高效液相色谱法测定维生素C

1、高效液相色谱法测定维生素c高效液相色谱已成为解决生命科学、医学发展中各种问题的重要手段，在实验室中广泛应用于物质的定性和定量分析。本实验采用高效液相色谱法定量分析维生素c，建立了标准溶液浓度和峰区标准曲线，定量检测样品中维生素c的方法。【关键词】高效液相色谱、维生素c、含量1，简介维生素c也称为抗坏血酸，是水溶性维生素。Vc参与了生物体内的各种反应，例如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用和细胞呼吸中起着重要作用。人体缺乏Vc容易引起坏血病。Vc是水溶性很强的抗氧化剂，还参与胶原的合成，因此具有预防抗癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化、提高人体免疫力等功效。Vc在蔬菜和水果中很常见，尤其是柑橘类

2、水果的含量很高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果的Vc含量为50-300 mg/100 g。溶于移动相的每个组与固定相作用的大小(吸附、分布、离子吸引、排除、亲和力)不同，因为固定相上的停留时间不同，所以从固定相依次流出。高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)在经典液相色谱的基础上，于60年代末引入了气相色谱理论，得到了快速发展。与经典液相色谱不同，具有高热效果的小而均匀的填充物粒子必须引起高电阻，以高压输送流动相，因此也称为高压液相色谱(HPLC)。HPLC系统通常由注入泵、取样器、柱、检测仪、数据记录和处理装置等组成。在这里，

3、注入泵，柱，探测器是关键部件。拔模洗脱装置、在线脱水机、自动注入机、预柱或防护架、柱温度控制器、现代HPLC设备具有自动仪表控制和数据处理的计算机控制系统。准备HPLC设备还配备了自动馏分收集设备。2、HPLC测定维生素c的含量2.1，仪器试剂2.1.1，设备高效液相色谱(agilent 1260)；柱：C18列(250mm 4.6mm，I . d . 5m)；上鼓头取样器。2.1.2，试剂乙腈(色谱纯)、冰醋酸、维生素c、磷酸二氢钾等都是分离纯，实验用水是超纯水。Vc标准溶液：快速准确地取0.025 g Vc，溶解为1 mol/L乙酸溶液，从250 mL容量的瓶子定量输送，用1 mol/L乙

4、酸溶液指定一定体积，备用为100 mg/L标准溶液，目前使用。2.1.3，色谱条件移动：乙腈-0.05 mol/LKH2PO4水溶液(v/v/v)；流速1ml/min；温度30，紫外线检测波长265nm注入量10 L2.2，实验阶段2.2.1，试样状态1、按照操作说明打开液相色谱仪，设置方法参数。2、准备样品：取10片维生素c片，好好研究。准确地取0.02g，用1 mol/L乙酸溶液溶解，定量转移到50 mL容量的瓶子，用1 mol/L乙酸溶液定量，用0.45m滤膜过滤。3，绘制标准曲线：5，20，50，80，100mg/l制备Vc样品溶液，液相色谱稳定后样品分析，3次平行测定。用Vc色谱峰区

5、对浓度绘制标准曲线。4、定量分析：0.45 m微孔滤膜过滤后的试验液进行HPLC分析。并行测量2次，记录该Vc的色谱峰面积，根据校正曲线测定维生素片Vc的含量。5、实验结束后，根据需要清洁设备。3、数据处理不同的Vc浓度对应于色谱峰面积图浓度mg/L5205080100峰值面积mAU*S146.73135592.211431509.6016012428.493903050.15918Y=30.58x-14.146 R2=1Y(sample)=1892.33813替代x=62.34mg/L4、实验结果讨论本实验中使用的定量分析方法是外部标准法，即标准修正法。这种方法直接，操作方便，计算简单。但是

6、标准和测量组分为统一化合物，分离，检测条件的稳定性对定量结果有很大影响。除了此方法外，常用的定量分析方法还有内部标准方法、峰面积归一化方法。对于定性分析，常用方法还具有保持值的定性、与已知相对的定性、保安柳树经验法的定性特性。另外，还有选择性检测响应定性、色谱-结构分析仪等方法。分析未知物质时，首先要找出该化合物的化学物理常数，然后选择合适的样品处理方法，使样品回收率高，干扰成分少；对于分离分析，在使用紫外线检测器之前，首先要通过扫描化合物的吸收波长找出最大吸收波长，移动相首先要用纯和乙腈或甲醇进行不同比例的调整，确保峰值时的干扰和一定的分离度，然后根据峰和化合物的pKa值调整水相的pH值，找出最佳流动相系统。气相色谱仪分离选择性好，热效应高，速度快，检测灵敏度高，样品用量低，应用范围广。但是气相色谱仪也有一定的局限性，如果没有纯样品，样品中未知物质的定性和定量更难，往往与红外光谱、质谱等结构分析仪器相结合，对非等点高、热稳定性差、腐蚀性和反应性强的物质，气相色谱仪