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文档简介

1、实验二 土壤中微生物的分离与纯化,实验 从土壤中稀释分离微生物 一、实验目的： 学习微生物稀释平板计数及划线分离技术,二、实验原理,采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法 在固体培养基上形成单个菌落。 分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养基，分离真菌用马丁-孟加拉红培养基。 依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目 土壤是微生物的大本营,从土壤中稀释分离微生物的方法如下： （一）土壤悬液制备 准备1瓶土壤悬液：称10克土壤放入带玻璃珠的90

2、ml瓶装无菌水中，手摇振荡(10-20min)，使土样分散。,三、实验步骤：,（二）倒固体琼脂培养基平板： 分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（350ml瓶） 熔化后，凉至45-50度倒平板。,（三 ）悬液稀释：方法见下图：,（四）悬液涂布(演示): 无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用103，104，105稀释液0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板（演示）,平板涂布,简单易行，但易 造成机械损伤,Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod.,五、划线分离,每人用剩下的1个平

3、板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离,平皿划线分离法,（五）吹干 将已涂布好的平皿皿盖半揭开，置于无菌台上吹干。 （六）培养： 待吹干后，将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养(温度?) 。 （七）检查结果,结果分析: 1. 计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30300个左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目在10100个左右的稀释度来计数 2.我所计数的平板稀释度是： 单菌落数目： 、 。 3.计算：活菌数目/每克土壤 （计算过程） 个/每克土壤 4. 对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析,实验要求,做1个土样梯度分离 倒12个平皿(其中6个用于稀释涂布，6个用于划线),每组(5-6人),试管斜面接种,1.两支试管呈“V”字形,2.拔下试管塞,3.火焰上微烧一周,4.接种环灼烧、冷却,5.接种、划线,6.塞上塞子，灼烧接种环,实验报告 从土壤中稀释分离微生物的原理、方法、步骤。 2思考题 (1)为什么融化后的培养基要冷却至45左右才能倒平板? (2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么? (3)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一

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