elsd药典方法和实验整理

ELSD 药典方法和实验整理 1药典规定： 产品名 检测化合物 药典中所在页数 1 黄芪 黄芪甲苷 一部 P212 2 炙黄芪 黄芪甲苷 一部 P213 3 银杏叶制剂中萜类内酯 白果内酯 一部 P220 4 银杏叶提取物 银杏内酯A，银杏内酯B， 银杏内酯C，白果内酯 一部 P281 5 银杏叶片 白果内酯 一部 P597 6 地肤子 地肤子皂苷Ic 一部 P81 7 知母 菝葜皂苷元 一部 P148 8 浙贝母 贝母素甲，贝母素乙 一部 P205 9 路路通 路路通酸 一部 P248 10 薏苡仁 甘油三油酸酯 一部 P260 11 乙肝宁颗粒 黄芪甲苷 一部 P290 12 三金片 羟基积雪草苷 一部 P326 13 玉屏风口服液 黄芪甲苷 一部 P409 14 补中益气丸（水丸） 黄芪甲苷 一部 P480 15 硫酸卡那霉素 卡那霉素 二部 P725 16 硫酸卡那霉素注射液 卡那霉素 二部 P725 17 硫酸卡那霉素滴眼液 卡那霉素 二部 P725 18 注射用硫酸卡那霉素 卡那霉素 二部 P726 19 硫酸依替米星 依替米星 二部 P741 20 硫酸依替米星注射液 依替米星 二部 P741 21 注射用硫酸依替米星 依替米星 二部 P742 22 硫酸庆大霉素 庆大霉素、小诺霉素 二部 P731 23 硫酸庆大霉素片 庆大霉素、小诺霉素 二部 P731 24 硫酸庆大霉素注射液 庆大霉素、小诺霉素 二部 P731 25 硫酸庆大霉素颗粒 庆大霉素、小诺霉素 二部 P732 26 硫酸庆大霉素滴眼液 庆大霉素、小诺霉素 二部 P732 2实验整理： （1）黄芪 药典要求：（一部 P212） ；C18 色谱柱，流动相-乙腈：水=32：68，蒸发光散射检测器， 理论塔板数（以黄芪甲苷为标准）不小于 4000。 实际实验： 黄芪样品：用户提供 实验方法：色谱柱： Unimicrotech C18， 2504.6mm , 5m 流动相： 乙腈:水梯度洗脱 流速： 1mL/min 时间 min 0 20 40 56 60 70 75 乙腈 4 25 45 65 80 90 100 水 96 75 55 35 20 10 0 蒸发光散射检测器条件： 气体流速：3L/min 蒸发温度：40 实验结果： 1黄芪甲苷对照品 40.16 6 18 27 36 45 54 63 72 81 90 99 108 mV 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 min 2.黄芪样品 甘肃样品 1.153 2.432 60 3.001 4.043 5.201 6.891 7.631 8.597 13.229 14.652 16.73 0 21.88 7 23.17 4 24.513 25.84 4 26.948 28.023 30.17 030.739 31.30 2 32.48 2 33.65 7 36.30 7 37.28 7 40.1 23 43.68 1 45.41 3 48.06 8 50.03 4 58.37 3 59.079 62.22 7 63.81 8 68.12 7 69.18 5 71.50 0 75.38 2 76.72 7 77.960 79.05 8 82.09 1 85.56 8 88.20 4 26.4 26.8 272 27.6 28 28.4 28.8 29.2 29.6 30 30.4 mV 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 min 吉林样品： 1.160 2.244 2.430 2.632 713.908 3.391 14.78 4 21.9 93 22.43 8 22.90 0 2 4.977 28.24 7 29.1 50 29.72 7 30.75 3 31.71 0 32.542 33.40 6 34.451 38.09 3 39.68 9 40.12 7 40.79 2 43.71 8 44.56 0 45.36 2 49.25 2 50.10 6 51.80 7 58.33 9 59.1 03 62.15 3 63.69 6 68.16 9 70.89 7 71.45 3 73.08 1 74.01 8 75.34 4 76.73 7 79.04 7 82.11 4 88.35 3 26 26.4 26.8 27.2 27.6 28 28.4 28.8 29.2 29.6 30 mV 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 min 小结： 实验还未按照药典方法进行对照实验；根据实际用户的样品实验，黄芪皂苷类物质在蒸发 光散射检测器上有良好的检测。 （2）银杏 药典要求：（一部 P220） ； C18色谱柱，流动相-甲醇：四氢呋喃：水=25：10：65，蒸发 光散射检测器，理论塔板数（以白果内酯为标准）不小于 3000。 实际实验： 白果内酯样品：标准对照品 实验方法：色谱柱：C18，250*4.6 ，5um 流动相：正丙醇：四氢呋喃：水=1：25：74 进样量：10ul 流速：1ml/min 柱温：30 蒸发光散射检测器条件： 检测器：UM3000 ELSD 蒸发温度：100 载气流量：2.5 L/min 实验结果： 13.47 0 C 16.74 3 19 .173 A 24.63 4 B 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 mV 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 min 小结： 实验还未按照药典方法进行对照实验； （3）卡那霉素 药典要求：（二部 P725） ；C18 色谱柱；流动相-0.2mol/L 三氟乙酸溶液-甲醇（95:5） ；蒸 发光散射检测器；以卡那霉素和卡那霉素 B 对照品适量，用水溶解并制成每 1ml 各约含 80ug 的混合溶液，取 20ul 注入液相色谱仪，连续进 5 针。