志贺氏菌的检验.ppt

1、志贺氏菌的检验,一、生物学特性 （一）形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛 23um*0.50.7um,（二）培养特性,1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37，PH6。47.8 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。,（三）生化反应,1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸

2、盐。 4、甲基红阳性，靛基质不定。 5、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。,二、志贺氏菌的致病性与食物中毒,（一）传染源 食物、病人、粪便、苍蝇等,（二）志贺氏菌的致病性,致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素 临床症状 A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。,GB/T4789.5-2003中志贺氏菌检验程序,三、志贺氏菌的检验,（一）实验内容,样品处理选择性增菌选择性平板分离生化学试验结果报告,第一次 样品处理和增菌培养,预先准备并灭菌的器材 规格名称数量 1、18180m

3、m试管 6支 2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶酌情 7 、不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 酌情,（一）样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min。 （二）增菌培养 放于36培养68h。 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。,第二次 接种选择性平板进行分离培养 （一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。

4、 （二）培养 放于36培养1824h。 结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落,HE平板原理及反应,发酵乳糖的肠杆菌,不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌,不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌,SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar),大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌,是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了,麦康凯琼脂平板,菌落为粉红色，半透明的， 可能为志贺氏菌,EMB平板照片及原理,菌落为无色半透明状， 可能为志贺氏菌,大肠杆菌,第三次 初步生化试验 （一）接种三糖铁琼

5、脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36培养1824h，分别观察结果。 （二）培养 放于36培养1824h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力,志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。 志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。,三糖铁（TSI）琼脂试验的原理,2志贺氏菌3沙门氏菌4大肠杆菌,葡萄糖半固体原理及结果。,1. 铜绿

6、假单胞菌2. 志贺氏菌 3. 枯草芽孢杆菌,在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：,（1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 （2）在1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。 （4）产气的培养物 （5）有动力的培养物 （6）产H2S的培养物,第四天、进一步的生化试验,凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。,（一）进一步生化试验,即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解， 36培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。,接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到： 5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质试验。 见P167：根据不同生化反应结果，可分为A群（痢疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。,（二）生化分群试验,各项生化试验现象,葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落。 西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。 赖氨酸和鸟氨