新人教版高中生物选修1血红蛋白的提取和分离 学案

1、血红蛋白的提取和分离指导学习和诱导思考1.凝胶色谱凝胶色谱法，也称为凝胶色谱法，是分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是多孔球体，有许多通道贯穿其中。具有不同相对分子量的蛋白质分子以不同的速度通过凝胶，而具有较小相对分子量的蛋白质进入凝胶内的通道、距离和移动速度。然而，相对分子质量的蛋白质不能进入凝胶内部的通道，而只能在运动、距离和速度上进入。具有不同相对分子量的蛋白质分子因此被分离。2.缓冲溶液缓冲溶液的作用是。缓冲溶液通常通过溶于水来制备。生物体内的各种生化反应都是在一定的酸碱度下进行的，例如，血浆的酸碱度就是为了在实验条件下准确模拟生物体内的过程，有必要保持体外的酸碱度与体内的酸碱度基本一致

2、。3.电泳电泳指的是。许多重要的生物大分子，如多肽和核酸，都有可离解的基团，这些基团在一定的酸碱度下会被携带。在电场的作用下，这些带电荷的分子会带着电荷向电极移动。电泳利用待分离样品中每个分子与分子本身的差异，使带电分子不同，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和，它们通常用于测定蛋白质的分子量。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的流动性取决于和其他因素。4.蛋白质提取和分离蛋白质提取和分离通常分为四个步骤：和。5.样品处理血液由和组成，其中红细胞最多。红细胞有的特点。红细胞中有一种非常重要的蛋白质，它的功能是血红蛋白由一条肽链组成，每条肽链周围有一条肽链，可以被磁性基团携带。血红蛋白因其

3、含量而呈红色。洗涤红细胞的目的是及时分离红细胞，然后用橡胶吸管吸出透明的上层，将深红色的下层倒入烧杯中，再次加入，缓慢搅拌，低速离心一段时间，重复洗涤三次，直到显示红细胞已被洗涤干净。血红蛋白的释放在和的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。分离血红蛋白溶液混合溶液离心后，试管中的溶液分成四层。第一层无色透明，第二层为白色薄固体，但第三层为红色透明液体，第四层为其他杂质的暗红色沉淀。试管中的液体用滤纸过滤除去可溶性沉淀层，在分液漏斗中放置一段时间后，分离下层的红色透明液体。取1毫升血红蛋白溶液进行透析，将透析袋放入含300毫升物质的20毫升/升透析袋中，透析12小时。透析可以去除样品中的杂质或用于

4、替代样品。6.凝胶色谱操作第一步是制作，第二步是根据装填前色谱柱的内部体积计算凝胶量。填充凝胶柱时，不得存在凝胶柱。因为气泡会降低分离效果。第三步是。拨号困难1.凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱，也称为分配色谱，是根据分子量分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，其中大部分由多糖化合物组成，球体中有许多通道。当含有各种分子的样品溶液缓慢流动时，每个分子在色谱柱中以两种不同的方式运动，即垂直向下运动和不规则扩散运动。分子量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒，只能分布在颗粒之间，通过距离短，移动速度快；分子量相对较小的蛋白质分子容易进入凝胶中的通道，通道长，移动速度慢。因此，相

5、对分子量较大的蛋白质先流出，相对分子量中等的分子流出，相对分子量最小的分子最后流出。这种现象也被称为分子筛现象。此外，凝胶本身具有三维网络结构，分子量较大的分子在这种网络结构上通过空袭时阻力较大，而分子量较小的分子通过时阻力较小，因此可以分离不同分子量的蛋白质分子。2.与其他真核细胞相比，红细胞的特性以及这种特性对于蛋白质分离的意义哺乳动物和人类的成熟红细胞是双面凹陷的圆形蛋糕，没有细胞核和细胞器。其中包含的血红蛋白是有色蛋白质，因此可以通过观察凝胶色谱中的颜色来判断何时应该收集洗出液。这使得血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。3.电泳的功能和原理电泳是指带电粒子在电场作用下迁移的过程。许多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等。具有可离解的基团，在一定的酸碱度下带正电荷或负电荷；在电场的作用下，这些带电分子将向与电极相反的方向运动。电泳技术是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的大小和形状，使带电分子具有不同的迁移速度，从而达到分离、鉴定或纯化样品的目的。典型案例分析当用凝胶色谱法分离蛋白质时，蛋白质(D)具有高分子量长距离，慢速移动速度c的距离较短，移动速度较慢。d的距离更短，移动速度更快分析：微球内部有许多通道。当不同相对分子量