课题3　血红蛋白的提取和分离

1、专题3血红蛋白萃取分离，仅存在于血红蛋白红细胞中，包含4条肽链，每条肽链包围血红素组，牙齿组可以携带氧分子或分子二氧化碳分子，因为血红蛋白血红蛋白包含红色。血红蛋白特征：Fe2，1，基础知识3360，1，分离生物大分子的基本想法是什么？本课题我们将利用血红蛋白和杂质蛋白质的哪些方面的差异进行净化？使用特定的物理或化学方法分离其他物理或化学性质生物大分子。2，蛋白质提取和分离的依据：蛋白质形状、大小、电荷特性和数量、溶解度、吸附特性、对其他分子的亲和性等不同种类蛋白质的物理化学特性不同。徐璐可以分离其他种类的蛋白质。1，基础-蛋白质提取和分离原理，3，徐璐其他蛋白质分离方法：2，原理：1，材料-

2、，实际上是小孔球体。小球内部有很多通道。大部分由多糖化合物组成，如葡聚糖、琼脂糖等。凝胶，(a)凝胶色谱法，(分配色谱法):根据相对分子质量的大小分离蛋白，相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量小的蛋白质：凝胶粒子内部的通道容易进入，长度长，移动速度慢。相对分子质量大的蛋白质：不能进入凝胶粒子内部的通道，只能在凝胶外部间隙移动，距离短，移动速度快。3，具体过程：一，基础-蛋白质分离和提取的原理，一，基础-蛋白质分离和提取的原理，大于凝胶粒子孔直径，被堵在粒子外，小于凝胶粒子孔直径，可以进入粒子内部垂直向下移动。事故2 :(2)，由缓冲溶液弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。H2CO3/NaH

3、CO3，乙酸/乙酸钠，NaH2PO4/Na2HPO4，洗涤剂，2，缓冲液是怎么配制的？一般12茄子缓冲剂溶于水配制。调整缓冲剂的使用比例，可以制作在其他pH范围内使用的缓冲液。4，牙齿实验中添加的缓冲液是什么？为什么要放缓冲液？磷酸缓冲液，用于牙齿任务的缓冲液为： _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，传记电泳在要分离的样品中产生不同分子带电性质的差异，以及分子本身的大小、不同形状、带电分子不同的迁移速度，实现了样品中不同分子的分离。凝胶电泳原理图表，在特定pH时，使蛋白质基团带有

4、正电或负电。添加了很多负电荷的SDS，形成“蛋白质SDS复合物”，SDS拥有的负电荷远远超过蛋白质分子的原始电荷量，从而掩盖了蛋白质之间的电荷差异，蛋白质迁移率完全取决于分子大小。(3)传记电泳，3 .类型：琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳。，使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过程：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测量蛋白质的相对分子质量时，可以选择一组已知相对分子质量的标准蛋白质，同时进行电泳。根据已知相对分子质量标准蛋白质的传记电泳谱带位置，可以用传记电泳迁移率和相对分子质量的对数作为标准曲线来测量未知蛋白质的相对分子质量。下一个说法是()A: SDS可以形成蛋白质和复合物，从而掩盖徐璐其他蛋

5、白质之间的电荷差异。传记电泳迁移率与分子的大小B:牙齿已知的相对分子质量标准蛋白质的传记英同台相比，被测试蛋白质的相对分子质量C: SDS可能参与引发剂和催化剂的作用，形成聚丙烯凝胶D。如果不测量蛋白质的相对分子质量，只分离混合物，则2、实验操作、蛋白质提取和分离一般分为4个阶段：(1)样品处理：包括红细胞清洗；从释放血红蛋白离心等工作中收集的血红蛋白溶液。(2)粗分离：透析去除分子小杂质。(3)精炼：通过凝胶色谱法去除分子量大杂质蛋白。(4)纯度确认：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳评估。为什么不用鸡的红细胞，用哺乳动物的红细胞作为实验材料？(a)样品处理，血液成分，(a)样品处理和粗分离，1，红细胞

