PCR实验室的生物安全

1、。周珂人民医院高枫临床聚合酶链反应实验室生物安全。轮廓。一般而言，所有对人体物质进行生物、微生物、血清化学、血液、生物物理、细胞或其他测试以预防、诊断、治疗任何人类疾病或伤害或评估人类健康的部门统称为临床实验室。实验室每天处理临床标本。如血液、穿刺液、分泌物等。不可能知道这些“未知疾病标本”的危险程度。因此，每个临床实验室每天都面临潜在的生物安全危害，如真菌、病毒、细菌、临床实验室危险源、寄生虫、易燃、腐蚀性、有毒和强酸性化学品、电气设备、辐射和噪声。来源：在临床实验室治疗的患者标本(细菌、病毒、真菌、寄生虫)。细菌、结核分枝杆菌。棒状细菌，白喉棒状杆菌。棒状，棒状细菌(引起白喉)。病毒，狂犬

2、病，脱氧核糖核酸病毒，脱氧核糖核酸肿瘤病毒，脊髓灰质炎病毒。哈灵顿和香农在1976年的调查中发现，结核分枝杆菌、乙型肝炎病毒和志贺氏菌已成为英国临床实验室工作人员职业感染的最常见原因。临床实验室中生物污染的原因和类型、空气污染水的污染、人类污染物体的表面污染、空气污染、内部：平面布局、合理的气流方向、狭窄的死角区域、直接排放或扩散、高效过滤、密封或压差。水、人体和物体的表面污染，实验过程中产生的大量污水经过特殊处理后排放。实验室感染(接触、吸入)的特殊保护规定。物体表面污染的正确操作(飞溅、溢出、磨损错误等)。化学源危害，含义：临床实验室中的一些化学品易燃、可燃、有刺激性、有腐蚀性或剧毒。物理

3、源危害、来源：噪声、辐射、紫外线辐射、电磁场等。实验期间，实验室工作人员被实验室生物污染感染，实验室感染，东北农业大学师生因动物实验感染了严重的传染病。2010年12月，东北农业大学30名学生在实验室进行了“羊活体解剖实验”，因为购买实验动物不符合黑龙江省实验动物管理规定。28人感染了布鲁氏菌病，布鲁氏菌病和结核病，因为农场不需要出具相关的检疫证明。2003年9月9日，新加坡的一名患者被诊断出感染了非典病毒。这位27岁的男子是新加坡国立大学西尼罗河病毒实验室的研究生。一个由11名专家组成的国际调查小组认为，不适当的实验程序和实验室中西尼罗病毒样品与非典冠状病毒之间的交叉感染可能是造成该患者非典

4、感染的原因、新加坡非典实验室的感染以及实验室感染的途径。空中传播：使用接种环、吸管和注射器时的口头传播；直接接种：粘膜接触，如针刺和抓伤；例如，艾滋病毒可以进入人类节肢动物载体(叮咬等)。)通过结膜，并在消化道中被吸收和传递。实验室感染发病率(英国)志贺氏菌临床实验室感染0.322沙门氏菌临床实验室感染0.137其他肠道致病菌如弧菌、弯曲杆菌和大肠杆菌的实验室感染率极低。职业艾滋病病毒感染、职业获得性艾滋病病例或艾滋病病毒感染报告自疾病预防控制中心至1992年职业传播实验室技术员25(24.8)护士26(25.7)医生13(12.8)医疗技术员/辅助医务人员7(6.9)牙医/牙科技术员6(5.

5、9)健康助手/服务员6(5.9)管家/维护工人6(5.9)停尸房技术员3(3.0)技术员/治疗师3(3.0)呼吸治疗师2(2.0) 生物安全防护是指在实验室环境中处理和储存感染性物质过程中采取的一系列防护措施，包括一级和二级防护、一级和二级防护、一级防护：包括标准化操作技术和配置适当的安全设备，以保护操作人员和室内直接环境免受感染性物质的侵害。 二级防护：包括实验室设施的合理设计和严格规范的操作程序，以保护实验室外的环境免受传染性物质、个人防护装备、个人防护装备、避免危害的设备的安全特性实验服、隔离衣、工作服污染衣物，后开口覆盖日常衣物。鞋子和袜子碰撞并飞溅，但没有露出脚趾。安全眼镜碰撞并飞溅

6、。防撞镜头侧面有防护罩。安全眼镜碰撞并飞溅。防撞镜头侧面有防护罩。面罩覆盖整个面部，在发生事故时很容易摘下。，个人防护设备，设备避免的危险的安全特性防毒面具吸入气雾剂设计为包括一次性的，全面部或半面部空气净化，全面部或头罩驱动的空气净化和气体供应。防毒面具手套直接接触微生物。经微生物认证的一次性牛奶撕裂胶、乙烯基树脂或聚腈材料可保护手部网状结构。，生物安全柜，环境空气进入工作台过滤样品，样品被有效过滤并排放到室内或室外。负压装置用于形成空气幕保护屏障，保护操作人员的安全。实验室分区、清洁区：包括半污染区，如办公室、休息室和培养基室；缓冲室、更衣室和卫生通道等污染区域：包括样品收集区、处理区、种

7、植区和废物处理区；实验室出口和通道必须保持畅通。不准堆放物品、垃圾、装置或设备、出口通道、BSL-2级实验室生物安全、二级生物安全防护实验室安全操作规程。禁止非工作人员进入实验室。参观实验室和其他特殊情况必须经实验室负责人批准后方可进入。2.接触微生物或含有微生物的物品后，请在脱下手套后和离开实验室前洗手。3.禁止在工作场所吃、喝、抽、拿隐形眼镜、化妆和储存食物。4.用吸管吸液体，不要用嘴吸。、6。根据实验室安全程序，减少飞溅和气溶胶。7.每天至少对工作台面消毒一次，并在活性物质溢出后随时消毒。8.所有培养物和废物在运出实验室之前必须灭活，如高压灭活。需要运出实验室进行灭活的物品必须放在特殊的

