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文档简介

医学微生物学实验微生物学教研室2011年 12月实验内容一、细菌染色标本检查法抗酸染色法（操作）二、标本片观察：（钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）目的要求l 掌握抗酸染色技术l 掌握钩体， 白色念珠菌、曲霉、枯草杆菌基本形态l 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的 脂质，主要是分枝菌酸 ，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过 加热和延长染色时间 来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色 。l 齐 -尼氏抗酸染色法是在加热条件下使 分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物 ，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为 红色 ，而其他细菌及背景中的物质为 兰色 。一、抗酸染色原理抗酸染色l 材料：标本：卡介苗染液：石炭酸复红， 3%盐酸酒精，美蓝器具：同革兰氏染色实验方法：1、细菌涂片标本的制备涂片 干燥 固定3、 油镜观察1）初染： 用玻片夹夹持涂片标本，滴加 石炭酸复红2-3滴 ，在火焰高处徐徐加热， 切勿沸腾 ， 出现蒸汽即暂时离开 ，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸， 加热 3-5分钟 ， 待标本冷却后用水冲洗 。2）脱色： 3%盐酸酒精脱色 301；用水冲洗。3） 复染 ：用 碱性美兰溶液复染 1，用水冲洗后用吸水纸吸干。2、 染色抗酸染色步骤1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片 干燥 固定抗酸染色步骤l 2、染色包括初染、脱色、复染三步。石炭酸复红维持 3-5 3%盐酸酒精 30 1 美蓝复染 1 冲洗 干燥 油镜观察冲洗 冲洗初染 脱色 复染三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色 ，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈 兰色 。注意事项：1、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀4、初染加热维持 35分钟，勿沸腾烧干5、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌二、标本片观察l 白色念珠菌l 钩体l 枯草杆菌l 曲霉白色念珠菌钩端螺旋体类
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