复方中药克痹骨泰胶囊的质量标准研究

复方中药克痹骨泰胶囊的质量标准研究【摘要】目的研究与修订克痹骨泰胶囊的质量标准。方法采用TLC方法对克痹骨泰胶囊中的血竭、白花蛇舌草进行定性鉴别；应用HPLC法，选用ZORBAX-C18色谱柱，乙腈－mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，检测波长440nm，流速ml/min，柱温35℃，对克痹骨泰胶囊中的血竭素进行含量测定。结果血竭、白花蛇舌草的TLC鉴别方法专属性强，简单可行。HPLC含量测定，血竭素进样量在22～8μg范围内与峰面积成良好的线性关系；血竭素的回收率为%，RSD=%。结论该方法可对克痹骨泰胶囊的主要药味进行准确的定性或定量测定，能更为有效地控制克痹骨泰胶囊的质量。

【关键词】克痹骨泰胶囊质量标准薄层色谱法高效液相色谱法

克痹骨泰胶囊是由石见穿、白花蛇舌草、延胡索、没药、血竭、土鳖虫、巴戟天7味药材制成的中药成方制剂。国家食品药品监督管理局颁布的克痹骨泰胶囊标准［WS3-017(Z-003)-2000(Z)］规定了对血竭、白花蛇舌草、延胡索的TLC鉴别和血竭素的含量测定［1］。但此标准规定项下白花蛇舌草鉴别，所得TLC检测结果不明显，不能很好的达到鉴别的目的；血竭的鉴别中所使用的提取溶剂苯毒性较大；含量测定用薄层扫描法本身有较大测定误差。本实验修订了血竭、白花蛇舌草的TLC鉴别，并建立了高效液相色谱法测定克痹骨泰胶囊中血竭素的含量，旨在为药品检验工作提供更为安全、有效、精确的定性定量测定方法。

1仪器与试药

高效液相色谱仪：Agilent1100高效液相色谱仪

克痹骨泰胶囊样品由郑州益康药物研究所提供；血竭素高氯酸盐对照品；血竭药材对照品；白花蛇舌草对照药材；

薄层硅胶板；乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、甲苯、苯、三氯甲烷、正己烷等为分析纯。纯净水为自制双蒸水。

2TLC鉴别

血竭的TLC鉴别取本品内容物5g，研匀，加甲苯20ml，超声处理60min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品；另取血竭对照药材g，加三氯甲烷10ml，振摇30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；取缺血竭阴性样品，同法制成阴性样品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本法经阴性对照实验及3批样品实验观察，确认本法可行。

白花蛇舌草的TLC鉴别取本品内容物5g，加硅藻土2g，研匀，加乙醇50ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加10%甲醇溶液10ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，15ml/次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。取白花蛇舌草12g，加水煎煮3次，滤过，滤液浓缩至近干，加硅藻土1g，研匀，加乙醇50ml，同法制成对照品药材溶液；取缺白花蛇舌草阴性样品，同法制成阴性样品溶液；照薄层色谱法［中国药典2005年版一部附录VIB］试验，同一硅胶G薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本法经阴性对照实验及3批样品试验观察，确认本法可行。

3含量测定

色谱条件ZORBAX-C18色谱柱；乙腈-mol/L磷酸二氢钠为流动相；流速ml/min，检测波长440nm；理论板数按血竭素峰计算应不低于3000。

上述色谱条件参照《中国药典》［2］2005年版Ⅰ部血竭项下【含量测定】项下方法拟订，在上述条件下，血竭素峰与相邻色谱峰可获得基线分离，分离度大于。

溶液的制备

对照品溶液的制备精密称取血竭素高氯酸盐对照品mg，置50ml棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置5ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/)。

供试品溶液制备取装量差异项下的本品，研细，取约g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入3%磷酸甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理5min，放冷，再称定重量，用3%磷酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

缺血竭的阴性对照溶液的制备依据处方中的比例，按制法制备缺血竭的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。经进样检验阴性无干扰,结果见图3。

线性关系的考察精密取血竭素高氯酸盐对照品溶液，分别制成浓度为，，，，ug/ml的溶液(以血竭素计)，分别注入高效液相色谱仪，进样量10μl，记录血竭素峰面积,以峰面积积分值Y为纵坐标，血竭素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=78X+19e-1，r=97。表明血竭素进样量在22～8μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度实验取同一血竭素高氯酸盐对照品溶液10μl注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，RSD为%。

重现性实验按照正文含量测定方法，取装量差异项下同一批号样品，分别制备6份供试品溶液，分别进样测定血竭素峰面积，计算血竭素含量平均值为mg/粒，RSD=%。

稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8h进样10μl，测定血竭素峰面积，RSD为%。结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。

加样回收率实验取同一批号已知含量供试品30粒，精密称定重量：g，平均粒重9g/粒，研细，精密称取g，共取6份，均分别加入血竭素高氯酸盐对照品适量，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样量10μl，测定并计算，平均回收率为%，RSD=%

十批中试样品含量测定按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液并对10批中试产品进行含量测定，测定结果见表1。表1样品测定结果

根据测定结果，拟定本品每粒含血竭以血竭素计不得少于mg。

4讨论

血竭的TLC鉴别，原标准中的提取溶剂苯毒性较大，本实验用甲苯取代之，降低了实验对操作人员的毒性损害，且分离效果不变。但有待于发现毒性更低、更安全的提取溶剂。

白花蛇舌草的TLC鉴别，按照标准中的提取方法及展开条件实验，干扰成分多，分离效果不佳；采用修改后的提取方法及展开方法，分离效果良好。

a-对照品溶液b-供试品溶液c-阴性对照品溶液

图3高效液相色谱图

血竭的含量测定，克痹骨泰胶囊原标准中含量测定项是用薄层扫描法测定方中血竭的含量，因为薄层扫描法本身测定误差较大，笔者在《中国药典》血竭含量测定［2］的基础上，参照部分文献［3～5］，通过实验建立了高效液相色谱法测定血竭中血竭素的含量并对该方法进行了方法学验证，样品实测结果表明方法简单、可行。

通过以血竭和白花蛇舌草的TLC鉴别，以血竭素的HPLC含量测定，对克痹骨泰胶囊的主要药味准确的进行定性或定量测定，可以科学、有效的控制克痹骨泰胶囊的质量。

血竭竭素稳定，溶液应临用时配制，制成溶液后应装在棕色量瓶中并置凉暗处保存。

【参考文献】

［1］国家食品药品监督管理局.国家药品标准.WS3-017(Z-003)-2000(Z).2003:28.

［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：94，96.

［3］王常禹，牛博.HPLC法测定骨折挫伤