或者其一个或更多个特征可与如本文中所述的底物和/或底物组合物组合使用。作为补充或替代，免疫测定分析仪或仪器或者其一个或更多个特征可与如本文中所述的酶[0252]在一个示例性实施方案中，免疫测定分析仪或仪器可将优选光度计。可用于免疫测定分析仪或仪器的示例性光度计包括WO2019060375、WO2020219869和/或美国专利号11,604,146中描述的那些。免疫测定分析仪或仪器还可使经分配的流体物质的确定体积来确定目的颗粒的颗件和/或软件特征)通常在国际专利申请PCT/US2021/0=65852(WO2022/147例如包含流体、流体测定试剂的样品以及/或者包含样品和一种或更多种测定试剂或稀释个管可与加热器或加热元件连接(例如，经由脱气元件或特征的这样的实施方案，可使用和/或改变本领域中已知的因素变化以便控制结合抗体或抗原结合的颗粒。可在颗粒聚集之前和/或之后将洗涤流体添加至颗粒(例如，用任何合适的结构来加热流体。用于加热流体的示例性分配器在例如美国专利号10,562,[0260]提供以下实施例仅致力于更全面地描述和说明本文中所述的一些方面和实施方[0262]实施例中使用的所有试剂、起始材料和溶剂均购自商业供应商(例如Sigma[0263]实施例1_在BeckmanCoulterDxI9000Access免疫测定分析仪上的测定迁移研究[0264]美国FDA针对行业和人员的标题为“体外诊断装置的测定迁移研究(Assay现有系统转移至新系统提供了最少负担的方法。(参见2013年发布的针对行业和人员的指CoulterDxI9000Access免疫测定分析仪包括许多旨在改进实验室工作流程以及提供质及其他益处，包括改善的信噪比和对于内源性碱性磷酸酶干扰的降低的敏感性。BeckmanCoulterAccess试剂的现有菜单正9000Access免疫测定分析仪上在高灵敏度心肌肌钙蛋白I(highsensitivitycardiac系统中AccesshsTnI和Acc[0268]使用基于CLSIEP05_A3的方案(参见，CLSI.EvaluationofPrecisionofQuantitativeMeasurementProcedures；ApprovedGuideline_第三版.CLSI文件EP05_[0269]在三个外部临床实验室中的三台DxI9000和三台Access2免疫测定分析仪上评价再现性。测量跨测定范围的血清和肝素锂血浆样品二者的hsTnI，同时测量血清样品的AFP。在三个测试地点中的三台免疫测定分析仪的每一台上对样品进行测试，每天运行两完成了比较DxI9000免疫测定分析仪上的AccessAFP测定与Access2免疫测定分析仪上PatientSamples_第三版.CLSI文件EP09c,第3版.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute；2018；和上文引用的FDA迁移指南)在三个外部实验室的三台DxI9000免疫测定分析仪和三台Access2免疫测定分析仪上进行[0272]对包含跨该测定分析性测量范围的hsTnI浓度的>240份血清样品和>180份肝素锂血浆样品进行测试。对>200份包含跨该测定分析性测量范围的AFP浓度的血清样品进行测[0275]使用基于CLSIEP05_A3的方案(参见，CLSI.EvaluationofPrecisionofQuantitativeMeasurementProcedures；ApprovedGuideline–第三版.CLSI文件EP05_DxI9000免疫测定分析仪上的AccesshsTnI测定和AccessAFP测次进行。测量跨测定范围内的血清和肝素锂血浆样品二者的hsTnI，同时测试血清样品的[0278]使用基于CLSIEP17_A2的方案(参见，CLSI.EvaluationofDetection第二版.CLSI文件EP17_A2.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute；2012.)进行研究，以确定AccesshsTnI测定和AccessAFP测定的空白限(LoB)、检测限[0279]为了估计LoB，在研究设计中使用三台DxI9000免疫测定分析仪与三个试剂批次和一个校准物批次。将每个相应测定的四种S0校准物制剂用于LoB确定。