分离度都大于 5；峰面积重现性 都小于 2%。 实际实验： 卡那霉素样品：标准对照品 实验方法：色谱柱：ProntoSIL C18(250*4.6mm,5um)； 流动相：0.2mol/L 三氟乙酸溶液-甲醇（95:5 ） ， 流速：1ml/min 蒸发光散射检测器条件： 蒸发温度：110 度 气体流速：3L/min 实验结果： 重复性实验： 样品 卡那霉素 卡那霉素 B 项目 A T A T 分离度 test1 186759 4.225 126122 5.504 6.07 test2 188243 4.211 124418 5.503 6.05 test3 187439 4.219 126666 5.506 5.99 test4 182583 4.199 122495 5.495 6.24 test5 189022 4.223 123456 5.507 6.09 AVE 186809.2 4.2154 124631.4 5.503 6.088 SD 2510.588 0.010621 1757.327 0.004743 RSD% 1.34 0.252 1.41 0.861 定量分析：按药典要求，取卡那霉素对照品适量，精密称定，用水溶解并制成每 1ml 中约 含卡那霉素 0.1、0.15、0.2 的溶液。取 20ul 注入液相色谱仪，以对照品浓度的对数植与相 应的峰面积对数植计算回归方程。结果线性相关系数大于 0.99。 浓度 g/ml 0.1 0.15 0.2 261797 429352 656244 260325 428246 643096 247391 448778 622726 A 峰面积 AVE 256504.3 435458.7 640688.7 Log(浓度） -1 -0.82391 -0.69897 Log(Aave) 5.409095 5.638947 5.806647 y = 1.3196x + 6.728 R2 = 0.9999 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 6 -1.2 -1.1 -1 -0.9 -0.8 -0.7 -0.6 -0.5 小结： 已按照药典方法完成对照实验，实验结果表明，UM3000 蒸发光检测器可完全符合药 典检测方法要求。 （4）依替米星 药典要求：（二部 P741） ；C18 色谱柱；流动相-0.2mol/L 三氟乙酸溶液-甲醇（84:16） ，流 速 0.5ml/min；蒸发光散射检测器；以依替米星和萘替米星对照品适量，用水溶解并制成每 1ml 各约含 0.2mg 的混合溶液，取 20ul 注入液相色谱仪，连续进 5 针。分离度不小于 1.2；峰面积重现性都不大于 2%。 实际实验： 依替米星和萘替米星对照品； 实验方法：流动相：甲醇：水（16：84）含 0.2%TFA 色谱柱：Unimicro C18 250*4.6 5um 流速：0.5ml/min 样品浓度：0.5mg/ml 蒸发光散射检测器条件： 检测器：UM3000 ELSD 蒸发温度：100 度 气体流速：3L/min 实验结果： 4.928 11.64 0 12.20 0 9 9.6 10.2 10.8 11.4 12 12.6 13.2 13.8 14.4 15 mV 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 小结： 未按药典做对照品重复性和定量性实验。 （5）庆大霉素、小诺霉素 药典要求：（二部 P731） ；C18 色谱柱；流动相-0.2mol/L 三氟乙酸溶液- 甲醇（92：8） ，流 速 0.6ml/min；蒸发光散射检测器；以庆大霉素和小诺霉素对照品适量，用水溶解并制成每 1ml 各约含 0.2mg 的混合溶液，取 20ul 注入液相色谱仪。分离度应符合要求；峰面积重现 性都不大于 2%。 实际实验： 庆大霉素和小诺霉素对照品； 实验方法：色谱柱：Unimicro C18(5m，4.6*250mm) 流动相：甲醇:水（8：92） （含 0.15%TFA） 流速：0.6ml/min 浓度：0.2mg/ml 蒸发光散射检测器条件： 检测器：UM3000 ELSD 蒸发温度：90 载气流速：2.8L/min 对照品： 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44mv 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 样品：硫酸庆大霉素注射液 浓度：0.5mg/ml 0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 mv 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 小结： 未按药典方法进行对照品实验（TFA 浓度低于药典方法） ；未进行重复性和定量性实验。 其他 ELSD 相关实验 （1）酯维注射液 实验方法： 色谱柱：硅胶柱，250*4.6，5um 流动相：正己烷：异丙醇：乙酸=98.9：1：0.1 流速：1ml/min 柱温：室温 对照品 20 ul 蒸发光散射检测器条件： 检测器：UM3000 ELSD 蒸发温度：60 载气流量：2.5 L/min 实验结果： 3.335 4.289 -30 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300mV 0.6 1.2 1.8 2.4 3 3.6 4.2 4.8 5.4 6 min （2）氨基酸 实验方法： 色谱柱：ProntoSIL C18（2504.6 mm,5 m） 流动相：乙腈/水（10/90） ，含 TFA0.1% 流动相流速：1 ml/min 蒸发光散射检测器条件： 检测器：UM3000 ELSD 蒸发管温度：40 载气流速