ATRA剂量调节人脐血CD133ltgt细胞增殖分化的蛋白机制.doc

1、 上海交通大学博士学位论文ATRA剂量调节人脐血CD133细胞增殖分化的蛋白机制姓名：马仰丽申请学位级别：博士专业：内科学（血液）指导教师：孙关林20070501 剂量调节人脐血细胞增殖分化的蛋白机制 细胞较单细胞集落形成单位傻目稍贜小鼠体内重对一些蛋白即：抗凋亡蛋白畑芷诘骺氐鞍譪痯，转录因、癝和途径的调变、以剂量依赖 表达水平明显上调。关键词：，调节，脐血，细胞，蛋白机制 瑃 獂琧猚 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均

2、已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 上海交通大学学位论文版权使用授权书朐谝陨戏娇蚰诖颉学位论文作者签名：弓叩丽日期： 海交通人学博学位论文赴T缙诘腍；还有研究发现体外细胞还具有产生赴淖嫦取】。另外的研究还发现通过免疫磁的细胞因子的培养条件，体外进行向粒细胞的诱导分化；结果表明，在该体系条件 达调控，在脊椎动物的胚胎发育、细胞分化和维持生物体正常生理状态方面起着重要作用。全反式维甲酸对人的正常造血功能有一定的调节作用，可影响造血细胞的增殖、分化和凋亡。维甲酸最具开创性的效应是当剂量超过血清中生理浓度时能诱导急性早幼粒细胞白血病之异常早幼粒细胞向终末分化。此外，药理

3、剂量的己被用于多种临床实验中治疗多种肿瘤，因为高于血浆水平的能 抗体购于沈一次。玀按密度孵育于含腎嘌褐或过夜以除去单 核细胞并观察脐血有无污染。谥校檬逝淦骺焖俳细胞的液体悬浮培养子组合即：躌的抽提：按照公司 的管，预先加入的水，加入上釸量和的说明进行逆转录试验。将锛于腥鯮铮庞谝中备用。酆厦复右冰箱中取出，放于冰上。 水及模板。各个反应管放入离心机中甩一下；和籄覥扩增条件为：、；、阮 计数细胞；高速离心， 蛋白质含量蛋白含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；缬維高度配制积层胶。分离胶上层再缓慢加一层水乐菇罕谎趸室温下放置 海交通人学博萰位论义出转移夹。用镊子小心打开转移叠层。在双蒸水中漂洗

4、膜。 海交通人学博学位论文。獀或跄则认为差异有显著性。细胞计数来自个标本。 组与对照组比较，；组与对照组比较，组与比较均无明显差 表天每毫升培养液中各组有核细胞数比较术籔灸， 護痗啊辧痩细呒亮康腲使有榱细胞数明显减少 沽姿峄腅系鳎细呒亮康腁。使 猘下耨。幽中所示發分别等于雘痠。 赴芷诘鹘诘鞍譸和显示不同的表达水平为明确人脐血细胞在不同浓度的作用下，细胞周期调控方面的蛋白 分别等于们及叭 汉渫搜：学位论立细胞中配体介导和非配体介导的维甲酸受体活性的调变；，琟一，一一一。圈篊赴直鹋嘌诓煌日及的校天后抽提蛋白，用鳌镏兴緇及分别等于。痩 组中和蛋白水平的表达均高于 讨论通过对一些蛋白即：抗凋亡蛋白畑芷

5、诘骺氐鞍譪痯，玪、癝和凇途径的调变，以剂量依赖的方式差异平明显上调。本研究提供了一些诱导人正常造血干祖细胞向粒系分化和促进增殖的分子机制方面的依据。然而，整个造血调控的分子机制是很复杂的，由许多分子参与造血过程，要进一步了解造血调控的详细机制有待于更深入的探究。细胞外的信号如何向细胞内传递并引起细胞相应的反应，是细胞生物学的一个重要研究课题。细胞内的信号传导通路间是相互交织、相互作用的，从而构成复杂的信号网络。丝裂原活化蛋白激酶猘了细胞外信号调节蛋白激酶 括转录因子在内的核蛋白的活性。在细胞培养体系中，的激活与细胞增殖之间具有良好的相关性。能刺激细胞增殖的生长因子，如几一癎瓹，同时也能强烈而持

