溶出曲线详解概要

1、谢沐风 xiemufeng,论溶出度试验,对于口服固体制剂的重要意义, 对仿制药研发“两座大山”的深入解析（溶出度部分）,请大家将手机调至“振动”档！(包括闹钟、叫醒、工作安排、约会等) 谢谢您的配合！,本人工作经历与行业成长史的融合, 1990年1998年 本科（5年）+ 硕士研究生 1998年至今 在上海市药品检验所工作至今 经历了“1998年2002年强仿期”和“20022006仿制药疯狂期” 十分了解行业现状、内幕 在2003年赴日本进修前，对国内仿制药研发中出现的种种乱象疑惑不已，对其中的核心技术要素找不到科学合理的答案。 带着太多的疑问踏上了征途, 2003年8月 2004年2月

2、承蒙单位领导厚爱、公派赴日本国立医药品食品卫生研究所药品部（即国家药品检验所）进修，主要收获如下： (1) 通过翻阅该国仿制药与创新药申报资料，并在老师指导下，掌握了技术审评要点与审评“门槛”，知晓了我国仿制药审评中存在的一些技术缺失 （引申至技术门槛与批准数量的关系）, 如口服固体制剂仿制药研发要求 连续三批、每批10万片。 批批样品多条溶出曲线均与原研品一致 （再辅以有关物质的“锦上添花”） 今后市场抽查只抽“多条溶出曲线”,(2) 掌握了药物各剂型关键评价指标与检测方法，即药品质量不仅可以生产出来，也可以检验出来。关键就看设定的检测法/检测指标能否“一针见血、切中要害”，这也是我们药检人

3、员工作中应不懈追求的挑战！ 从而指导我们如何更科学有效地开展工作 （口服固体制剂关键性评价指标多条溶出曲线 ）, 片剂/硬胶囊 ：多条溶出曲线/释放曲线、崩解时限（如需要）、有关物质、含量均匀度、硬度/脆碎度。 注射用粉末： (1) 表面层次指标：有关物质、溶液颜色、溶液澄清度、水分、pH值、无菌、热原/内毒素和不溶性微粒等。 (2) 深层次指标：粒度分布、粒子形状、晶型、晶格能、比表面能、分散性、流变学特性等 复溶/溶解时间,列举各剂型关键性评价指标,(3) 其时恰逢该国药品品质再评价工程如火如荼开展，师从该项工程技术负责人，全面系统地学习了溶出度技术理念与应用。 该国彼时情况与我国现今极为

4、相似，日本采用“体外多条溶出曲线对已上市口服固体制剂进行了与原研品一致性的再评价工作” 。 （该国注射剂仿制药很少，无必要进行）。,(4) 系统学习了ICH Q系列指导原则 该系列指导原则是本行业的精髓与核心，可谓“武林秘籍”和“葵花宝典”，如能融会贯通、举一反三，定可成为业内研发高手！,回国后所做的主要工作：,一、撰写了多篇药品质量评价文章（主要为溶出度 文章），在国内率先提出“采用体外多条溶出 曲线进行口服固体制剂研发与品质评价”的 理念和观点。 二、2009年伊始，在国内知名药学网站丁香园 开办了“溶出度研究”专栏；其上文章迄今为止 已成为国内做口服固体制剂仿制药研发的必 读手册。,三、

5、2009年5月起，担任国家食品药品监督管理局 市场监督办公室顾问，在“全国评价性抽验 工作”中全面引入了体外多条溶出曲线这一检 测手段，收到显著效果。 四、2010年，为国家药品审评中心翻译了日本 橙皮书 近700个品种的溶出曲线数据库。 五、2012年6月起，作为专家组成员参与到国家仿 制药一致性评价工作中。负责撰写如何测得 原研品多条特征溶出曲线指导原则和如何比 较仿制制剂与原研制剂体外溶出曲线指导原则 以及各品种具体测定法。,本 人 体 会, 工作中一定要注重思考，带着问题去学习、有的放矢地去攻读，多查文献、多领会，日积月累、潜移默化之中就会水到渠成、瓜熟蒂落！ 思维要开放、活跃，不要固

6、步自封、按部就班，因循守旧。 研发人员的思路与方向极为重要。大量的交流令我深感：由于方向性错误、固有概念性错误、固有思维的局限，导致许多人力、物力、财力与时间的浪费！,十分荣幸有这样一个机会 与大家交流、研讨！,寄望大家在这一天时间里，多思考、多提问！,对固体制剂的关注点与着眼点：, 疗效才是硬道理 即生物利用度 ！客观看待安全性 ！,对质量标准中各项指标的深入剖析, 含量（均匀度）没有任何技术含量。 深入讲述制剂生产过程 仅是将一物件使成均匀状后按照一定规格制作而已。 阐述含量与生物利用度几近无关的根据所在。 一定牢固树立“吃药不是吃含量、而是吃生物利用度”的科学理念！,对质量标准中各项指标

