α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1、实验6 -淀粉酶固定和淀粉水解作用作用的测定、酶催化剂作为生物催化剂，具有专一性和效率性。 目前，在食品、化工、压电石英药等领域广泛使用。 但是，在应用酶催化剂的过程中，(1)不稳定：酶催化剂通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件敏感，容易失活；(2)不利于工业用途：溶液中的酶催化剂难以回收，生产成本上升，也可能影响产品品质。 如何解决这些个的问题呢？固定化酶技术、一、酶催化剂和固定化酶、酶催化剂固定化酶(固相酶催化剂)、生细胞球产生的有生物催化的生物高分子。 将水溶性的酶催化剂固定在物理或化学方法的介质上，制成不溶于水且有酶活力的制剂。 固定化酶的优点有： (1)酶催化剂固定后有一定的机械强

2、度，催化反应过程可以管道化、连续化、自动化；(2)酶催化剂不溶于催化反应的溶液，产物更易提纯；(3)固定化酶可反复使用，经济、有利于工厂化生产；(4)固定化酶提高了酶催化剂的稳定性， 可长期贮藏使用的固定化酶不足，不能催化一系列反应，二是酶催化剂固定化，反应历程：将固定化酶装入柱中，基质通过该柱后，在酶催化剂的作用下转化为产物。 方法：吸附法包埋法共价键法交联法，目的：(一)、吸附法吸附法是使酶催化剂与吸附剂接触，经洗涤去除未吸附的酶催化剂获得固定化酶。 是最简单的固定化技术，在经济上也是最有魅力的。 1、根据吸附剂的特点，有通过非极性吸附法、络离子结合法、氢键、疏水力等途径将酶催化剂吸附到固

3、体吸附剂上的方法。 例如，利用有机硅凝胶、活性炭、石英砂等酶催化剂的两性化学基与络离子交换剂的相互作用(络离子结合)。 对于吸附量大的、(二)、包埋法，将酶催化剂包埋在多孔载体中，要么包埋在格子型中，要么包埋在微型胶囊型中是当前研究中最活跃的方法。 其原理是酶催化剂蛋白的一部分化学基，在温和条件下与载体共价键合，形成共价键，被固定化。 (3)共价键法是在酶催化剂分子和多功能试剂之间形成共价键和酶催化剂蛋白质的氨基键，得到三次元的交联网状结构，(4)、交联法、氨基键部、酶催化剂、非极性吸附法、交联法、包埋法、酶催化剂的固定化方法、固定化酶的性质、稳定性增加：对热、蛋白酶及各种试剂的pH活性曲线和

4、最佳pH值的变化：可能向酸性或碱性方向移动。 实验研究了底物专一性的变化：三，-淀粉酶的固定化和淀粉水解作用作用的测定实验，1，实验目的： (1)固定化-淀粉酶的制造； (2)进行淀粉水解作用的测定。 2、实验原理：用吸附法将-淀粉酶固定在石英砂上。 一定浓度的淀粉溶液通过固定化酶柱后，可以将淀粉水解作用到糊精中。 用淀粉指示剂溶液(KII2 )测定时，流出物呈红色，显示生成了水解作用物糊精。 纳豆菌淀粉酶：最佳pH5.57.5最适温度5575， 淀粉、糊精、麦芽糖、葡萄糖、-淀粉酶、-淀粉酶、糖化淀粉酶、碘元素蓝、碘元素红、碘元素红、不显色3、设备及用品：5ml塑料注射器、50ml烧杯、滴定

5、管、自行车用阀芯及回形针、注射器座实验材料及其制备(1)淀粉酶的固定化： (2)可溶性淀粉溶液： (3)5mmol/L KI-I2溶液，5mg-淀粉酶4ml蒸馏水5g石英砂，搅拌，用装入30min色谱分析法柱的10倍体积的蒸馏水洗净该注射器，流速为1ml/min (约20滴) 完全溶解100ml碘元素0.127g、碘化钾元素0.83g的蒸馏水后，装入滴液漏斗。5、实验步骤：将注射器固定在注射器支架上，用滴管滴下淀粉溶液，流过流速0.3ml/min、(尽可能慢)5ml后，接收流出液0.5ml (约10滴)，加入KI-I2溶液12滴观察颜色，用水稀释1倍后，用颜色用10倍的柱体积的蒸馏水洗涤该柱，

6、放入4个冰箱，数日后反复实验的观察结果：淀粉溶液指示剂：亲和色谱法洗脱剂指示剂：冰箱中储藏数日后反复实验：6，实验结果：呈蓝色呈现红色，固定化酶的用途，工业应用：葡萄柚木瓜酵素固定化酶用于啤酒澄清，葡萄糖异构酶固定化酶用于制造果聚糖，提高甜度。 在化学分析和临床诊断中的应用：用尿素酶催化剂固定化酶测定血液或尿中尿素含量。 在压电石英药物中的应用：以苯丙氨酸的羟化酶及其补充酶催化剂为溶血工作团队，注射到患者体内即可有效地治疗丙酮尿症。 缺乏乳糖，无法水解作用牛奶中的乳糖，引起腹痛拉肚子，并用乳糖固相酶催化剂在体内或体外水解作用乳糖。 1、试验中从固定化酶柱流出5ml液体后，接受流出液进行鉴定，这

7、是为什么？讨论、回答：固定化酶柱中的酶催化剂与流经柱的淀粉反应花费时间，刚开始流出的液体反应时间过短，不能生成或生成糊精2、如何证明清洗固定化淀粉酶柱的流出液中没有淀粉酶？ 问题：在试管中加入1ml可溶性淀粉溶液，加入数滴淀粉酶柱的流出液，混合后，用手握住试管提高温度，数分钟后加入1滴KI-I2指示剂，如果还是蓝色的话，流出液中就没有淀粉酶。 用固定于石英砂的淀粉酶柱作用于淀粉溶液，从柱中流出，作用的结果表明了淀粉酶的固相酶催化剂作用的结果。 3、高温淀粉酶有什么用途？答案：在实际生产中，想反应的时间越短，反应温度越高。 通常生产上淀粉酶为一次性物品，加温会在短时间内使酶催化剂变性失活，只要使淀粉在短时间内水解作用即可。 寻找耐高温淀粉酶的目的是，在高温下淀粉的水解作用快，酶催化剂在高温下短时间内不变性。 发酵生产中使用的是植物淀粉，青霉素发酵、乙醇发酵等由于能水解作用淀粉，高温淀粉酶的用途很广泛。 1、pH :影响运载体和酶催化剂的电荷变化，影响酶催化剂的吸附。 2、离子力：多方面的影响被认为是盐阻止吸附。 3 .蛋白质浓度：如果吸附剂的量一定，则随着蛋白质浓度的增加，吸附量也增加直至饱和。 4 .温度：蛋白质多随着