口蹄疫流行态势及防控-肖柳美.ppt

1、2020/7/4,1,口蹄疫防控技术探讨,金宇保灵生物药品有限公司兽用疫苗国家工程实验室肖柳2020/7/4,2,谨代表金宇保灵生物药品有限公司向各位同仁、专家表示敬意!,2020/7/4,3,主要内容,金宇保灵公司简介口蹄疫（FMD）概况简述口蹄疫防控措施口蹄疫疫苗种类及特点口蹄疫灭活苗生产工艺简介疫苗质量检测与评价我公司产品优点与效果,2020/7/4,4,一、金宇保灵公司简介,一、金宇保灵公司简介,金宇保灵生物药品有限公司是内蒙古金宇集团股份有限责任公司（股票代码600201）下属全资子公司。农业部定点口蹄疫苗厂家之一。是集科研、生产、销售为一体，逐步实现国际化

2、的高新技术企业。公司始建于1958年（原内蒙古生物药品厂），2007年重新注册更名为金宇保灵生物药品有限公司。我公司自1995年开始从事口蹄疫灭活疫苗生产与研发，已有近20年的生产历史。,一、金宇保灵公司简介,公司坐落于内蒙古自治区呼和浩特市，占地面积约30万平方米。公司在国内同行中首家推行GMP，目前已全面通过国家GMP验收。现有现代化生产车间有三座；局部达到P3标准的检验室有四座。国内首个，也是目前唯一的国家级兽用疫苗国家工程实验室已建起，本年内可投入使用。,一、金宇保灵公司简介,一、金宇保灵公司简介,公司现有员工共579人。其中：研究员9人（博士6名）；高级兽医师及其他高级技术人员17人

3、（硕士38名）；中级职称技术人员78人（本科222名）；初级职称技术人员136人（大专124名）。技术人员占总人数的67.36%。,一、金宇保灵公司简介,口蹄疫灭活疫苗系列产品有：猪口蹄疫灭活疫苗1、猪口蹄疫O型灭活疫苗（OZK/93株OR/80株）2、猪口蹄疫O型（O/GX/09-7O/XJ/10-11）灭活苗牛口蹄疫灭活疫苗3、口蹄疫O型、亚洲1型二价灭活苗（OJMS株JSL株）4、口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+Asia1/JSL/06株+Re-A/WH/09株）,一、金宇保灵公司简介,为了进一步提升企业科研能力和新技术转化能力，公司先后与上海复

4、旦大学、吉林大学、中国农业大学、扬州大学、内蒙古农业大学、军事兽医研究所、农业部热带亚热带重点实验室（云南）、国家疾控中心、中监所、哈兽研、兰研所等众多科研机构和大学院校在新型疫苗开发、新工艺和技术研究领域开展了广泛合作，为新产品、新技术的研发提供了有力保障。,一、金宇保灵公司简介,口蹄疫领域主要成果有：2002-2004年，公司自主研制生产了牛口蹄疫O型纯化浓缩疫苗，其效价达到国际标准。2004年，国内率先研制和生产口蹄疫O型、亚洲1型二价灭活疫苗，将免疫剂量降低至2ML/头份；2003-2004年，自主研发制备了ELISA试剂盒，并建立了与国际（OIE）接轨的配套检测技术；,一、金宇保灵公

5、司简介,2004-2008年，国内率先建立口蹄疫146S定量检测技术，并成功应用于生产和检验；2008-2009年，国内率先成功攻克了细胞悬浮培养工艺计数，并应用于口蹄疫灭活疫苗生产，创造了我国口蹄疫灭活疫苗史上一次新的革命；2010-2011年，与内蒙古农业大学联合建立成品疫苗破乳及检测技术，有望列入国家检测标准；,一、金宇保灵公司简介,2004年至今，一直研究和探索口蹄疫抗原浓缩与纯化工艺。采用物理、化学浓缩纯化相结合的方法，自行研制出一套有效、实用，企业独有的组合型浓缩纯化系统，成为继口蹄疫悬浮工艺产业化之后又一个新的亮点，创造了我国口蹄疫灭活疫苗发展史上又一次新的革命。目前已取得显著成

6、效，并应用于生产。,一、金宇保灵公司简介,早在2004年，我公司将一批常规生产牛口蹄疫O型纯化浓缩灭活送至OIE下属英国Pirbright口蹄疫世界参考实验室检测。结果其效价达到国际标准。,2020/7/4,15,一、金宇保灵公司简介,新产品获准文号：,2020/7/4,16,一、金宇保灵公司简介,新技术取得专利：,一、金宇保灵公司简介,从今年开始公司以建设“品质金宇”为基础，提出“建立国际型企业”的新的奋斗目标，并继续引领着我国口蹄疫灭活疫苗产业正走向国际化之路。近几年出国考察的国家有：欧洲多个国家（2004-2005）：先进工艺设备；美国（2005）：悬浮设备；巴西、阿根廷、法国、泰国（2