7、的深入剖析, 有关物质与毒副作用的关系 能够建立起准确测定杂质的检验方法固然重要，但与主药在体内吸收的重要性相比就显得无足轻重了。因为如果主药尚无有效吸收、主体吸收，即便有12%杂质存在也无关痛痒了！除非一些明确的、毒性较强的杂质。 毒副作用的引起往往由低劣辅料所致！,只有溶出度/释放度才是, 这里所指的溶出度/释放度是指：在多pH值溶出介质中溶出曲线的测定，绝非一个介质、一个时间点、一个限度的测定！ 该测定已成为“剖析”和“肢解”原研固体制剂内在品质一种擘肌分理、抽丝剥茧的重要手段；成为固体制剂内在品质呈现于外在的一种“表象”、“映射”与“载体”。,“固体制剂内在品质的灵魂与核心所在”！,溶

8、出度核心理念 多条溶出曲线是 口服固体制剂的 “指纹图谱”！ ,“多条溶出/释放曲线的测定”,(1) 可用于评价不同来源同一制剂内在品质差距，从而为彼此间临床疗效差距提供佐证，国家评价性抽验就采用了该理念（效仿日本作法）。 (2) 可用于固体制剂药物研发与质量评价。 (3) 可用于生物等效性试验的前期预测。 (4) 可用于各类变更的评价。 (5) 可用于与口服固体制剂内在品质相关的所有环节。,不同来源的同一药品间生物利用度差异,A 药厂 / 原研制剂,疗效差,B 药厂 / 仿制制剂,疗效好,制药行业作为高科技行业的体现在哪里？,两者为什么会有差异? 两者血药浓度为什么不一致?,仿制药研发的瓶颈

9、在哪里？,药品疗效的优劣主要表现在 一个高品质药品（如原研制剂），患有该疾病的任何人群服用都会有一定的疗效和作用，即有效性广。 一个低品质药品（如仿制制剂），可能只会对患有该疾病的某一部分人群有效（如体内环境正常者），而对另一部分病人疗效甚微（如胃酸缺乏者、年老体弱者），即有效性低。,体外溶出度试验,体内消化道,生物利用度与体外溶出度试验的相关性，这一点已被人们所知！,疗 效 的 优 劣,体内生物利用度的差异,体外溶出曲线的不同,制剂的优劣,关键、核心,如何将原料制成（固体）制剂,即如何科学、有效地进行 制剂工艺/处方/辅料的筛选,主要评价：溶出度试验,溶出度试验的重要意义,消化道,Table

10、t,到达作用部位,崩解,溶 液,溶出,环境（用pH 值表达） 蠕动强度（虽年龄增长、减弱）,人体消化道中最为关键的两个参数,人体内消化道各器官的变化范围,消化道各器官,变化范围,胃,pH,1.2 - 7.6,表面张力 (dyne/cm2),35 - 50,胃液体积 (ml),5 - 200,十二指肠,pH,3.1 - 6.7,收缩压 (mmHg),5【P 为在正辛醇/水中的分配系数】； 分子量超过500，尤其是1000以上的多肽类药物或具有大分子团结构式的抗生素类药物。,如何测定药物渗透性？,目前，在创新药物研发时，对于具有生理活性的新化合物是否适合制成制剂，是否有待做进一步的结构式修饰与调整

11、后再制成制剂等问题上，对该结构式药物进行前期溶解性与渗透性研究将发挥决定性作用。所以、对于新型、前体药物的此部分研究愈发受到重视与瞩目；因此，设计出多种模拟人体的模型用于此项研究，现阶段在全球制药业基础研究领域中正如火如荼、方兴未艾般地展开着！,如何测定药物渗透性？,以上理论虽知晓，但要确定某药物的渗透性仍感“力不从心”！好在美国口服药物传递研究公司（Therapeutic Systems Research Laboratories Inc，简称TSRL公司）在该公司网站提供了免费查询系统，网址为：01/,如何测定药物渗透性？,缓控释制剂研发成为近两年热点。（

