第四章 磷光和发光光度法.ppt

1、第四章磷光和发光光谱，重点，分子频谱发射光谱/化学/生物发光，4.1磷光，4.1.1磷光生成和磷光频谱发生电子是由第一刺激团引起的。固定激发光波长最大限度地测量不同波长下的磷光强度，得到磷光频谱曲线。三重状态发生，单重状态发生，基态，4.1磷光，磷光产生，磷光发生，单重状态边界间跳跃触发，进入三重状态(S1 T1)，产生三重状态，阻止制动，转换到基态(T1 S0)，处于动态不利状态，因此其他辐射或无辐射转移的干扰T1 S0转移过程是自旋阻断，发光速度慢，强度约为10-4100s，强度相对弱。、鬼火和火是怎么回事？4.1磷光，4.1.2磷光的定性和定量分析类似于荧光的定性和定量分析。磷光频谱定量

2、：工作曲线法4.1.3磷光系统类似于日光灯，日光灯可以配磷光分析附件。4.1磷光，与日光灯的区别：A，油兆，低温装置(杜瓦瓶)B，斩波器，切割光与分子受刺激产生的荧光和磷光的寿命不同，它的作用是获得磷光辐射，区分磷光和荧光。冻胀超波、磷光和荧光总合异常超波、磷光、磷光、磷光、4.1.4磷光实验技术a .将低温磷光法、样品放在液氮中，降低质点之间的碰撞概率，减少无向斜线转移。b .固体磷光法去除溶剂，可以在薄层色谱板上进行斑点磷光分析。c .形成分子结合物，表面活性剂和经测试的物质形成胶束化合物，加强刚性，减少碰撞产生的能量损失。4.1.4磷光实验室技术d .中原子效应，在含有中原子的溶剂(如碘

3、乙烷)中，有利于系间跳跃，即S1 T1跳跃，加强磷光。(与荧光相反)e .感应磷光，分析物质的刺激三重态T1将能量转移到能量受体的刺激三重态T1，然后受体从T1跳到基态S0时产生磷光。在这种分析方法中，分析物本身不发出磷光，受体散发磷光。4.2化学发光(chemiluminescence)，化学反应产生的光辐射4.2.1化学发光的基本原理化学反应提供足够的能量，使作为反应产物之一的分子的电子受到刺激，形成这里状态的分子。当处于此状态的分子跳跃到基态时，会发出一定波长的光。其亮度随时间变化，可以获得更强的发光(峰值)。在适当的条件下，最高点与分析物的浓度形成线性关系，可以用于定量分析。4.2化学

4、发光，化学发光反应类型不同，因此发射光谱范围为400-1400nm。必要条件：a .化学反应释放足够的能量。b .能量用于产生激发态的分子C。有化学发光效率，4.2化学发光，4.2.2化学发光的定量分析化学发光反应效率CL，又名化学发光的总量次生产率。它是由产生发生状态的产物分子的化学发生效率CE和发生状态的分子的发射效率EM决定的。定义：CL=发射光子的分子数/参与反应的分子数=CEEM，化学发光反应的发光强度ICL表示为单位时间内发射的光子数。它与化学发光反应的速度有关，反应速度与反应分子浓度有关。也就是说，ICL(t)=CL dc/dt表达式中的ICL(t)表示与分析物相关的T时刻的化学

5、发光强度。Dc/dt是分析物参与反应的速度。发光强度、时间、4.2.3鲁米诺过氧化氢系统碱性介质、过氧化氢氧化鲁米诺，激发态氨基苯二甲酸，氨基苯二甲酸，辐射，4.2化学发光，牙齿反应是一些微量过渡金属离子(Co，Cu，Ni，Cr，Fe)或一些金属离子(ag，ti，ce，ce 4)流动注射式b .探测器、光电倍增管c .读取装置、显示器、记录器、4.3生物发光(bioluminescence)、体内生物化学反应引起的发光4.3.1酶反应发光反应三磷酸腺苷测量：荧光素酶和镁作用，萤火虫的光发生在体内荧光素和荧光素酶反应后荧光素酶的双流酸残留量牢牢抓住荧光素生成的发光体氧化荧光素，使萤火虫释放黄绿色

6、荧光。萤火虫还发出橙色或红色的光。发出黄色绿光和红色光时荧光素酶立体结构不同。发出黄绿色光时，双流酸残基与氧化荧光素的结合相当紧密，发出红光时比较宽松。萤火虫的光是冷光。萤火虫体内化学反应的能量中约有90都转化为光，牙齿转换效率是迄今为止发光系统中最高的。基于荧光素酶立体结构的知识，了解萤火虫发光反应中高转换效率的原因，将有助于开发节能的生物纳米机器。牙齿研究结果已发表在自然杂志(2006)上。4.3生物发光，4.3.2细菌发光明亮发光菌的发光反应：FMNH2和FMN之间的转换起到了传递氢的作用，FMNH2分子有两个-NH-基，其他分子容易形成氢键。毒物分子可以与FMNH2分子发生氢键，干扰氢

7、转移过程，阻碍正常的发光反应，从而减弱发光。FMNH2 RCHO O2细菌黄素酶黄素单核苷酸FMN RCOOH H20 HV还原形态黄素单核苷酸495nm氧化形态，发光细菌的急性毒性试验，4.3生物发光，4.3.3生物发光试验机化学发光，发光特性，灵敏度10-17mol/L选择性是什么材料？对人体有害吗？下一个回答正确吗？荧光棒的化学物质主要由过氧化物、酯类化合物和荧光染料三种茄子物质组成。简单地说，荧光棒发光的原理是过氧化物和酯类化合物反应，将反应后的能量传递给荧光染料，在染料中发出荧光。目前市场上常见的荧光棒上放置着玻璃管中间层，在中间层内外隔离和摩擦过氧化物和酯类化合物，两种茄子化合物反应使荧光染料发光。荧光棒中的液体化学物质用聚乙烯(塑料)包装，对人体没有太大的危害。因为荧光棒发出的光是化学反应从染料中发出的非破坏性光，不是辐射刺激染料的光，而是对人体没有危害。现在有些人追逐潮流，反对打碎荧光棒，把里面的液体涂在身上。因为荧光棒的化学物质直接接触皮肤，会对人体造成一定的损伤。特别是要注意不要让孩子们吃错了食物。荧光棒将玻璃管夹在可折叠的塑料管上。在断裂过程中，玻璃管中的液体A流出，与塑