食用菌母种.ppt

1、,实验一 食用菌母种的制作技术,植物科学学院,一、 实验目的,1、学习食用菌培养基的配方与制作方法 2、掌握培养基的消毒与灭菌，母种移接的操 作技术和方法。,二 实验材料,超净工作台、电热恒温培养箱、玻璃漏斗、漏斗架、铝锅、电炉1 000 rnJ量杯、纱布、棉塞、18mm180 mm试管、细线绳、牛皮纸、刀、马铃薯、葡萄糖或蔗糖、琼脂、酒精灯、75酒精消毒瓶、75酒精消毒棉瓶、接种针、火柴、记号笔。,三、实验内容与方法,常用配方： 1、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)： 马铃薯(去皮)100 g，蔗糖10 g，琼脂910 g，水500ml，pH自然。 2、马铃薯综合培养基：马铃薯(去皮)

2、100 g，蔗糖10 g，琼脂910 g，硫酸镁0.8g,磷酸二氫钾1.5g，水500ml，pH自然,配 制 方 法,1、先将马铃薯洗净，去皮，挖掉芽眼，称取100 g，切成1cm见方的小块或薄片。 2、将切好的马铃薯块放人铝锅内或大烧杯中，加水500 mL放在电炉上煮沸后维持1520min，至马铃薯熟而不烂。 3、用4层湿纱布(纱布需浸水后拧干)过滤，由于马铃薯在煮沸过程中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加水补足水分至500 mL。 4、将称好的琼脂加人马铃薯汁中，在电炉用文水煮，直至琼脂完全融化为止(边煮边搅拌)。最后加入蔗糖等可溶性物质，搅匀。,5、 分装试管，培养基配好后应

3、趁热用分装漏斗进行分装试管，装入试管高度的1514，分装时应注意不得使培养基黏在试管的口壁上，以防污染杂菌。 6、塞棉塞，培养基分装完以后应立即塞上大小合适的棉塞，棉塞应塞人试管内23，外留l/3。 7、扎把，将塞好棉塞的试管7支或9支扎成一把，在棉塞外面包一层牛皮纸，再用线绳扎紧，防止灭菌时棉塞被冷凝水浸湿。,配 制 方 法,灭 菌,1、先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直立放人内锅，试管口向上且不要贴锅边，避免冷凝水浸人试管。灭菌物品不要装得太满，留出一定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。 2、盖上锅盖，盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插人锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的螺丝，

4、并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。 3、将灭菌锅加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽35 min, 关闭放气阀。,4、当压力表指针指到0.1-0.15Mpa 处时(灭菌所需压强)开始计时，继续维持该压强2030min。灭菌结束待压力表指针自然回到“0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到“0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。 5、摆斜面，试管取出后一定要趁热摆斜面，将试管斜放在木板上，使试管内培养基成一斜面。斜面的长度一般为试管长度的35。用于保藏菌种的试管斜面应适当短些，以减少蒸发面积。气温较低时，在摆好的斜面上面覆盖一条厚毛

5、巾，以免在试管壁上产生大量水珠，影响接种和培养。当培养基冷凝后，即可收起备用。,灭 菌,接 种 和 培 养,1、左手平托两支试管，手指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待接母种的试管。 2、右手拿接种针，用拇指、食指和中指握住其柄部，将接种针插入75的酒精消毒瓶中消毒，在酒精灯火焰上灼烧接种针的顶端，逐渐将杆部也在火焰上慢慢通过，这样反复3次即可将接种针彻底灭菌，切记最后一次灼烧后不能再浸人酒精瓶中，应在火焰旁自然冷却。 3、将左手平托的两支试管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌将外侧的菌种管上的棉塞拔出，再用中指和无名指拔出内侧试管口上的棉塞夹在手中(不得放在桌子上或台面上

6、)，将两支试管口迅速移到酒精灯火焰旁边。,4、将烧过并冷却的接种针伸入母种试管中，在菌丝斜面上勾取火柴头大小的一块菌丝块，迅速放到待接试管斜面的中部，将试管口在火焰上烧一下，然后立即塞上棉塞。 5、接种完毕，再将接种针在火焰上灼烧灭菌。以免使接种的菌丝扩散，造成污染。 6、菌种接完后。贴好标签或用记号笔在试管壁上注明菌种名称及接种日期等。 7、将同类菌种扎好，送到该菌所要求的最适温度下(恒温箱或恒温室内)培养，一般培养2 d，检查有无杂菌生长，715 d母种菌丝即可长满斜面。,接种和培养,母 种 质 量 检 查,通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成功。若在试管斜面上出现有光

7、泽，黏液状培养物或呈黄、绿、灰、黑等毛状物时，即是圬染，不能使用。优良菌种的感观应具备“纯、正、壮、润、香”的特点；“纯”指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑制线，无“退菌、断菌”现象；“正”指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的特点；“壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力；“润”指菌种含水量适中，无干缩、松散现象；“香”指具有品种特有的香味，无异味。而菌种生产性能(产量高低、品质优劣、抗逆性强弱)的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。,四、作 业,1.如何获得优质的母种? 2.如何提高母种移接的成功率?,实验二 食用菌的组织分离技术,一、实验目的,通过组织分离实验，使同学们掌握组织分离

8、的方法和技术。,二、实验材料,超净工作台、恒温箱、母种试管斜面培养基、75酒精消毒棉球瓶、酒精灯、镊子、解剖刀(或剃须刀片)、接种针、待分离的菇种、火柴、记号笔。,三、实验内容与方法,1.选择品质优良，朵形正常、肉厚、无病虫的种菇供组织分离。分离时以幼菇(六七分成熟)为好，它的组织再生能力强。此外，实践证明风干的子实体也可进行组织分离。 2.分离时应在接种室或超净工作台内进行。先用酒精棉球将手擦拭消毒，再用镊子夹取酒精棉球将菇正、反面消毒。 3.用手将菌柄撕开，但手千万不得碰撕裂面，避免杂菌污染。,三、实验内容与方法,4.将解剖刀经酒精灯火焰灭菌后，从菌柄和菌盖交界部位切取大豆或绿豆粒大小的组织块。以无菌操作方法，将切取的组织块用接种针移至母种试管斜面培养基。此外，用接种钩直接勾取一小块组织移至母种试管斜面培养基，分离效果也很好。 5.塞好棉塞，注明菇种、分离日期及地点。 6.放到温度适宜的温箱中培养，12 d后，检查有无污染，发现污染及时挑出。一般7lO d，菌丝即可长满斜面。如需纯化，再挑取尖端菌丝移接到母种试管斜面培养基进行培养。,组织分离的质量检查,组织分离后的试管