CRISPR Cas9ppt课件

1、CRISPR-Cas 9，目标基因操作技术，术语解释，1 crispr:群集regularly interspaced short palindromic repeat sequences群集，规则间隔的短回文重复2 cc宿主细胞基因组药物分子有效果目标组织或细胞的定向转移或作用。根据CRISPR-Cas系统的发现，1 CRISPR-Cas特别识别入侵许多细菌和大部分古生菌天然免疫系统的病毒和核酸，利用Cas蛋白进行切割，达到自身免疫。2 CRISPR-Cas系统赋予原核细胞以间隔素决定的外源DNA特异性免疫。在宿主防御噬菌体攻击中，细菌对自然界庞大的噬菌体群体进化出了CRISPR介导的适应免

2、疫。牙齿免疫功能的发挥是通过添加或删除CRISPR间隔序列的动态变化，即间隔。CRISPR-Cas概述，CRISPR-Cas:一种茄子来源是细菌获得免疫的RNA引导Cas蛋白，修饰目标基因的技术。CRISPR-Cas概述，CRISPR-Cas主要由两部分组成。标识CRISPR位通常为2148 BP长度，重复序列由短而保守的重复序列(以2672 BP间隔序列(spacer)分隔)组成。CRISPR是通过这些间隙序列和目标基因识别的。Cas家族，CRISPR associated(Cas):在CRISPR部位附近的双链DNA核酸酶，在guide RNA的引导下，可以切割靶部位。它类似于滑石粉酶功能

3、，但不需要形成二聚体。(阿尔伯特爱因斯坦、美国电视电视剧(Northern Exposure，Northern Exposure)、Cas分类、Cas基因多样性非常丰富，因此简单的分类是动员但功能不相关的30多个Cas蛋白质研究小组考虑了若干茄子因素，包括保守的Cas蛋白质之间的进化关系和Cas基因操作员的组成方式第一级主要是对外。第二个级别主要是识别和分解初级CRISPR RNA成熟和入侵的外源遗传物质，可以将CRISPR/Cas系统分为三种茄子类型：Type、Type和Type。Cas 9，Type系统的主要特征是包含代表性的CAS9蛋白质(分子质量大的多功能蛋白质)。Cas9蛋白包含两个

4、功能域，一个在N端，一个与Ruc核酸酶具有相似的活性，一个在中部具有与HNH核酸酶类似的活性。隐性链球菌具有典型的Type CRISPR/Cas系统，CRISPR/Cas系统对trans-activating crRNA(tracrRNA)进行编码，指导RNase和Cas9完成灯泡crRNA的成熟。然后，tracrRNA可以与成熟crRNA的重复序列配对，形成RNA二聚体，与Cas9蛋白结合成核糖核蛋白复合体，发挥识别和分解入侵的外源DNA功能36，CRISPR-Cas9原理。牙齿系统的运作方式是crRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基对与trans-activating R

5、NA(TRAC RNA)结合，形成TRAC RNA/crRNA复合物，诱导核酸酶Cas9蛋白以RNA为导向的dsDNA结合蛋白Cas9效应核酸酶是第一个能够攻克RNA、DNA、蛋白质的统一因子，具有巨大的改造潜力。可以将蛋白质与没有核酸酶的Cas9(Cas9核酶-空)融合，表达适当的sgRNA，以所有dsDNA序列为目标，sgRNA的末端可以连接到目标DNA，而不会影响Cas9的结合。因此，Cas9可以从所有dsDNA序列中带来融合蛋白和RNA，这给生物体的研究和改造带来了很大的潜力。应用，基因敲除动物模型一直是在活动物上进行基因功能研究，寻找适当药物作用目标的重要工具。但是传统的基因敲除方法

6、需要经过复杂的目标向量构建、ES细胞筛选、嵌合鼠标选育等一系列阶段，程序繁琐，对技术的要求高，不仅成本高，时间长，成功率也受到多种茄子因素的限制。即使在技术比较成熟的实验室，利用传统技术构建基因敲除、老鼠通常也需要一年以上的时间。2 2013年1月，美国两个研究所在科学杂志上发表了基于CRISPR-Cas9技术的细胞株基因敲除的新方法。与以前的技术不同，牙齿技术利用目标特异性RNA将Cas9核酸酶引入基因组的特定目标，切割特定基因部位，使其突变。牙齿技术迅速应用于基因敲除小鼠和松鼠动物模型的构建。通过一系列研究，首先通过RNA注射将CRISPR-Cas系统导入大鼠受精卵，证明在胚胎中发生点突变比DNA注射更有效。在此基础上，发现牙齿方法没有老鼠遗传系统的限制，可以删除大块基因组DNA，同时注射不同基因的RNA序列，从而达到在同一老鼠或老鼠上引起多个基因突变的效果。另外，事实证明，利用CRISPR-Cas技术制作的基因敲除大鼠模型与传统方法制作的相同基因(肥胖相关G蛋白结合受体Mc4R)突变大鼠相比，具有一致的表现形式。用牙齿方法制作的基因突变动物具有比现有方法高得多的生殖系统迁移能力，是建立可靠、高效、快速挖空动物模型的新方法。2 CRISPR-Cas技术要求锌脂核酸酶(ZFN)、ES细胞目标、RNA目标序列和基因组序列完全