2014-2015学年人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养和分离课件(共32张PPT).ppt

1、,微生物的培养和应用,课题1 微生物的实验室培养,一、培养基,1、概念：,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质。,一般都含有 四类物质，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。,2、营养成分：,碳源、氮源、水、无机盐,pH 特殊营养物质,O2,3、分类：,按形态划分,固体培养基,液体培养基,半固体培养基,微生物在 培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落,固体,（由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落）,根霉 曲霉 青霉,按用途划分,基础培养基：,鉴别培养基:,含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）,用来将某种或某类微生

2、物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。在培养基中加入特殊营养物质或化学物质，有利于特定微生物的生长，同时抑制其它微生物的生长。如 的培养基。,选择培养基:,用于鉴别不同类型微生物的培养基。微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化。如？,以尿素为唯一氮源、以纤维素为唯一碳源,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红。,【例】以下是单克隆抗体制备流程示意图：,根据培养基的_分类，图中HAT培养基属于_培养基,选择,用途,二、无菌技术,（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 。,（2）将用于微生物培养的

3、器皿、接种用具和培养基等器具进行 .,（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰 附近进行。,（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 相接触。,清洁和消毒,灭菌,目的：防止实验室的培养物 ；同时避免操作者自身被微生物感染。,被其他微生物污染,部分,芽孢和孢子,所有,芽孢和孢子,煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 化学药剂消毒法、 紫外线消毒法,灼烧灭菌、 干热灭菌、 高压蒸汽灭菌,煮沸消毒法： 巴氏消毒法： 化学药剂： 紫外线：,针对不耐高温的液体,接种室、超净工作台,培养皿.吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥,灼烧灭菌： 干热灭菌： 高压蒸汽灭菌：,接种环等金属工具,

4、实验操作者的双手,培养基,1、消毒方法,2、灭菌方法,【2010广州调研】下列实验方法及其结果合理的是 A稀释的鸡蛋清溶液与蛋白酶混合后用双缩脲试剂检测会发生紫色反应 B酒精溶液与重铬酸钾溶液混合后在沸水浴条件下才会出现灰绿色 C在植物组织培养中，可用酒精对外植体进行灭菌 D用二苯胺试剂鉴定DNA时，在沸水浴条件下溶液呈蓝色,（双选）,计算称量溶化灭菌倒平板,三、微生物培养的实验操作,1、制备培养基,制备培养基,纯化大肠杆菌,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,用手触摸，刚刚不烫手时,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,灼烧灭菌，防止瓶

5、口的微生物的污染,有关问题,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,3.为什么将平板倒置？,2、纯化大肠杆菌,平板划线法:,稀释涂布平板法:,(1) 接种方法,.连续划线，.逐步稀释.,.梯度稀释，.分别涂布.,将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_,在_旁冷却接种环，并打开棉塞,将试管口通过火焰,.将已_的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液,左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划_条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。,.将试管通过火焰，并塞上棉塞,火焰,冷却,三至五,灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注

6、意不要将最后一区的划线与第一区相连。,末端,烧红,将平板_放入培养箱中培养。,倒置,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,避免接种环温度太高，杀死菌种,将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中,取少量稀释液滴加到培养基表面,待酒精燃尽后冷却810s,将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃灼烧,用涂布器将菌液均

7、匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀,稀释涂布平板法,(3)菌种培养：,将接种的培养基（至少3个）和一个未接种的培养基倒置放入37的恒温箱中。,(4)实验结果观察: 未接种的培养基表面是否有菌落生长？ 菌落的形态、大小、颜色？,(5)菌株的保存方法,4冰箱保藏,甘油管藏（-20）,固体斜面,纯化大肠杆菌的实验是否需要设置对照实验？,【例2】进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？ A双手带上胶手套 B接种前后都灼烧接种环 C接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面 试管口 D要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌 或加热灭菌,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一、

8、筛选菌株,无机盐,碳源,氮源,凝固剂,尿素是唯一氮源的选择培养基,二、统计菌落数目,用什么方法统计？,稀释涂布平板法 显微镜直接计数,一般选择菌落数在 的平板进行计数。 统计菌落数往往比活菌的实际数目 。,30-300,低,（酵母菌）血球板计数法,2.计算公式 每克样品中的菌落数（CV）M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。,稀释涂布平板法统计菌落数目 1.理论依据： 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30300的平板进行计数。,三、设置对

9、照,目的：排除无关变量（非测试因素）的影响，提高实验结果的可信度。,(1)空白对照：培养基是否有杂菌污染 (2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。,四、实验设计,土壤取样制备培养基样品稀释涂布培养观察统计,1.取样时，一般要铲去表层土。 2.分别制备 的选择性培养基和牛肉膏蛋白胨培养基（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌） 3.不同的微生物要采用不同的稀释度。 4.每个稀释度需倒6个平板： 4个选择性培养基，3个涂布，1个空白； 2个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。,以尿素为唯一氮源,将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个

10、稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上；培养后，计算出同一稀释度菌落平均数。,三重复组 求平均值使结果更准确,五、实验结果的分析、评价,(1)空白对照：是否有杂菌污染 (2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。,结果： 酚红指示剂变_，初步鉴定该细菌能够分解尿素,分析：细菌能分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，氨增加pH升高，酚红由无色变为红色。,操作：在以_为唯一氮源的培养基中加入 。,尿素,（鉴别培养基）,红色,六、实验结果的鉴定,酚红指示剂,课题3 分解纤维素的微生物的分离,一、纤维素的分解,纤维素,酶,酶,葡萄糖苷酶,（多糖） 与刚果红作用,红色复合物,纤维素酶是一种复合酶,二、实验设计,