《过柱操作技巧》PPT课件.ppt

1、样品纯化技术：过柱技术，常称过柱又称柱色谱分离，又称柱色谱。 经常使用以硅胶和氧化铝为固定相的吸附柱。 因为柱子的经验成分太多了，所以希望下次就柱子的体会写一下心得，对大家有帮助。 中文名称： Rf值英文名称： Rf value定义：样品中的某些成分在纸色谱或薄层色谱的特定溶剂体系中移动的距离与流动相前端的距离之比。 主要是纸层析术的用语。 从“流速”(rate of flow )。 溶剂从原点浸透到距离a (通常在2030测定)时，位于原点的物质从原点向前方移动到b时，b/a的值(0.01.0 )成为该物质的Rf值。 例如，将葡萄糖和果糖用正丁醇-醋酸-水(415 )展开20次，分别得到0.

2、18、0.23的Rf值，用醋酸乙酯-吡啶-水(211 )展开，分别得到0.28、0.32的Rf值。 当滤纸、溶剂温度等保持一定时，各种物质呈现特定的Rf值，成为鉴定物质的极为重要的常数，压力可以增加洗涤剂的流动速度，减少产品收集的时间，但减少柱的架级数。 因此，在其他的条件相同的情况下，常压列是最有效的，然而时间也最长，例如天然化合物的分离，一个列有几个月。 减压柱可以减少硅胶的使用量，感觉可以节约一半以上，但是大量的空气通过硅胶时溶剂会挥发(有时在柱外水蒸气凝结)，或者可能得不到比较容易分解的物质。 以前有大量的过减压柱，有比较深的感情，但是尝试加压后，减压的想法几乎消失了。 柱子可以分为加

3、压、常压、减压。 加压柱是一种比较好的方法，与常压柱相似，但施加压力洗涤剂快。 压力的供给可以是压缩空气、2连球或小气泵(向水槽供给空气即可)。 特别适合于容易分解的样品的分离。 压力不能太大。 否则，溶剂过快会降低分离效果。 个人认为加压柱适用于一般有机化合物的分离。 关于柱子的尺寸，粗细应该是最好的。 柱子一长，相应的梯级数就会变高。 柱变粗时，样品的原点变小(柱上反映的样品层变薄)，相对地分离的难度变小。 柱子长10厘米，样品长2厘米的话，虽然可以考虑分离的困难，但是有可能被低极性的溶剂慢慢冲走。 另一方面，如果样品层只有0.5厘米，各成分比较容易完全分离。 现在看到的柱子的纵横比通常是

4、1:510，书上写的硅胶量是样本量的3040倍，具体的选择要具体分析。 只要能够进行必要成分和杂质成分的比较(意味着必要成分rf为0.20.4，杂质为0.1以上不同)，就不使用硅胶，而能够使用小的柱(例如200毫克的样本、2cm20cm的柱)。 如果不足0.1，则增大色谱柱，增大色谱柱的直径，例如可以使用3cm的色谱柱，也可以减小洗涤剂的极性等，无水无氧色谱柱适用于对氧、水敏感、容易分解的产品。 湿柱子也可以干柱子。 但是，样品前必须至少用溶剂使色谱柱饱和一次。 溶剂和硅胶饱和时放出的热量可能会使产品分解，所以最终必须分离敏感的样品，请注意。 由于分离的东西很敏感，接收瓶必须能够密封，请遵循s

5、chlenk操作。 根据需要确定加压、常压、减压。 无水无氧柱多使用氧化铝作为固定相。 硅胶中露出大量的羟基，样品的分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物容易。 氧化铝可为碱性、中性、酸性，选择佟地较大，但高于硅胶。 关于湿式干式法。湿法省时，一般用洗涤剂溶解样品，也可以使用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，否则溶剂就成为洗涤剂。 大多数样品在上柱前发粘，一般没问题。 但是，某些样本在硅胶上析出，这一般出现相对大量的样本，是因为硅胶对样本的吸附饱和，样本本身是相对良好的固体。 这必须先重结晶，得到大部分产品后再分列。 如果不能再结晶，与此无关，样品直接随着洗涤剂的流动溶解。-一些样品溶解性

