浙江大学生物化学实验甲

浙江大学生物化学实验甲Tag内容描述：<p>1、质粒DNA的提取与电泳鉴定 1、质粒简介 质粒是一种寄生性的自主复制子，存在于细菌等细 胞中，为双链闭环的DNA分子，大小为1kb200kb 之间，具有自主复制和转录的能力，但其复制和转 录要利用宿主细胞（细菌）编码的一些酶和蛋白质 。 2、分离纯化质粒的原理 分离纯化质粒DNA主要是利用宿主染色质DNA与质 粒DNA之间的差异来进行的。 质粒DNA的提取与电泳鉴定 细菌DNA与质粒DNA形状上均为双链环形，但二 者的分子量相差较大，细菌DNA的分子量在109D 左右，而质粒DNA的分子量仅为106 107D， 提取纯化质粒的过程中，细菌DNA大多断裂成线 状分子。</p><p>2、实验九 氨基移换反应及其产物的鉴定 丁鸣 一、实验目的和要求 1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理； 2、学习纸层析的原理和操作技术。 二、实验基本原理 1.氨基移换反应： 在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的-氨基和-酮酸的-酮基 之间发生的互换反应。 转氨酶的种类很多，任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶 催化。转氨酶的最适pH接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草 转氨酶（GOT）的活性最强。 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶 （glutamic pyruvic transami。</p><p>3、血清谷丙转氨酶测定 1、原理 转氨作用：将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移 到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这 一反应的酶称为转氨酶。 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、 肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT） 的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种 酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。 血清谷丙转氨酶测定 当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿 胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷 丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因 此测定这些酶的。</p><p>4、蛋白水解酶活力测定,一、原理 1、蛋白水解酶的概念 专门催化蛋白质的肽键水解，生成游离的氨基酸和短肽 的一类酶。 2、酶活力的定义 一定条件下（温度，pH，底物浓度等），酶催化某一化 学反应的能力。其大小可用反应速度来表示。因此酶活力的 测定也就是酶催化反应速度的测定。,蛋白水解酶活力测定,3、蛋白水解酶活力单位的定义 在40及pH7. 0条件下以酪蛋白为底物，每min水解产生 1ug酪氨酸的酶量为一个活力单位。 4、本实验的测定原理,酪蛋白,胰蛋白酶,短肽，蛋白质等,三氯乙酸,短肽,Folin-酚乙试剂,蓝色物 680nm处具特征光吸收，OD值与。</p><p>5、用正交法测定几种因素对酶活力的影响,1、正交法简介 在生产实践中,试制新产品、改革新工艺、寻求好的 生产条件等,都需要先做试验。而试验总要花费时间，消 耗人力、物力、因此人们总希望做实验的次数尽量少，而 得到的结果尽可能的好。要达到这个目的，就必须事先对 实验作合理的安排，也就是要进行试验设计。 实际问题是复杂的，对实验有影响的因素往往是多 方面的。我们常常需要考察各因素对实验影响的情况，但 在多因素、多水平试验中，如果对每个因素的每个水平都 互相搭配进行全面试验，需要做的试验次数就会很多。,用正交法测定几种。</p><p>6、植物基因组DNA的提取 及纯度与含量的测定,实验八,第一部分,植物基因组DNA的提取,一、实验目的和要求 1、学习并掌握植物基因组DNA的提取原理和方法； 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3、学习并掌握对电泳检测基因组DNA结果的初步分析。,二、实验基本原理 植物基因组DNA的提取方法就其提取原理主要有二种：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB)法、十二烷基硫酸钠 (SDS)法。十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使。