液泡系的超活染色与观察.ppt

1、实验 2 液泡系的超活染色与观察,2020/7/6,1,2020/7/6,细胞（Cell）是由膜包围，并且能进行独立繁殖的原生质团，是最基本的结构和功能单位。 细胞器是细胞质内具有独立的生理功能和一定化学组成的形态结构单元。 20世纪以来，随着细胞生物学和分子生物学研究的不断深入，科学工作者将更多的目光集中在细胞器研究层面上。,2020/7/6,二、实验原理,活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。 目的 显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡。 研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。,2020/7/6,4,202

2、0/7/6,一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料(称活体染料)却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。 活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫及其它荧光物等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。 例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。,二、实验原理,2020/7/6,2020/7/6,转p35S:Naa10-GFP基因拟南芥幼苗的根尖进行活体染色,二、实验原理,低浓度的中性红染液是对植物细胞液泡进行超活染色的最重要也最常用的弱碱性染料。 中

3、性红对液泡系的染色具有专一性，只能将活细胞中的液泡系染成红色。,2020/7/6,8,2020/7/6,线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。 詹纳斯绿B对线粒体具有专一性的染色， 是毒性最小的碱性染料。 詹纳斯绿B染色是由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色，而周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。,2020/7/6,三、实验目的,1 观察植物活细胞内液泡系的形态、发育和分布； 2 掌握细胞和细胞器的超活染色技术,四、实验用品,1 器材：显微镜、恒温水浴锅、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2 试剂： Ringer液

4、，0.3%中性红，詹纳斯绿B溶液 3 材料：洋葱幼根根尖、小麦种子、口腔上皮细胞。,2020/7/6,11,2020/7/6,植物细胞液泡的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮，放在加有一滴1/3g. L-中性红溶液的载玻片上，染色5 10 min。 用吸水纸吸去中性红溶液，换上Ringer溶液,盖上盖片，显微镜下观察，可见到被染成红色的央大液泡。,五、实验步骤,五、实验步骤,初生根尖（12cm，纵切面切片）置于载玻片上，0.3%中性红溶液滴染色1015 min 吸去多余染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，用拇指垂直压盖玻片，使根尖压扁显微镜下观察。,2020/7/6,13,注意观察液泡的形态、数目、体积及染色深浅渐变 根尖分生区细胞的细胞质中散步很多大小不等的圆形小泡，即初生的幼小液泡 伸长区的液泡染色较浅，体积增大，数目变少 成熟区细胞中央一般可见一个淡红色的大液泡,2020/7/6,14,六、讨论与思考题,绘制洋葱根尖示意图，