7、011-2012）：生产工艺；德国、法国（2013）：培养基、纯化设备等。,一、金宇保灵公司简介,一、金宇保灵公司简介,一、金宇保灵公司简介,公司实力小结：NO.1国内第一推行GMP的口蹄疫疫苗企业（2002年）。国内第一建立146S（2004年）、内毒素（2001年）、疫苗破乳及蛋白电泳（2011年）、凯氏定氮蛋白测定（2012年）等先进而实用的检测技术。国内第一实现口蹄疫悬浮培养（2008年）。率先开展口蹄疫纯化、浓缩研究（2000-2004至今）。,一、金宇保灵公司简介,国内第一家研发生产牛口蹄疫二价苗（与云南重点实验室合作）、牛口蹄疫三价苗（与兰研所合作）的企业。国内第一将口蹄疫免疫剂

8、量从单价苗3ml/头份二价苗2ml/头份三价苗1ml/头份。国内第一家，目前唯一的兽用疫苗国家工程实验室。国内第一个口蹄疫产品质量达到国际标准的企业。金宇是国内行业的引领者、标准制定者。,2020/7/4,22,二、口蹄疫（FMD）概况简述,2020/7/4,23,二、口蹄疫（FMD）概况简述,口蹄疫（FootandMouthDisease,FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性、热性、高度接触性和可快速-远距离-传播的-烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物传染病之首（规定为国际间法定报告传染病），我国农业部也将其列为17个一类传染病中的第一位，是国际公认的对全球畜

9、牧业危害巨大的“政治经济病”。,全球七个流行区域（病毒池）分布图,IranO,A&Asia1,ChineseTaipeiO,AngolaSAT2,BotswanaSAT2,KenyaO&SAT1,HongKongO,PakistanO,A&Asia1,ThailandO&A,WRLFMD,30countries1100samples700positive,LaosO,SouthAfricaNVD,MozambiqueSAT2,FMDOutbreaks20111100Samplesfrom30Countries,AfghanistanO,A&Asia1,SouthKoreaO,Kazakhsta

10、nO,RussiaO,CambodiaO,ZambiaO,BahrainAsia1,BulgariaO,LibyaO,MalaysiaO,DPRKoreaO,IraqO&A,IsraelO,KuwaitO,SriLankaO,InstituteforAnimalHealth-WRLFMD,2020/7/4,26,二、口蹄疫（FMD）概况简述,病原：口蹄疫病毒（FMDV），有7个血清型。,猪主要感染O型，还有A型。,2020/7/4,27,二、口蹄疫（FMD）简述及流行形势,O型口蹄疫,2020/7/4,28,二、口蹄疫（FMD）简述及流行形势,O型FMDV拓扑型（Topotypes）:8个1、

11、古典中国型（Cathay）；2、中东南亚型（MESA）又称Pan-Asia；3、东南亚型（SEA），MYA98属此型；4、欧洲南美型（EuroSA）；5、印尼-1型（ISA-1）；6、印尼-2型（ISA-2）；7、东非型（EA）；8、西非型（WA）。,2020/7/4,29,二、口蹄疫（FMD）简述及流行形势,A型口蹄疫,2020/7/4,30,二、口蹄疫（FMD）简述及流行形势,A型FMDV拓扑型（Topotypes）:3个1、亚洲型（Asia）：A22/IRQ/24/64；2、欧洲南美型（Euro-SA）：A24；3、非洲型（Africa）:A/GAM/51/98。我国曾出现的A/AF72

12、、A/XJ/KT/58、A/WH09以及新分离的茂名毒A/GD/MM/2013均属亚洲拓扑型。但A/AF72、A/XJ/KT/58与流行毒株同源性79.8%；A/WH09与流行毒株同源性91.4%。,2020/7/4,31,二、口蹄疫（FMD）简述及流行形势,A,口蹄疫血清型,亚洲1,O,C,SAT1,SAT2,SAT3,古典中国型,中东南亚型,东南亚型,欧洲南美型,西非型,印尼2型,印尼1型,东非型,OZK93/OR80,manisa/JMS,GX09-7,MYA98/XJ10-11/GD,非洲型,亚洲型,欧洲南美型,2020/7/4,32,二、口蹄疫（FMD）概况简述,易感动物：猪、牛、羊