12、研发移交） 出现问题与关注热点 (1) 参比制剂的选择，如研发“硝苯地平缓释片”。 (2) 对工作难度、资金投入、时间消耗认识不足，依然秉承老观念。 (3) 对制药机械设备与分析仪器上的投入不足。 (4) 申报时如何规避无进口注册证的辅料（申报技巧）。 (5) “缓释掰服片”的研发是一个卖点。（讲述质量评价要求）,目前国内研发现状,秉承国家药审中心提出的“仿产品不是仿标准”，现今研发仿制药正确思路如下： 第一步：查询既有质量标准：各国药典、国家药监局标准、进口质量标准以及其他资料日本橙皮书、美国溶出曲线数据库以及美国临床用药手册（PDR）、国内已发表文献。 日本仿制药技术申报资料概要（采用“医

13、薬品”在Google上收索即可查询到，内容仅为日文）。,现今仿制药研发思路 ,第二步：取13批原研品，用多条溶出曲线循序渐进般“剖析与肢解”后（再辅以有关物质的厘清），如既有质量标准与研究论证结果相符（既溶出度试验各参数），证明既有标准科学客观，可参照。如发现既有标准制订得不合理、无法正确反映该药品应具有的内在优良品质，此时决不能画地为牢、以讹传讹，应更改。 相信，药审中心老师肯定会欢迎此种更改，因为这充分说明该研发人员的“艺高人胆大”！（呵呵）,现今仿制药研发思路 ,第三步：自身仿制品的开发，从小试、中试、放大直至具备一定生产规模。每一阶段样品的多条释放曲线皆应与原研品一致。 研发进程中、9

14、0%工作量在调溶出/释放曲线。 研发时间：速释制剂 处方筛选与制剂工艺研究/3个月 + 加速试验/3个月 = 约半年/个。缓控释制剂：1.0 1.5年。 工作量：速释制剂 / 400500条曲线测定 缓控释制剂 / 10001200条曲线测定。 费 用：,现今仿制药研发思路 ,第四步： 深刻理解与把握研发进程中的“度” ！ 切忌“用力过猛、陷入窠臼”！ 搞技术不是搞艺术！ 如何事半功倍地进行研发工作？,现今仿制药研发思路 ,(1-1) 投样方式（桨板法） 采用每间隔固定时间（如30秒）投样。 (1-2) 滤头/针筒的取用 建议采用“1个滤头/1个取样针筒方式”进行多样品抽取。第1份样品抽取10

15、20ml后，过滤使滤膜吸附饱和，并将滤液沿溶出杯壁缓慢注回，再抽取所需体积（如HPLC法、12ml即可）即可，其后所有样品无需再弃去初滤液，直接收集。,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,(2) 尽可能采用HPLC法。一者可排除辅料/薄膜衣/肠溶衣/胶囊壳等易对紫外测定产生干扰的情况；二者，由于线性范围宽，样品均可直接进样测定，省略了紫外测定要求吸收度值在0.200.80间、样品需稀释的繁琐步骤，大大提高了工作效率。,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,(3-1) 采用短色谱柱 市售有25cm长、粒径510m的短分析柱、 (3-2) 提高流动相中有机相比例。如此，虽然有杂质与主

16、成分未能分离的担忧，但考虑到样品已被稀释1000倍（溶出介质体积通常为9001000ml），在此条件下，存在的微量杂质响应值已微乎其微，即便有所表现，其影响对于结果而言亦是完全在误差范围之内，可忽略不计。,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,(4) 柱温升高至4050。色谱柱最高承受温度为80，在60以下操作没有问题。 (5) 流速亦可根据柱压提高至1.52.0ml/min。 (6) 进样量可依据对照品溶液的精密度予以灵活调节。100l500l皆可。且对于小规格制剂，为提高精密度，缩短保留时间，使色谱峰“变细变尖（锐）”更为重要。采用10%溶出量验证精密度。,如何准确、快捷、高效地测定

17、大批量溶出度样品,(7) HPLC法测定时取样量12ml即可。对于小规格难溶性药物，可考虑取出后无需过滤，直接置于液相小瓶、放置0.5小时后进样即可。 因为在取样点位置处，吸取这么小体积携带出辅料的可能性极小，即便有少量存在，静置后使其沉淀，就不会影响到测定，更不会堵塞色谱柱。 这样，还可省略去溶出量累积计算的繁琐以及过滤时滤膜吸附的担忧，起到“一举多得、事半功倍”的效果！,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,(8) 波长可根据峰面积，酌情选取末端吸收或非最大吸收波长（详细讲述）。 (9) 如采用超高速液相测定，效果自然更好！但由于色谱柱粒径较小，样品液若不过滤，恐堵塞色谱柱，建议试验

