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文档简介
1、第二节 基因工程的原理和技术,温故而知新,限制性核酸内切酶,DNA连接酶,质粒载体,基因工程操作的工具,基因工程的原理和技术,1、筛选含有目的基因的受体细胞,2、目的基因的表达,步骤一 获得目的基因,人工合成,利用PCR技术扩增,已知序列:,从基因文库获得,未知序列:,( DNA library ),聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),氢键断裂,形成单链DNA。,引物与DNA模板结合,形成局部双链。,在酶的作用下,不断延伸,合成双链DNA。,多次循环,获得大量双链DNA分子。,PCR技术扩增,鸟枪法:散弹射击法,从基因文库获得,人工合成法,逆转录法,根据已知氨
2、基酸序列直接合成DNA,步骤二 形成重组DNA分子,步骤三 将重组DNA分子导入受体细胞,1.基因工程中常用的受体细胞有哪些?,2.导入过程如何?,大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞,借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径,步骤四 筛选含有目的基因的受体,利用标记基因来筛选:,通过检测标记基因的有无,(或利用标记基因体现的性状)来判断目的基因是否导入受体细胞。,对目的基因进行分子水平的检测:,通过合成标准探针,利用DNA杂交技术来进行目的基因的检测。,步骤五 目的基因的表达,1、通过鉴定目的基因的产物蛋白来确定目的基因的表达。,2、目的基因导入受体细胞后,受体细胞(或受体细胞发育来的生物体)会
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