细胞工程--C4.5 细胞的冻存、复苏和运输_第1页
细胞工程--C4.5 细胞的冻存、复苏和运输_第2页
细胞工程--C4.5 细胞的冻存、复苏和运输_第3页
细胞工程--C4.5 细胞的冻存、复苏和运输_第4页
细胞工程--C4.5 细胞的冻存、复苏和运输_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、第四章细胞培养、细胞培养、4.1培养细胞的生物学特征4.2细胞培养液4.3细胞的基本培养技术4.4细胞系和细胞株的建立4.5细胞的冻存、复苏和运输、细胞冻存和复苏、细胞低温冻存是细胞室的常规工作。 细胞冻结保存与细胞传代保存相比，可以减少输入、经费、减少污染、减少细胞生物学特性的变化。 冻存和复苏的原则：慢慢冻结快，细胞冷却到零度以下，细胞脱水，细胞中的可溶性物质浓度上升，在细胞内形成冰晶。 慢慢冷冻，可以使细胞逐步脱水，使细胞内不产生大的冰晶，相反结晶变大，大的结晶会引起细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。 复苏过程应及早融化，目的是防止小冰晶即冰晶的再结晶。 慢冻结程序、标准程序：温度在-25以上

2、、12 /min温度在-25以下、510 /min温度达到-100时，可快速放入液氮中的细胞冻结器的简易程序：将冷冻管(管口朝上)放入纱布中常用的低温保护剂为DMSO，能快速侵入细胞，提高细胞膜对水的渗透性，降低冰点，延缓冻结过程，使细胞内的水分在冻结前泄漏到细胞外，在细胞外形成冰晶，减少细胞内的冰晶，减少冰晶对细胞的损伤。 细胞冻存方法，预先制备冻存液：含20%血清培养基的10%DMSO采集对数生长期细胞，用胰酶消化后，加入适量的冻存液，用吸管吹散制成细胞悬液(1106 5 106细胞/ml )，将细胞放入冻存管，密封后标记冻存的DMSO 从人造血干细胞的研究证明、细胞复苏方法、液氮中取出冷

3、冻管，迅速放入3738水浴中，使之融化(1分钟左右)。 在5分钟内用培养液稀释到原来体积的10倍以上。 低速离心10分钟。 去上清，加入新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 由于细胞转运，现在培养细胞在国内可以相互捐赠，进行国际间的交流，因此需要一种转运细胞的方法。 出厂方法有两种：种，一种用液氮或干冰保存，效果好，但需要特殊的容器，如液氮罐等，液氮和干冰蒸发快，适合空运，麻烦，二种是充液法，比较简便，运输过程如下在等到达80%或90%时，将旧的培养液除去放入新的培养液中，量达到培养瓶颈(容易污染)，留出一点空间，堵塞瓶塞，空气过多运输2 .适当的包装和运输一般在4、5天内到达目的地，严重影响细胞活力细胞培养的优缺点：1.能简化细胞的生长环境。 2 .可以容易地控制实验要素。 3 .易于观察实验结果。 4 .可研究的细胞种类极其广泛。 5 .可同时大量提供均匀性好的细胞群，降低实验成本。 6 .可以生产大规模的生物制品。 缺点：1.体外培养的动物细胞对营

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论