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文档简介

1、实验七淀粉酶活力的测定,一、实验目的,掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法,二、实验原理,酶是一种具有高度专一性的催化剂。其催化能力的大小用酶的活力来表示。酶活力也称酶活性，是以酶在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。,本实验是以一定量的-淀粉酶液，于37 、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间内将淀粉转化为还原糖，然后通过与DNS试剂作用，比色测定求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力 这里规定，一个淀粉酶活力单位为在37 、pH6.8的条件下，每分钟水解淀粉生成1 mg还原糖所需要的酶量。 1 U=1 mg 还原糖/minmL 酶,三.实验材料

2、及设备,1、材料 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 2、仪器 分光光度计恒温水浴沸水浴 3、器材 刻度试管：25 mL17 移 液 管：1 mL3（取稀释后的酶液） 烧 杯： 250 mL1 滴 管： 2 洗耳 球： 2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 移 液 器：专取NaOH 注 射 器：专取蛋白样品,四、试剂的配制,1、淀粉溶液（0.5%） 称取5 g可溶性淀粉，溶于1000 mL热水中。 2、3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂） 3、磷酸缓冲液（ 0.1 mol/L，pH6.8 ），含0.3% NaCl 4、NaOH溶液（2.5mol/L）,五.操作步骤,1、淀粉酶的制备 （1）

3、取硫酸铵沉淀法纯化蛋白质实验中获得的粗 酶提取液解冻，取上清液0.05 mL，加蒸馏水稀释到25 mL，摇匀备用 （2）取硫酸铵沉淀法纯化蛋白质实验中获得的盐析蛋白质解冻，取上清液0.05 mL，加蒸馏水稀释到25 mL，摇匀备用 （3）取葡聚糖凝胶层析脱盐获得的蛋白液解冻，取0.05 mL，稀释。 收集1管的同学，将0.05 mL稀释到15 mL 收集2管的同学，将0.05 mL稀释到10 mL,试管排列顺序,装约20 mL淀粉溶液，标记，转至37水浴锅中,因淀粉中含有少量还原糖，某些溶液有色素、杂质，需查看酶不水解淀粉的情况,37 ,室温,六.结果处理,1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果，并利用实验 “3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准曲线，计算淀粉酶的活力。 需要详细过程。,七. 思考题,1、在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？ 2、本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?,八、分析,1

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