对于每种包装批0.0028uIU/mL的范围内，并且LoQ在约0.0003至约0.0015、约0.0005至约0.0012、或约[0287]基于CLSIEP06_Ed2(参见，CLSI.EvaluationofLinearityofQuMeasurementProcedures.CLSI文件EP06_Ed2.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute；2020.)进行研究，以评估DxI9000免疫测定分析仪上的AccesshsTnI测定和AccessAFP测[0293]在DxI9000Access免疫测定分析仪上生成的AccesshsTnI和AccessAFP测定的上的ALP孵育3天实现了与在4℃下将包被在PMP上的ALP孵育6个月几乎相同的结果。[0296]然后在DxI800免疫测定分析仪(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上评估经ALP仪上。该系统将颗粒洗涤以清除储存溶液，并随后用LUMI_PHOSPRO(Lumigen,Inc.,允许于37℃在pH8下超过3天的ALP[0298]表1详述了作为pH函数的金属物质与牛肠ALP的M3位点之间经估计的表观解离常678[0302]该实施例描述了组合物中游离镁和锌离子浓度的优化，其中ALP与用于特定免疫抗AFP_碱性磷酸酶缀合物和用第二小鼠单克隆抗AFP抗体包被的顺磁性颗粒的反应器皿水样品)装载至DxI9000免疫测定分析仪上。免疫测定分析仪将经稀释的样品等分至各个[0307]为了进行免疫酶测定，免疫测定分析仪向每个RV分配52μg包被有抗AFP抗体的顺[0308]包含与ALP缀合的小鼠单克隆抗AFP抗体的组合物的pH为6。将组合物优化为包含15mM的MgCl2和100μM的ZnCl2，导致估计的游离Mg2+浓度为15mM并且估计的游离Zn2+的浓度[0310]本实施例描述了用于检测样品中β人绒毛膜促性腺激素(βhCG)的免疫测定。该实[0312]使用一次性移液器尖端将13μL包含一定浓度范围的βhCG的血清样品(或替代地，血浆样品)装载至DxI9000免疫测定分析仪上。免疫测定分析仪将样品等分至各个反应器[0314]包含与ALP缀合的兔抗βhCG抗体的组合物的pH为6。将组合物优化为包含32mM的MgCl2和50μM的ZnCl2，导致估计的游离Mg2+浓度为32mM并且估计的游离Zn2+的浓度为35μM。离Zn2+的浓度是基于白蛋白和Zn之间的结合，并且不包含与ACES的较弱/较复杂的相互作用。[0318]使用一次性移液器尖端将30μL包含一定浓度范围的(游离)T4的血清样品(或替代g经链霉亲和素包被的顺磁性微粒(PMP)和与ALP缀合的三碘甲状腺原氨酸(T3)。将RV管的抗cTnI抗体与包含表面活性剂的缓冲剂和样品一起添加至反应器皿。在短时间孵育之后，cTnI抗体_ALP缀合物与cTnI分子上的不同抗[0324]使用一次性移液器尖端将50μL包含一定浓度范围的cTnI的血清样品(或替代地，血浆样品)装载至DxI9000免疫测定分析仪上。免疫测定分析仪将样品等分至单独的反应[0330]检测hTSH的测定是双位点免疫酶促(“夹心”)测定。将样品添加至具有小鼠抗hTSH_碱性磷酸酶缀合物、缓冲蛋白溶液和包被有经固定的小鼠单克隆抗hTSH抗体的顺磁[0331]使用一次性移液器尖端将25μL包含一定浓度范围的hTSH的血清样品(或替代地，血浆样品)装载至DxI9000免疫测定分析仪上。免疫测定分析仪将样品等分至各个反应器[0332]免疫测定分析仪向每个管分配13μg包被有抗hTSH抗体的顺磁性微粒(PMP)。免疫[0333]包含与ALP缀合的小鼠抗hTSH抗体的组合物的pH为6。将组合物优化为包含8mM的希望受理论的束缚，认为需要另外的ZnC已知浓度的分析物，使用免疫测定试剂组合物来测量LUMI_PHOS530(Lumigen,定试剂组合物包含ALP但其中没有配制Mg/Zn比率以优化所有条件下的ALP活性。然后将免疫测定试剂组合物在4℃下储存6个月(从四月至十月)。再次使用LUMI_PHOS530和LUMI_[0340]其中所述测量包括使用针对靶分析物的抗体或与靶分析物相关的抗原来检测靶[0341]其中所述方法还包括使用包含化学发光化合物的底物制剂来测量靶分析物的浓[0342]一些示例性方面涉及包括如下A1至A12和/或B1至B10中的任一项或更多项的方1-6烷基R12-R13或R13-R14可作为包含至少一个5元或6元环的碳环或杂环体系[0368]d)0.05至20g/L的不包含羧酸酯[0372]A10.A1至A6或A9中任一项所述的方法，其中cT[03