实验六微生物的生理生化反应.ppt

1、实验六微生物的生理生化反应,实验内容,大分子物质的水解试验 淀粉水解试验 糖发酵试验 葡萄糖发酵 乳糖发酵 IMViC试验 吲哚试验 甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸盐试验,一、大分子物质的水解试验,目的要求 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统； 掌握进行生物大分子水解试验的原理和方法。 基本原理 大分子物质淀粉、蛋白质和脂肪必须通过胞外酶水解成较小的化合物后，才能被微生物吸收利用。,实验器材 菌种 枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，变形杆菌 培养基 固体淀粉培养基 溶液或试剂 卢戈氏碘液 仪器或其他用具 无菌平板，接种针,淀粉水解试验,大肠 杆菌,变形杆菌,

2、枯草芽孢 杆菌,37 均 倒 匀 置 铺 培 满 养 平 24h 板 滴 入 少 量 碘 液 ，,菌苔周围出现无色透明圈：说明淀粉已被水解，阳性； 透明圈大小表明胞外淀粉酶活力的高低。,实验结果,记录实验结果：“+”表示阳性；“-”表示阴性。,思考题,你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？ 不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？,二、糖发酵试验,目的要求 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用； 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 基本原理 糖类是绝大多数细菌的碳源和能源，但是，不同种细菌对不同糖的分解性能和产物并不一致。有些细菌能分解某种糖产酸和产气，有些细菌只产酸不产气，有些细菌则不

3、能分解。,实验器材 菌种 大肠杆菌，普通变形杆菌 培养基 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支（内装有倒置的德汉氏小管） 仪器或其他用具 试管架，接种环,操作步骤,取葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支 分别接种普通变形杆菌、大肠杆菌 第3支不接种（对照,老师提供）,6支试管37培养24-48h,观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡产生,产酸：溴甲酚紫指示剂由紫色（pH6.8）黄色（pH5.2）,糖发酵试验 左侧阳性结果右侧阴性结果,实验结果,记录实验结果：“+”表示产酸或产气；“-”表示不产酸或不产气。,思考题,假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结

4、果？,三、IMViC试验,目的要求 了解IMViC反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 实验器材 菌种 大肠杆菌，产气肠杆菌 培养基 蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基 溶液或试剂 甲基红指示剂，40%KOH，5%-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。,1、吲哚试验,基本原理 检测细菌代谢色氨酸产生吲哚的能力。 有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸；吲哚和对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。,操作步骤,分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于蛋白胨水培养基,37培养2d,加0.5mL醚，充分摇动，静置1-3min；,乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚试剂,

5、若在乙醚和培养物之间产生红色环状物阳性反应,2、甲基红（M.R）试验,基本原理 检测细菌是否能分解葡萄糖产酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。 当细菌代谢糖产生酸时，培养基中的甲基红指示剂由橘黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2）。,操作步骤,分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基,37培养2d,加入甲基红指示剂2滴,培养基变为红色阳性；培养基变为黄色阴性,3、伏-普（V.P）试验,基本原理 测定细菌发酵葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。 某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇；乙酰甲基甲醇在碱性条件下被氧化为二乙酰；二乙酰与蛋白

6、胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即为VP试验阳性。,操作步骤,分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基,37培养2d,加入5-10滴40%KOH，再加入等量的5%-萘酚，用力振荡,置于37温箱中保温15-30min,若培养物呈红色伏-普反应阳性,4、柠檬酸盐试验,基本原理 检测细菌利用柠檬酸盐的能力。 有些细菌可利用柠檬酸钠作为碳源，如产气肠杆菌；而有些细菌则不能利用柠檬酸盐，如大肠杆菌。细菌在分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物，使培养基的pH升高，当加入1%溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基由绿色变为深蓝色。,操作步骤,分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于柠檬酸盐斜面培养基,37培养2d,观察斜面培养基上有无细菌生长和变色,培养基变为蓝色阳性；培养基变为绿色阴性,实验结果,记录实验结果：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。,思考题,讨论IMViC试验在医学检验上的意义。 解释在细菌培养中吲哚检测的化学