</p><p>7、不同植物SOD提取及活力测定,1、SOD简介 超氧化物歧化酶（SOD）是一种广泛存在于动、植物和微生物中的金属蛋白酶，是一种重要的抗氧化剂，可清除自由基，其清除自由基的反应如下： 生物体在长期的生命活动中，常常会因为环境因素或生理条件的变化而出现氧自由基增加、抗氧化能力降低的情况，并由此引发一系列疾病。如脂质的过氧化与膜疾病、肿瘤、衰老、心血管疾病、创伤、辐射损伤、高度中毒等。,不同植物SOD提取及活力测定,SOD由于可以清除氧自由基，因此可以防止这些疾病的产生。而且，SOD还可作为一种添加剂，添加到化妆品和食品中，在。</p><p>8、酵母蔗糖酶的制备及其动力学性质分析 一 蔗糖酶 invertase or sucrase 简介 蔗糖酶 EC 3 2 1 26 为水解酶类 主要存在于植物和微生物体内 专一性地催化蔗糖 水解为果糖和葡萄糖的反应 酵母蔗糖酶分子量约270000D pI约。</p><p>9、质粒DNA的提取与酶切鉴定,（一）质粒DNA的提取与电泳鉴定1、质粒简介质粒是一种寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA分子，大小为1kb200kb之间，具有自主复制和转录的能力，但其复制和转录要利用宿主细胞（细菌）编码的一些酶和蛋白质。2、分离纯化质粒的原理分离纯化质粒DNA主要是利用宿主细菌DNA与质粒DNA之间的差异来进行的。,（一）质粒DNA的提取与电泳鉴定,细菌DN。</p><p>10、1 酵母蔗糖酶的制备原理酵母蔗糖酶的制备原理 一 蔗糖酶一 蔗糖酶 invertase or sucrase 简介简介 蔗糖酶 蔗糖酶 EC 3 2 1 26 为水解酶类 主要存在于酵母中 如啤酒酵母 面 为水解酶类 主要存在于酵母中 如啤酒酵母 面 包包 酵母 也存在于曲霉 青霉和毛霉等霉菌和细菌及植物中 可专一性地催化蔗酵母 也存在于曲霉 青霉和毛霉等霉菌和细菌及植物中 可专一性地催化蔗 糖水。</p><p>11、离子交换分离酵母蔗糖酶离子交换分离酵母蔗糖酶 一 蔗糖酶的纯化一 蔗糖酶的纯化 1 酵母细胞破碎 酵母细胞破碎 称取干酵母粉 15g 石英砂约 5g 放入研钵中直接研磨约 5 分钟 取 50 ml pH7 3 20mmol L 的 Tris HCl 分 5 6 次加入研砵中 边加边研磨 用力研磨 20 分钟后 将糊状液体转移到 2 支 50ml 离心管中 平衡后 于 4 12000rpm 离心 1。</p><p>12、肌糖元的酵解 肌糖元的酵解作用 肌糖元在缺氧的条件下 经过一系列的反应最后转变为乳酸的过程 肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式 当机体突然需要大量的能量而又供氧不足 如剧烈运动 时 糖元的酵解作用可暂时满足能量消耗的需要 在有氧的条件下 组织内糖元的酵解作用则受到抑制 此时 糖类主要通过有氧氧化的方式进行代谢 1 原理 肌糖元的酵解原理 肌糖元的酵解 乳酸的测定原理特点 该法比较灵敏 每。</p><p>13、血清谷丙转氨酶测定,1、原理 转氨作用：将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移 到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这 一反应的酶称为转氨酶。 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、 肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT） 的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种 酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。,血清谷丙转氨酶测定,当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织。</p><p>14、葡聚糖凝胶层析法分离混合物,1、原理 凝胶层析：指混合物随流动相经过有凝胶颗粒作固定相的柱子时，混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术。又称为分子筛层析或排阻层析。 层析用的凝胶为不溶于水的化学惰性物质，离子基团含量少，颗粒大小均匀，网眼大小的选择范围宽广，机械硬度高等特点。 常用的有葡聚糖凝胶（Sephadex）、聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel）及琼脂糖凝胶（Sepharose）。,葡聚糖凝。</p><p>15、定磷法测定RNA含量,1、原理 1、核酸的水解,定磷法测定RNA含量,2、定磷法的原理 a、比色法的测定原理 由于钼蓝的OD660值与溶液中的磷含量成正比，因此，如以磷含量为横坐标，OD660值为纵坐标，二者之间的关系应为直线。如下图：,定磷法测定RNA含量,未知样品磷含量的测定： 由未知样品的OD660值， 通过标准曲线，用作图 法即可知道未知样品的 磷含量，如右图所示： b、定磷法的特点。</p>