6、清洗：(2)目的：去除杂蛋白。血柠檬酸钠低速短时离心分吸上层黄血浆暗红色红细胞液5倍体积生理盐水慢速短时离心分吸上清液重复洗涤，(1)步骤：柜离心机，第一次离心力结果，3次洗涤后结果？洗涤红细胞蒸馏水甲苯磁搅拌器充分搅拌10分钟红细胞破裂释放血红蛋白，2，血红蛋白释放：蒸馏水的作用是添加甲苯。这使得红细胞吸收大量水，破裂，溶解红细胞的细胞膜，加速红细胞破裂，搅拌器转子、磁搅拌器和搅拌器工作。3.血红蛋白分离红细胞混合液，透析包：小分子自由通过，大分子留在口袋里。清除小分子的杂质，透析袋透析，透析过程，(2)精炼凝胶颜色频谱工作，1。凝胶颜色频谱柱制作：2 .凝胶颜色频谱柱填充：3。添加和清洗样

7、品，(2)操作凝胶颜色频谱，制作1地板插头：选择适合堵住玻璃喷嘴的橡胶塞子，挖凹洞，挖移动管头，盖上尼龙网，用100颈尼龙纱包起来，插入玻璃管的一端。(阿尔伯特爱因斯坦，Northern Exposure(美国电视电视剧)，制作塔插头：钻孔安装玻璃管。组装：根据上述三者的位置将它们组装成一个。安装其他子结构。P68插在底部插头中的玻璃管的顶部不应超过橡胶插头凹孔的底部，如图5-19所示。否则很难铺尼龙网，可能会发生液体残留物。蛋白质分离不彻底。，材料：交联葡聚糖凝胶g-75；20mmol/L磷酸缓冲液充电：2。凝胶频谱柱的填充：立即用磷酸缓冲液洗涤平衡12h，洗涤平衡，一次慢慢倒入。轻拍，填充

8、悬浮液，凝胶颗粒洗涤剂沸水浴，凝胶颗粒蒸馏水充分融化，根据频谱柱体积计算凝胶用量，将频谱柱垂直固定在支架上，准备悬浮液，计算凝胶，固定频谱柱。注：1，填充凝胶时尽量紧密，减少凝胶颗粒之间的间距。3，洗脱液面不要低于凝胶表面。否则，气泡混合，会影响柱内液体流动和最终生物大分子物质的分离效果。2，填充凝胶柱时泡沫存在，渡边杏。因为泡沫会打乱洗涤剂液中蛋白质的溶出顺序，降低分离效果。4，洗脱液干燥，凝胶粒子暴露现象不能发生。组装的凝胶柱如图5-21，3所示。添加和洗脱样品，调整缓冲液：在添加之前打开底部出口，将柱内的缓冲液慢慢降低到与凝胶面相同的水平，关闭出口。透析样品：吸管将1ml样品放在颜色频谱

9、柱的顶部，滴样品时吸管喷嘴贴在管壁上进行移动加形，同时注意不要破坏凝胶面。样品渗透到凝胶床：添加样品后，打开底部出口，使样品渗透到凝胶床，样品完全进入凝胶层后，关闭底部出口。溶出：小心地将pH=7.0的20mmol/l的磷酸缓冲液放在适当的高度，连接缓冲液溶出瓶，打开底部出口洗涤。收集：红色中的蛋白质接近频谱柱底部时，用试管收集流出液，每5毫升收集试管继续收集。(分离过程)如果红色带均匀移动，则表明颜色频谱柱制作成功。1、不要碰，破坏凝胶面。2、贴纸加样品。3、让吸管喷嘴沿管壁移动。3 .样品的添加和溶出，色谱开始，收集到的精制蛋白质，(3) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，确保精制蛋白质符合要求，蛋白质纯度需要确认，鉴定方法中最常用的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。原理见教科书第69页。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质分子量测量方法，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质分子量测量中已知的分子量标准蛋白质组可以同时用于电泳。根据已知分子量的标准蛋白质的传记电泳谱带位置，可以用传记电泳迁移率和分子量的对数作为标准曲线来测定未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、车库量、低分子质量标准蛋白试剂销售。知识摘要、血红蛋白提取和分离、a