18、时验证后予以酌情考虑。,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,(10)现今市场上主流品牌色谱仪皆已具有数据批量处理功能和打印功能（多张图谱结果打印在一张纸上），将这些功能掌握后一次性编辑好模板，便可大大提高工作效率。 本人曾在20分钟内完成200个样品的数据处理（得到溶出量），每一溶出量数据直接从软件中拷贝出、粘贴至Excel软件中、画出溶出曲线图的全部过程。 (11) 如何进行累积计算，演示Excel软件具体实例。,如何准确、快捷、高效地测定大批量溶出度样品,如何拟定质量标准中溶出度试验条件 装置与体积的设定 片剂 首选 桨板法/50转 胶囊剂 首选 转蓝法/50转，如体积过大或粉末过

19、多堵塞网孔，可改为桨板法/50转、加沉降蓝。 溶出介质体积统一采用900ml1000ml。 强烈不建议采用小杯法。, 溶出介质的选择 (1) 在该介质中最终溶出量应达85%以上。 (2) 在体内吸收部位的生理pH值。 (3) 建立起体内外相关性的那个介质。 (4) 最有区分力的介质（对于来源不同的同一制剂）。 (5) 最能反映工艺变化、偏差的那个介质（用于处方变更、生产场地的变更、工艺中关键参数的控制，即现在最耳熟能详的QbD理念） (6) 最难溶的、即四条曲线中最低的介质 （用于内控）。 (7)精密度更佳的介质。,延伸至 质量标准中应采用何介质？ 美国 倾向于不用水，因受pH值影响！ 日本

20、倾向于用水。 为环保、节能、清洁，便于清洗！,延伸至 质量标准中取样时间点与限度如何拟定？ 对于速释制剂 以第一次出现溶出量均在85%以上的两个时间点，且该两点溶出量差值在5%以内时，取前一个时间点作为质量标准中的取样时间点，并将该点的溶出量减去15%作为溶出限度，即得！（故仅有70%、75%、80%、85%四个数值） 国外已开始有两点法控制。对于治疗窗狭窄药物 / 难溶性药物 / 需要缓慢释放等的药物。增加前一时间点溶出度范围的要求！,对于缓控释制剂如何拟定取样时间点与限度如何拟定？ 溶出度应至少设定三个取样时间点。第一点是为避免“突释”，故应设定为试验12小时后或溶出量相当于标示量2030

21、%时间点； 第二点是为考察药品溶出特性，该限度应设定在溶出量约50%时间点；最后一点是为确保药物（几乎）定量释放，通常为药物溶出量超过80%时间点。 任何一点的拟定范围建议勿超过标示含量的20%，且各点溶出限度交叉范围建议勿超过10%。 溶出介质首选水、绝不建议采用酸介质。,国内以前的研发现状,与已上市产品质量,略 （你知道的！呵呵） 此处需提醒的是：国内已上市药品质量皆值得商榷，故不能作为现今仿制药研发的参比制剂！,概括而言 原第一阶段：研发阶段 错误理解溶出度理念 原第二阶段：生物等效性试验（现实情况不允许失败） 第三阶段：上市了、销售了（拼价格、肉搏战！） 第四阶段：上药典或标准转正时的

22、出发点（为了让你合格，你能不合格吗？想不合格都难！） 第五阶段：临床疗效差强人意！,作为企业的思考！ 如何在全国众多的仿制产品中、脱颖而出，独执牛耳？（取国外原发厂家产品比较各 pH条件下的溶出度曲线） 市场销售的切入点？是以价格取胜，还是以技术取胜？（与其他各厂家产品的比较） 介绍以色列和印度的作法；扎扎实实地做好仿制药、做好“普药”！（国内有厂家在进行中）,企 业 研 发 时 一定要深刻领会国家新药审评中心提出的“仿产品不是仿标准”的精神与内涵！ 原质量标准一定要参照，但绝非机械地生搬硬套，不假思索地拿来，一定要予以科学、辩证地分析。 千万不要迷信国外药典或进口质量标准！ 质量标准本身就是

23、一个不断完善、不断改变的过程。千万不要不敢改！要敢于改！合理地改！,对于企业界寄语（如何脱颖而出？） 第一步：每一产品/剂型皆有其核心与灵魂性评价指标。企业可通过对比现行国内质量标准中这些指标与国外同品种质量标准找到差距，且必须购买来原研产品，针对以上各关键性评价指标进行对比研究，发现自身产品内在品质上存在的不足，随后有的放矢地进行“二次开发”，重新研究制剂工艺/处方筛选等，力争研制生产出与原研品相同内在品质的自身仿制产品来。,对于企业界寄语（如何脱颖而出？） 第二步：提高质量标准，彰显“与众不同“。列举如下： (1) 针对固体制剂的有效性即生物利用度，提高溶出度试验要求，如降低转速、增加各p