6、续地刺激的活性。用或的始终无活性的突变体或反义结构子来干扰信号通路的成员，显示出对细胞增殖起显著抑制作用。相反，的活性诱变体可持续刺激的活性，并使细胞增殖增强。途径对其调变的意义。所示为该通路的磷酸化调节位点及通路下游位于鰁稠鑫踟，。国一 赴馨土觯匝2； 亚单位与周期蛋白结合。周期蛋白一周期蛋白依赖性激酶复合物的重要任务之一是在细胞周期中和认赴芷诘鞍准涞南嗷饔猛糩】： 图喝槎锵赴南赴芷凇康鱃痵期的转换訟 调节细胞增殖和分化的主要级联放大信号是途径，该途径从细胞因子和质的生长。体外研究也表明改芰姿峄疨。但也有认为，生长因子、整合细胞由增殖、凋亡和生长阻滞间的动态平衡来调节细胞数目的多少。大量的证

7、因此晚期表达的蛋白如蚉应该是凋亡调节的节点之一。对一些肿瘤细胞 饱和而使诤鲜实淖刺员阆氐鹘谙赴只。维甲酸受体是骨髓细胞生成的重要调节因子并且可能作为转录因子来实施其活 尽管在白血病细胞中已被表明能诱导一系列代表粒系分化基因的表达，感的并且在粒系分化时高表达，然而，在正常造血系统中，发挥这些效应的分子基础尚不清楚。本研究为探索对正常造血调节的分子机制提供了一个很有价值的依据。在这个背景中，造血的过程实际上是由于细胞特异性基因的协调表达从而导致血细胞获得特定表型。某个细胞内基因表达的模型是通过细胞特异的转录因子建立的，该转录因子介导各种影响细胞增殖和分化的净效应，因此，对转录因 海交通人学博学位论

8、文 靶基因产物的受体及其它。粒细胞和一些淋巴细胞中表达。和的表 煌搜璋垃论史用以治疗肿瘤化疗和放疗所致的中性粒细胞减少和粒细胞缺乏症；或者利用较低浓 度的使体外扩增后再用以脐血造血干祖细胞移植。甈取于有趣的是：维甲酸对粒系祖细胞生长的效应是对培养系统中细胞因子高度选择 海交通人学博学位论文结论呒亮康腁勾砹刀蚍只淖B家蜃覴 参考文献甌甆篩琋瓽， 甁： 汉煌搜：学位论文珼：疪疎篜，甌。，甊，琁甈 瓹，琒， ：，疢；一籥， 瓼琌；琋：珺珻甃 。甁 ， ：， ；： 狹瓸；：， 琒，瓹，瓻丫珻，現甒，珻狵，琋琀，珿琒，甁，珿琒，畃 琕，璉，：籭疓琇瓹疎 疎：甌甒甌， 甈 ： ；： 瓸， 致谢同时感谢邬维

9、礼老师工作中的热情帮助。感谢陈赛娟院士和赵位莅教授等血液 猼 马仰丽综述审校【关键词】维甲酸；正常血细胞；增殖；分化；凋亡它们都是属于核受体超家族范畴，分别有蚘三种亚型。这两类受体之间最 玉对正常造血干祖细胞的作用的雅申股或者是出现在无血清培养基中与蛋白结合的维甲酸，能影响液体培养体系 ：海交通人学博学位论文菻瓯溃航扇斯撬鐲细胞体外培养于无造血生 海交通人学博学位论义有趣的是：维甲酸对粒系祖细胞生长的效应是对培养系统中细胞因子高度选择甅等芯糠諴 甊萿印应用高度纯化的人骨髓赴靶蠊撬枳嫦赴研究维甲酸对红系的作用，研究表明：维甲酸对体外红系集落的生成呈浓度依赖的强抑制效应，即半抑制的浓度是，全抑制的浓度是，尽管同时有其它联合细胞因子的刺激作用存在。而且单细胞集落生成实验中，红系集落生长也被抑制，由此提示：维甲酸对红系祖细胞的作用是直接的。而且，