13、、骆驼、水牛等偶蹄类动物（包括家畜、野生动物等），易感动物多达70多种。牛：最易感指示器；猪：排毒量大放大器；羊：症状轻微，但可长期带毒存储器。,2020/7/4,33,二、口蹄疫（FMD）概况简述,危害与损失：,2020/7/4,34,二、口蹄疫（FMD）概况简述,2020/7/4,35,三、口蹄疫防控措施,2020/7/4,36,三、口蹄疫防控措施,（一）近年来我国口蹄疫防控状态1999年以前：古典中国型：OR/80、OZK/93；1999-2008年：古典中国型：OR/80、OZK/93；中东-南亚型（或称泛亚）：JMS/2000；2008-2012年：古典中国型：OR/80、OZK/9

14、3；中东-南亚型（或称泛亚）：JMS/2000；古典中国型变异株-新猪毒：GX/09-7；东南亚型（MYA/98为代表）：XJ/10-11。,2020/7/4,37,三、口蹄疫防控措施,2012年至今：古典中国型：OR/80、OZK/93；中东-南亚型（或称泛亚）：JMS/2000；古典中国型变异株-新猪毒：GX/09-7；东南亚型（MYA/98为代表）：XJ/10-11；A型毒株：A/GD/MM/2013。总之，防控形势越来越复杂、严峻！,2020/7/4,38,三、口蹄疫防控措施,（二）防控不力的根源1、口蹄疫本身特性：型多异变、传播迅猛；2、周围疫情复杂；3、农畜产品流通频繁；4、养殖规

15、模、管理水平、防控意识参差不齐。5、国家防控措施（预警、通告）不得力；6、疫苗品质差，参差不齐。,2020/7/4,39,三、口蹄疫防控措施,（二）国际上口蹄疫防控基本措施1、疫苗免疫接种：高密度、合理程序、高效疫苗；2、严格的消毒措施：动物、器具、车辆、人员等；3、流行病学调查，疫病及免疫状体的监测；4、对发病动物及可能感染动物扑杀及无害化处理；5、有效控制病畜、农畜产品及其他污染物移动；6、疫情预报、预测及风险控制。,2020/7/4,40,三、口蹄疫防控措施,疫苗免疫是防控口蹄疫最有力、直接、有效的措施，其重要性是无可替代的。关键：优质高效疫苗！1、毒株匹配，针对性强。2、生产工艺先进，

16、有效抗原含量高、杂蛋白少。3、检测方法科学、精确、可信。,2020/7/4,41,四、口蹄疫疫苗种类及特点,2020/7/4,42,四、口蹄疫疫苗种类及特点,1、灭活疫苗：目前广泛使用；2、弱毒活疫苗：已停止使用；3、新型疫苗：免疫效果不佳，只有在中国极少使用。如：合成肽疫苗、基因工程亚单位疫苗、DNA疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗、病毒样颗粒（空衣壳）疫苗等等。但均处于实验室研究阶段。,2020/7/4,43,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,工艺流程图,种细胞选育,细胞培养,接种种毒,病毒液的收获,初步纯化,浓缩纯化,灭活,乳化配苗,种毒的选育,2020/7/4,

17、45,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,口蹄疫灭活疫苗生产工艺一般分为：1、上游生产工艺（细胞培养及抗原生产）转瓶培养（传统工艺）；悬浮培养（先进工艺）。2、下游生产工艺（抗原纯化与浓缩）初步过滤澄清工艺；多级处理，高倍纯化与浓缩工艺。,2020/7/4,46,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,1、上游生产工艺（细胞培养及抗原生产）：（1）转瓶工艺,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,转瓶工艺生产图片-细胞生产,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,转瓶工艺生产图片-细胞培养温室,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,转瓶工艺生产图片-病毒接种,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,转瓶工艺生产图片-病毒培养温室,五、口蹄疫灭活苗

18、生产工艺简介,转瓶工艺生产图片-库存病毒,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,2020/7/4,53,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,转瓶工艺操作缺陷：工艺落后、人工操作、半开放、污染风险极大，导致内毒素超标！产量低，批间差大！,2020/7/4,54,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,（2）悬浮培养金宇保灵公司于2009年国内率先建立和应用。,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,悬浮5L反应器培养温度、pH值、溶氧、搅拌速度、营养液自动化控制,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,悬浮100L反应器培养温度、pH值、溶氧、搅拌速度、营养液自动化控制,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,悬浮1000L反应器培养温度pH值溶氧

19、搅拌速度营养液,2020/7/4,58,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,悬浮培养工艺优点：密闭、管道化、连续流、自动化程度高、抗原产量大、污染几率极小！,2020/7/4,59,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,2、下游生产工艺（抗原纯化与浓缩）：（1）常规方法,2020/7/4,60,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,简陋、粗放、落后，效果差！,2020/7/4,61,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,（2）先进工艺采用组合型工艺（包括企业自行设计研发，国际先进的组合型CTF系统），分三大步进行处理。蛋白去除率达98%以上。与国际接轨、国内独有！,2020/7/4,62,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,20