24、H值溶出介质中的测定和要求，甚至效仿发达国家，采用多条溶出曲线进行评估！ (2) 针对液体制剂安全性杂质控制，增加已知杂质、单个未知杂质、总杂质控制，且限度依照参比制剂拟定。 (3) 针对难溶性软膏剂型的有效性、增加粒度控制。,对于企业界寄语（如何脱颖而出？） (4) 针对注射用粉末剂型的有效性，增加粒度分布、晶型、比表面能、粒子形状、晶格能等物理化学参数的评估（国产注射用头孢曲松钠与原研品“罗氏芬”在临床疗效上的差距便可在以上评价指标中得以体现）复溶/溶解时间的不同，该指标很重要！ (5) 对于重（装）量差异，不采用中国药典规定（其只有精密度、没有准确度要求，故可放心大胆地进行“底限投料”！

25、），而采用国外药典的类似于“含量均匀度检查法”的评判标准，生产出品质更加均一、含量更为靠近标示值(100%)的产品。,对于企业界寄语（如何脱颖而出？） 第三步：向国家新药审评中心或药典会提出补充申请，同时递交更新的质量标准，其中的关键指标上皆要高于现行标准。 第四步：凭借质量标准上的优势，在市场推广和技术营销上“做足文章”，进而寻求在各处招标定价上的优势。现今、一些国内合资药厂和进口仿制药厂纷纷采取此种方式。,对于企业界寄语（如何脱颖而出？） 第五步：申请发改委“差别定价”！2009年8月10日、国家发改委已率先在广东的“药品招标”中引入了 “差别定价政策”，拟定了三大类、11小类产品可提出申

26、请！其中： 获得国家级资质机构认定其药品有效性、安全性、质量可控性明显优于其他企业同品种剂型药品的； 获得国家药品审评等资质机构认定该药品注册标准指标明显优于同类其它品种的。 获得国际认证并能够出口的药品制剂。现阶段暂考虑国内加工生产并能够出口到欧盟、美国、日本或澳大利亚市场，且连续出口超过2年。 着重讲述,对于企业界寄语（本人诌见） 是否有必要致力于创新药研发？ 如有国家或地方政府资助、可以考虑。 如是高校、海归等，因所处环境、可以考虑。 作为国内企业、即便是上市公司也应慎重，深入调研后再做出决定。如财力充裕，莫不如将仿制药做精、做好、做大、做透，这才是企业发展的“王道”! 如已“骑虎难下”

27、，要拿出“壮士断腕”之勇气! 讲述原因（因为国际大公司在制剂上的优势无可替代）,看到国家层面的希望和曙光 讲述20082009年全国评价性抽验工作的历史背景与现 今发现的问题！ 药审中心已全面引入多条溶出曲线比对要求！ 国家发改委为改变“药价虚低”问题，正在研讨引入“差别定价政策”以激励国内仿制品中率先脱颖而出者！, 十二 五期间，国家发改委制订了关于药品制剂质量保障体系升级专项实施方案，即将获批。具体措施为： 国家将用专项资金方式，支持研发和产业化综合性国际化平台示范企业5家； 支持具有原料药和制剂一体化能力的国际化企业15家； 支持制剂出口加工企业15家； 凡是产品通过cGMP认证的企业，

28、有望在各省药品集中招标采购中享受定价方面区别对待； 通过国外cGMP认证并成功将制剂出口到国际主流市场的 制药企业，国家还将在出口退税和进口关税方面给予扶持。, 对于“国务院关于印发国家药品安全十二五规划的通知”(2012年2月)的体会与思考 撷取精华、诠释精神 (1) 原文：全面提高药品标准，进一步提高药品质量。 可谓一针见血：唯有从质量标准入手，才能彻底撬动药品品质的提升。 (2) 原文：2007年修订的药品注册管理办法施行前批准生产的仿制药中，国家基本药物和临床常用药品质量达到国际先进水平。 进行“药品品质再评价工程”似乎已势在必行。各企业应提前做好内功，先知先觉。, 对于“国务院关于印发国家药品安全十二五规划的通知”(2012年2月)的体会与思考 撷取精华、诠释精神 (3) 原文：全面提高仿制药质量。对2007年修订的药品注册管