6、差，可溶解的溶剂不能进入色谱柱(例如，DMF、DMSO等，与溶剂一起走时，显色长脱尾)，此时必须用干式进行色谱柱。 有一种说法是样品和硅胶的量为1:1，我认为越少越好，但是旋转干燥后，要确保看不到明显的固体粒子(这表示也有没有吸附在硅胶上的样品)。 溶剂的选择。 当然最便宜、安全、环保。多选用石油醚、乙酸乙酯。 文献中写到使用正己烷，只要太贵，没有特别使用的必要，钱比洗涤剂流动得快，但极性小，有时必须这样。 乙醚也可以使用，不过，请注意容易睡觉，觉醒溶剂不流动。 那样的话柱子也会动摇。 二氯甲烷也很有用，但是硅胶的吸附是散热过程，所以夏天柱子上大多会产生气泡，天冷的时候很好。 据说甲醇可以溶解

7、一部分硅胶，所以制品要注意元素分析，经过后续的处理，例如再结晶等。 其他溶剂比较少，应根据个人需要进行选择。 由于某些原因，使用的洗涤剂通常是大包装(便宜)，这里使用的是10升或25升的塑料桶，必须注意这些工业品的纯度低。 从送来的大桶的底部可以清楚地看到着色的杂质，但是因为可以考虑其他的杂质，所以必须在比较严格的柱子时重新蒸发溶剂。 当然，过了原料可以省略这个步骤，总之有以下的精制方法。 另外，溶剂最好在通过柱子后再循环使用，既有环保，又能节省一部分经费，消耗一定人力的缺点。 在此需要注意的是，一般在高柱中同时进行的是减压自旋蒸镀，石油醚和乙酸乙酯的比例根据挥发度而极性变化，一般极性变大，适

8、用于梯度淋浴清洗时，正好极性变大。 过柱后，最后回收溶剂采用常压。 由于减压自旋蒸镀时一部分低沸点的杂质一起出来，常压时这种现象减少，杂质与你下面的样品反应会很悲惨。 关于操作问题。 一根柱子。 柱子下面的活塞不能涂润滑剂。 被淋上洗涤剂运送到产品上。 可以采用四氟节门的。 我认为干式法和湿式法的柱子没什么区别，只要能把柱子安好就好了。 完成的柱子必须适度紧贴(洗涤剂过多走路慢)，必须均匀(否则样品从一侧倾斜)。 书上写的是看不见气泡，但我认为大多数情况下，小气泡不会受到太大的影响，一加压气泡就会完全掉落。 当然，如果你所安装的柱子总是有气泡的话，就需要更多的练习。 但是，柱子更忌讳的是裂缝，

9、纵向和横向，都会影响分离效果，或者无效，用少量的溶剂溶解2个样品，加入样品后，打开下面的活塞，溶剂层下降到石英砂面时，再加入少量的低极性溶剂放入洗涤剂，最初不要加压。 溶解样品的溶剂和样品层有一定程度的距离(24cm就足够)，通过加压，可以避免溶剂(例如二氯甲烷等)卷入样品。 3洗涤剂的选择感觉，必要的点是Rf0.20.3左右比较好。不要认为登板部分的比较是开着的，越过柱子就使用那个极性。 如果Rf为0.6，则即使不同0.2，在柱上分离也不容易。 柱子是多次爬板的状态，所以式的比较：0.6/0.8一次的分离度，一定不及(0.2/0.3)。 样品的采集以硅胶为固定相透柱的原理是吸附、解吸的平衡。