20、20/7/4,63,五、口蹄疫灭活苗生产工艺简介,生产工艺的先进与否，是产品质量高效、安全、均一、稳定的核心和基础！上游工艺：悬浮（）、转瓶（）；下游工艺：高效纯化（）、澄清（）。,2020/7/4,64,六、疫苗质量检测与评价,2020/7/4,65,六、疫苗质量检测与评价,（1）146S测定：2004-2006年，国内率先建立，目前已广泛应用于生产和检验。,2020/7/4,66,六、疫苗质量检测与评价,（2）总蛋白含量测定：,2020/7/4,67,六、疫苗质量检测与评价,总蛋白含量测定数据：,2020/7/4,68,六、疫苗质量检测与评价,（3）聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE）分析：

21、在29KD处蛋白条带代表抗原含量；其他部位出现蛋白条带为杂蛋白。,2020/7/4,69,五、口蹄疫检验技术简介,杂蛋白,有效抗原蛋白,杂蛋白,2020/7/4,70,五、口蹄疫检验技术简介,有效抗原蛋白,杂蛋白,2020/7/4,71,五、口蹄疫检验技术简介,杂蛋白条带,杂蛋白条带,有效抗原条带,2020/7/4,72,五、口蹄疫检验技术简介,有效抗原条带,杂蛋白条带,杂蛋白条带,2020/7/4,73,五、口蹄疫检验技术简介,有效抗原条带,杂蛋白条带,杂蛋白条带,2020/7/4,74,五、口蹄疫检验技术简介,技术核心：悬浮培养（金矿）浓缩纯化（先进的炼金技术）检验诊断（科学检测）,202

22、0/7/4,75,七、我公司产品优点与效果,2020/7/4,76,七、我公司产品优点与效果,我公司口蹄疫产品集毒株优势、工艺技术优势（悬浮培养工艺、高倍纯化浓缩技术）、检测技术优势（146S测定）为一身，是目前国内最安全、高效、稳定的口蹄疫产品。,2020/7/4,77,七、我公司产品优点与效果,1、“一针三防”，抗原谱宽广，可对O型、Asia1型、A型产生良好的免疫保护。,2020/7/4,78,七、我公司产品优点与效果,2、高抗原含量、高效价：以国际通用的悬浮培养技术和公司独有的高纯化浓缩技术(CTF)为基础，疫苗中抗原含量可达到810ug以上，符合OIE高效紧急免疫疫苗标准，效价高、免

23、疫效果确实。欧洲高效疫苗的抗原含量4.1-10ug/头份；不是越多越好，大于10ug没有意义。,2020/7/4,79,七、我公司产品优点与效果,3、低过敏原、高安全性：经悬浮培养、高倍纯化双重先进工艺精制而成的本疫苗中非抗原（杂蛋白）含量极少，内毒素几乎为零，具有极高的安全性。基本杜绝或消除了疫苗副反应或注射反应。,2020/7/4,80,七、我公司产品优点与效果,4、可激发机体产生快速免疫应答：由于抗原含量足、纯度高，能够在免疫后短时间（4-7日）内有效刺激机体免疫系统诱导产生先天免疫保护并激发机体快速产生特异性体液免疫应答。本疫苗的该项特点和优势对猪群的紧急免疫、阻断临床症状并有效控制疫

24、情意义重大。,2020/7/4,81,七、我公司产品优点与效果,5、抗体水平高，免疫持续期长：疫苗的抗原含量高，杂蛋白含量低，既减少了对动物机体特异性免疫应答的干扰，又刺激机体产生了高水平的体液免疫，免疫持续期可真正达到56个月。,2020/7/4,82,七、我公司产品优点与效果,6、去除了非结构蛋白（Nsp），可作为标记疫苗（DIVA）使用。,2020/7/4,83,七、我公司产品优点与效果,本产品与常规疫苗对比：,2020/7/4,金宇保灵生物药品有限公司,84,七、我公司产品优点与效果,2020/7/4,金宇保灵生物药品有限公司,85,七、我公司产品优点与效果,2020/7/4,金宇保灵生物药品有限公司,86,2020/7/4,金宇保灵生物药品有限公司,87,七、我公司产品优点与效果,一、农业部推荐的免疫程序：1、仔猪、羔羊：2835日龄时进行初免。2、犊牛：90日龄左右进行初免。所有新生家畜初免后，间隔1个月后进行一次强化免疫，以后每隔46个月免