8、密闭容器中。9.制定有效的防鼠防虫措施。二级生物安全实验室安全操作规程。生物危害标志应贴在实验室入口处，相关生物危害信息应贴在实验室内的显著位置，包括所用传染性物质的名称、负责人的姓名和电话号码。11.进行感染性实验时，禁止其他人进入实验室，或者必须经实验室主任批准后才能进入。免疫耐受或使用免疫抑制剂的工作人员在实验室或动物室工作前，必须获得实验室负责人的同意。二级生物安全实验室安全操作规程。12.实验室入口必须贴有生物危害标志，标明风险因素、生物安全水平、所需的免疫力、负责人姓名和电话号码、进入实验室的特殊要求和离开实验室的程序。13.工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙肝疫苗、卡介苗等

9、。)。14.并根据需要定期采集血清样本，应有检测报告，如有问题及时处理。二级生物安全防护实验室安全操作规程，15。将生物安全程序纳入标准操作规范或生物安全手册，由实验室负责人保存，工作人员进入实验室前应阅读规范并按规范操作。16.员工应接受潜在危害知识的培训，并掌握接触的预防和接触后的处理程序。每年接受一次最新培训。17.严格遵守以下规定，防止锐器被损坏：二级生物安全实验室安全操作规程，17.1除特殊情况(注射、静脉切开等)外，实验室内禁止使用针头、注射器等锐器。)。尽可能使用塑料设备而不是玻璃设备。17.2应尽可能使用一次性注射器。禁止弯曲、切割、折断、重新盖上盖子或从注射器中取出用过的针头

10、。禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放在被人民防空穿透的容器中。非一次性锋利工具必须放在厚壁容器中，并运送到特定区域进行消毒，最好是高压消毒。17.3尽可能使用无针注射器和其他安全装置。17.4严禁用手处理破碎的玻璃器皿。装有受污染针头、锋利工具和碎玻璃的容器在丢弃前必须消毒。二级生物安全实验室安全操作规程。培养基、组织、体液和其他潜在危险废物应在防漏容器中储存、运输和消毒。19.实验设备在运出维修或保养前必须消毒。20.当人员接触传染性物质时，及时向实验室负责人报告，并记录事故和处理方案。21.禁止将无关的动物带入实验室。生物安全，在聚合酶链反应实验室，聚合酶链反应技术的基本原理和特点，聚

11、合酶链反应，也称为无细胞分子克隆系统或体外酶基因扩增方法。聚合酶链反应技术是在1985年由凯利穆利斯共同创造的。这种技术可以特异性地将极少量的靶DNA扩增数百万倍，从而大大提高了分析和检测DNA分子的能力，并且可以检测单分子DNA或每100，000个细胞中仅含有一个靶DNA分子的样品。PCR技术的基本原理类似于DNA的自然复制过程。聚合酶链反应由三个基本反应步骤组成：变性退火延伸。变性模板DNA加热至约93一段时间后，双链模板DNA或经聚合酶链反应扩增形成的双链DNA解离成单链，可与引物结合，为下一轮反应做准备；模板DNA和引物的退火(复性)在模板DNA通过加热变性成单链后，温度降至约55，引

12、物与单链模板DNA的互补序列配对；聚合酶链反应技术的基本原理，引物DNA模板引物组合在聚合酶作用下的延伸，以脱氧核糖核酸为反应原料，靶序列为模板，根据碱基配对和半保守复制的原理，可以合成一条与模板DNA链互补的新的半保守复制链，通过重复三个循环变性退火延伸过程，可以得到更多的“半保守复制链”，这条新链可以成为下一个循环的模板，每个循环需要24分钟才能完成。聚合酶链反应的特点和强特异性：聚合酶链反应的特异性决定因素是：引物和模板DNA的特异性和正确组合；碱基配对原则；聚合酶合成反应的准确性；目标基因的特异性和保守性。引物和模板的正确组合是关键。引物和模板的结合以及引物链的延伸遵循碱基配对的原则。

13、高灵敏度：聚合酶链反应产物的数量呈指数级增长，用微微克(pg=10- 12)测试的初始模板可扩增至微克(ug=-6)。可以从一百万个细胞中检测出一个目标细胞；细菌学方面，最低检出率为3个细菌。聚合酶链反应具有简单、方便、快速的特点：聚合酶链反应采用耐高温的聚合酶。反应液加入一次后，在DNA扩增液和水浴上进行变性-退火-延伸反应，扩增反应一般在24小时内完成。一般采用实时荧光方法进行分析，无放射性污染，易于推广。样品的纯度很低：不需要分离病毒或细菌和培养细胞，粗DNA产物和总RNA都可以用作扩增模板。它可以直接扩增和检测临床标本的粗DNA，如血液，体腔液，冲洗液，头发，细胞，活组织等。原则上，临床基因扩增实验室分为四个独立的工作领域：1 .试剂储存和制备区2。样本准备区3。扩增反应混合物制备和扩增区4。扩增产物分析区域，如果使用自动分析仪，这些区域可以适当组合。，各分区的生物安全标准，各工作区域有明确的标志，禁止在不同的工作区域内混用设备和物品。进入每个工作区必须严格按照一个方向进行，即试剂储存和制备区、标本制备区、扩增反应混合物制备区和扩增产物分析区。不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。当工人离开每个工作区时，不允许脱掉他们的工作服。每个分区的生物安全规范，包括以下项目，不能在每个分区中混合：1。微型取样器(覆盖1000 UL)；2.移