10、 因此，样品和硅胶的吸附强时难以流出。 发生这种情况，后面的点先出，前面的点后出。 在这种情况下，可以使用氧化铝作为固定相。 此外，收集的试管的大小由样品量决定。 特别是少量的样品，如果使用大的试管，可能一根就收到了3个样品。 乌武。 用小试管的话工作量太大了。 最后的处理柱分后的产品，使用大量的溶剂，其中的杂质也会蓄积在产品中，如果想输送分析，请用少量的溶剂清洗。 大部分杂质溶于溶剂中，洗涤后几乎消失，必要时再结晶，实验操作禁忌和技巧，实验安全是实验中永恒的主题，实验的规则不同，1，吸管一定不能用嘴吸。 “我知道这是水！ ”，但是，你知道这些水的含量和清洁吗？你知道这些装水容器的清洁吗？ 有

11、些人即使在家也不能随便操作，喜欢用嘴吸煤油和汽油。 2、闻到气体进入鼻子，不看一点操作，闻到Cl2，听说有人很遗憾。 3、实验室内禁止吃东西、喝饮料。 有人一边看显微镜一边吃东西，喝旁边的试剂，有急事洗胃也没幸免于难。 同样，也禁止将实验室内的试剂用作食品和添加剂，例如：NaCl和蒸馏水。 因为不知道NaCl内的纯度和杂质，所以蒸馏水也是一样的。 记住4、要刷瓶子，一定要刷内外。 你之后必须避免花费时间去寻找那个脏东西是里面的还是外面的。 5、实验室不能穿带铁掌的鞋。 因为摩擦生电。 如果使用的样品很多，或者有样品的话，一定要贴上标签，即使记忆力好也要投稿。 否则，如果忘记了，可能会花几倍于原

12、来的时间思考那是什么。 无论怎样的实验失败，都不要慌张地乱放反应物。 一会儿等你冷静下来，你可能会后悔刚才的冲动。 8 .做实验的时候，一定要实际记录数据，任意打乱或篡改数据，会给你自己带来麻烦。 9 .做实验时最好戴上玻璃镜片眼睛，防止溶剂和腐蚀物质沾到眼睛上，使树脂镜片容易被腐蚀。 永远保持你的实验台干净。 只是为了让你取得好结果，也是为了你自己的心情。 11、实验前一定要想到你在做什么，做实验预习决不是空谈。 否则，思路容易混乱，容易出错，容易发生事故。 12 .疲劳作业13严禁，严禁在烧瓶内直接加热所有有机溶剂，这是最危险的，如果溶剂露出或瓶底破裂，邻近的作业人员会非常危险。15、使用

13、氯仿、四氯化碳、甲醇及苯等高风险溶剂或盐酸等强刺激性气体时注意排气通风。 16 .酸性滴液管禁止使用碱性物质。 不这样做的话，会腐蚀砂玻璃部分以及管壁，不能密闭漏水以及体积不正确，严禁使用高锰酸钾、重铬酸钾等强氧化试剂。 如果是中性物质，尽量使用碱式滴液管(碱式滴液管容易操作)。 17、注意硫酸、硝酸等氧化性酸、安全，不小心沾到身上后，用水清洗后，用碳酸氢钠液清洗，浓度低，不可忽视。 随着水分的蒸发，硫酸的浓度变高，原来的洗硫酸也变成浓硫酸。、18、减压蒸馏是非常危险的操作，在减压蒸馏时，人必须记住不要靠近反应装置，要安装防护用具，如护目镜。 因为减压蒸馏依赖于设备的好坏，所以玻璃容器的细小缺陷在减压时会受到外界气压的压迫，一旦出现裂纹，玻璃容器整体就会破裂，损伤受试者。 19、无论进行什么样的溶剂回流操作都不要忘记加入沸石(当然有固体粉末原料的话可以制成沸石)，如果在反应中忘记加入沸石，液体热的时候也不要加入沸石，否则加入沸石会激发液体自身的过热能量过热的