平面色谱法.ppt

1、平面色谱法,分析化学系列课件,贵阳医学院药学院 分析化学教研室,第十八章 平面色谱法,定义：平面色谱法(plane chromatography)是在平面上进行分离的一种色谱方法；主要包括薄层色谱法、纸色谱法和薄层电泳法。,第一节 平面色谱法的分类和原理 一、平面色谱法的分类 薄层色谱法 纸色谱法 薄层电泳法,二、平面色谱法参数,（一）定性参数 1. 比移值Rf(retardation factor；Rf) 溶质移动的距离与流动相移动距离之比 图示,Rf范围： 0 Rf 1 Rf = 0.20.8（常用） Rf = 0.30.5（最佳）next,L0,back,L1,L2,图181,2. 相对

2、比移值Rs,讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1,（二）相平衡参数,相平衡参数：分配系数K和容量因子k 前面推导出,R表示单位时间内一个分子在流动相中出现的几率，也可以表示组分分子在平面上移动的速度. RfL/L0=ut/u0t，定时展开时R Rf,讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关，K大，Rf小 薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分， 展开剂极性大，Rf大（容易洗脱） 展开剂极性

3、小，Rf小 （不容易洗脱） Rf1 K或k=0 组分在前沿 Rf0 K或k= 组分在原点,（三）面效参数,1、理论塔板数 n=16(L/W)2 L:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度,2、塔板高度 H=L0/n L0：原点到展开剂前沿的距离 n越大，H越小。,（四）分离参数,1、分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距离与两斑点平均宽度的比值 R=2(L2-L1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2),L1 、L2 :分别为原点至两半斑点中心的距离， W1、W2斑点的宽度。,2.分离数(separation number; SN),定义：相邻斑点分离度为1.177时

4、，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。 SN=L0/(b0+b1)-1 一般薄层板的分离数为 710，高效薄层板可达1020。SN是衡量分离容量的重要参数,第三节 薄层色谱法,一、主要类型 二、吸附剂与展开剂 三、操作方法 四、定性与定量分析 五、高效薄层色谱法 六、薄层扫描法 七、应用实例,概述,1定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2操作过程：见图示 铺板 活化 点样 展开 定位(定性)/洗脱(定量),3分离机制：吸附* 、分配*、离子交换、空间排阻 4特点；分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色 方便。 5应用：药

5、物杂质检查、纯度测定、定量 next,一、主要类型,（一）吸附薄层色谱 固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸最后混合物得到分离.K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。,（二）分配薄层色谱 固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。,二、吸附剂与展开剂,(一）吸附剂 硅胶：硅胶H、硅胶G、硅胶F254 氧化铝：可分为中性（pH7.5)、碱性（pH9.0）和酸性（pH4.0）,（二）展开剂 常用

6、的有： 石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯甲苯二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇吡啶酸水,吸附剂与展开剂的选择,展开剂的选择：根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性,吸附剂的选择：根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强弱极性吸附剂 被测物极性弱强极性吸附剂,图183,三、操作方法,定性分析窄条 定量分析1020cm,（一）薄层板的制备,（二）点样：用毛细管或微量注射器，几微升，24mm （三）展开：见续页 （四）显色方法：日光、紫外光(254、365nm)显色剂等,展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应浸入展开剂深度0.51.0cm，展开至整板3/4距离,标记。,1 , 2样品

7、 3 标准品,四、定性和定量分析,定性分析利用Rf值，与对照品的Rf值比较，同时在一块薄层板上进行。也可采用相对比移值定性。 定量分析洗脱法，薄层扫描法,五、高效薄层色谱法,高效薄层色谱法（high performance thin layer chromatography；HPTLC)所用的吸附剂颗粒很小 （5m或10m），用喷雾法制成高效薄层板。常用的有硅胶、氧化铝、纤维素和化学键合相预制薄层板。,六、薄层扫描法,薄层扫描法是用一定强度光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 检测方法 吸收测定法和荧光测定法 测量方法 投射法和反射法 扫描方式 单波

8、长和双波长 定量方法 外标两点法定量,第四节 纸色谱法,以纸做载体的色谱法，分离原理属于液-液分配色谱法，操作与薄层法类似。 选纸 点样 展开 显色(定性)/洗脱(定量),固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 定性参数：,讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分易保留，Rf 小（流动相极性， Rf ） 非极性组分易流出，Rf大（流动相极性，Rf ）,本章小结,掌握:平面色谱法的基本分离原理及相关参数的计算（比移值、相对比移值，分离度）；薄层色谱法的特点；吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂的选择原则。 熟悉:薄层色谱法的主要操作步骤。

9、 了解:薄层扫描法的应用及技术；纸色谱法的分离原理及实验条件。 思考题与习题 （389390页） 1、2、4、5、15,参考书及文献,1.分析化学（第四版）下册，孙毓庆主编，人民卫生出版社 2周同惠等纸色谱和薄层色谱。分析化学丛书第三卷第五册北京：科学出版社，1989 3林珍安等译高效薄层色谱上海：上海科技出版社，1984 4.孙毓庆主编薄层扫描法及其在药物分析中的应用北京，人民卫生出版社，1990 5.Fried Band Sherma JThin-layer ChromatographyNew York：Marcel Dekker lnc，1982 6. Grinberg NModern Thin-layer