木酚素对糖尿病性肾病血脂影响的研究110

木酚素对糖尿病性肾病血脂影响的研究 一 摘要：通过复制糖尿病肾病小鼠模型，给予小鼠喂养加入一定剂量的木酚素饲料，观察 小鼠肾脏变化及其血脂代谢指标的变化情况探讨木酚素对糖尿病性肾病防治作用，为防治 糖尿病及其并发症提供依据 二、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问 题的思路。 目的与意义：本实验的目的在于探讨木酚素对糖尿病性肾病防治作用，为防治糖尿病及其 并发症提供依据，具有重大意义。 国内外的现状： 目前,全世界约有 1.75 亿糖尿病患者，我国已达 4500 万左右，其中 2 型糖尿病占 90- 95%。而糖尿病性肾病是糖尿病最常见、最严重的微血管病发之一。表现为微量白蛋白尿、 持续蛋白尿、高血压以及肾小球滤过率下降，及时进行有效治疗，GFR 仍将进行性下降最 终进展为终末期肾脏病（ESRD）1. 糖尿病肾病严重影响患者劳动力和生活质量，占用大量 医疗资源，给社会和家庭带来沉重的疾病负担。近年来公布的许多大型临床研究资料都证 明早期用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）或血管紧张素 受体阻滞剂（ARB）干预能有效 防止和延缓肾病的发展。也和原发性肾小球疾病一样，肾组织的损害都具有进展性的特点。 目前关于慢性进展性肾病的病理生理机制最为广泛被人接受的依然是残余肾单位学说。至 今研究比较多的 DN 发病机制大致有以下几个环节：(1)组织 AGEs 蓄积，(2) 葡萄糖转运蛋 白（GluT1）活性增加，(3)血液动力学改变 (4)近年来发现某些生长因子，如胰岛素样生长 因子(IGF)- ，转化生长因子（TGF-)，血小板衍化生长因子（PDGF ）及某些细胞因子和 化学趋化因子，(5)糖尿病患者的脂代谢紊乱，(6) 氧化应激及炎症等.有研究认为机体氧化应 激和羰基应激损伤、肾素-血管紧张素系统以及血管紧张素与蛋白激酶的相互作用可能是糖 尿病肾病致病的机制之一1,2,3。在 DN 患者早期的血脂异常表现以 TG 升高为主，LDL-C 可升，HDL-C 可下降；随着病程的进展，蛋白尿期则出现 TG、总胆固醇(TC)、LDL-C 显著升 高，HDL-C 显著下降；终末期上述血脂指标改变的程度加重，还出现 VLDL-C 亦显著增高4 。 目前也有许多研究表明，木酚素不仅对于乳腺癌，前列腺癌，结肠癌等多种肿瘤具有一定 的防治作用 ，而且对于糖尿病也具有一定的防治作用。同时它被证明具有抗肿瘤生成作用、 抗氧化、抑制 DNA 和 RNA。木酚素的化学结构与雌激素十分相似，能与雌激素受体相结合， 表现为雌激素活性和抗雌激素活性，同时它具有一定的抗氧化活性，也是血小板活化因子 受体拮抗药，因而能抑制多形核白细胞氧自由基的产生，能够减轻高胆固醇血动脉粥样硬 化的作用，对血管的保护作用，改善脂质代谢，提高胰岛素敏感性，保护胰岛 细胞从而 对糖尿病有一定防治作用，因此也可以缓解糖尿病肾病5,6。有研究初步表明木酚素在预 防糖尿病发生、发展中有着重要作用，其机制还不明确，可能通过抗氧化，改善脂质代谢， 提高胰岛素敏感性等多种途径阻止和延缓糖尿病的发生发展7。 存在的问题：由于 DN 临床一旦发生，肾脏损害发展速度较快，目前尚缺乏有效治疗 手段，绝大多数患者都在较短时间内进入 ESRD。因此必须在 DN 尚处于早期即 Mogenson 分期期者，就给予针对性的防治，才有可能控制和延缓肾脏病的进一步发展。 解决问题的思路：通过复制糖尿病肾病小鼠模型，给予小鼠喂养加入一定剂量的木酚 素饲料，观察小鼠肾脏变化及其血脂代谢指标的变化情况。 三、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验 统计设计,实验方法设计，可行性分析, 预期结果，实验设计工作时间安排） 。 （一）实验设计目标，拟解决的关键问题 设计目标：观察 SD 大鼠肾脏血脂代谢指标，判断木酚素是否有改善血脂代谢作用从而减 缓 DN 的发生。 拟解决的关键问题：糖尿病肾病模型的制备；糖尿病肾病模型进行分组与实验资料的统计 分析。 （二）实验设计 1、实验动物设计 选用 SD 大鼠作为实验动物，有以下几点理由： （1 ） SD 大鼠与人的某年龄时期是对应的（SD 鼠 24 月龄相当于人的衰老早期，而且 24 月 龄以上的 SD 鼠是研究老年病学的首选动物） ，易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利 用。 （2 ） SD 大鼠具有繁殖周期短、产仔多、饲养方便，对性激素敏感，性成熟早、性周期短、 生长发育快，抗病能力强等特点，广泛用于药理、毒理、药效实验的研究。 （3 ）考虑到遗传学的因素，SD 大鼠都采用 20 代以上全同胞或亲子交配的近交系动物，这 样可以减少品系内的个体差异，可使其近交系数达到 F=98.6%。 2、实验专业设计 选用 SD 大鼠作为实验动物，给予 SD 大鼠喂养加有木酚素的饲料和没有加木酚素的饲料； 观察血糖、肾小球变化及血脂等实验指标变化。 3、实验统计设计 在科研实验统计设计中我们应始终遵循随机、对照、重复三大原则。 （1 ）随机：选正常 20 代以上近交系健康重量相近 SD 大鼠 40 只，将 40 只大鼠按体重由 小变大编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于大鼠编号后预先规定，能被 2 整除分入甲组（实验组） ，不能被 2 整除分入乙组（对照组） 。得结果如下： 动物编号：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20.40 随机数字： 06 51 62 78 22 44 47 86 49 66 11 12 09 63 90 65 51 70 79 69 60 15 05 53 71 46 84 17 74 07 33 16 72 23 37 10 52 78 58 51 所属组别：乙 甲 乙 甲 甲 甲 甲 乙 甲 乙 甲 乙 甲 以上不难看出各实验组与对照组动物数量各 20 只与动物编号更有利于我们实验的进行。以 便我们每隔一天在实验组与对照组的实验动物进行观察指标的测定。 （2 ）对照：本课题的研究我们采取了喂养加有木酚素饲料的对照。 （3 ）重复：本实验采用的是每实验小组有 20 只 SD 大鼠，具有一定的重复性。 （4 ）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较，分为实验值 和基础值比较。 （5 ）统计数据分析 本实验所得到的资料为计量资料，并且实验组与对照组为两个独立的样本，所以对实验组 与对照组的处理我们采用 t 检验来表示。两样本比较 t 检验，均以 0.05 作为显著性检 验水准。以每周实验数据为例，如下。 1）建立检验假设 H0： = （实验组与对照之间肾脏及血脂指标总体均数相同） 。 H1： 、 不等或不全相等，0.05。 2）计算统计量 X=(X1+X2+X3+Xn)/n = (Xi-X)2/(n-1) t=（x-u）/Sx 3）查 t 值表，确定 P 值，在 0.05 作为显著性检验水准，当 P0.05 时拒绝 H0 接受 H1，反之 P0.05 时接受 H0 拒绝 H1 组别 血糖 ACR GFR TG HDL-C LDL-C VLDL-C 甲 乙 4.实验设计路线 组 别 项 目 编 号 血糖 G F R 尿白蛋 白排泄 率 （VAER ） 尿白 蛋白 肌酐 比值 ACR 内生 肌酐 清除 率 T G 高密度 脂蛋白 -胆固 醇HDL- C 低密度 脂蛋白- 胆固醇 LDL-C 极低密度脂 蛋白一胆固 醇 VLDL-C 微量 白蛋 白尿 2 . 对 照 组 （ 乙） 2 0 2 1 2 2 实 验 组 （ 甲） 4 0 SD 大鼠 甲组 乙组 实验技术方法 （1）随机抽样：随机正常 20 代以上近交系健康重量相近 SD 大鼠 40 只，并分别编号，再 随机分成甲组与乙组。详细见上动物分组。 （2）实验分组：甲组为实验组，定时定量给予加有木酚素的饲料处理；乙组为对照组，定 时定量给予未加有木酚素的饲料处理。 （3）模型复制：动物先适应性喂养 l 周后进行分组饲养，饲养 1-2 个月的高热量饮食，包 括高糖、高脂、高糖高脂及高热量饲料，可诱发胰岛素抵抗，腹腔注射小剂量的链脲佐菌 素（STZ）破坏胰岛 细胞的部分功能，使胰岛分泌功能减少形成 2 型糖尿病。动物在 STZ 诱导糖尿病 4 星期后早期肾脏病变为肾小球滤过率增加，肾小球面积增大，肾脏体积 增大，髓袢腔扩张，微量白蛋白尿（20-200ug/min） 。 （4）处理措施： 1）适应性喂养 l 周后进行分组饲养，每天定时给予定量同一厂家同批号的饲料喂养。 2）观察指标测定前准备：检查各种所需要的仪器设备是否完好，检查仪器设备性能状 况。 3）观察指标测定：仪器设备调节好后，每隔一天测量实验组与对照组 SD 大鼠血糖指标， 肾脏变化及血脂分析指标。 5.预期效果: 喂加有木酚素的饲料组的大鼠血糖、肾脏及脂代谢指标较对照组低，说明木酚素能缓解 DN 的临床症状。 6.实验设计工作时间安排: 1、第一天，准备实验器械，药品，动物，适应性喂养一周后将动物随机分成 2 组，编号。 2、分别用两个大笼子饲养，每天喂饲料 2 小时后测血糖值，肾脏变化及血脂指标，完成实 验动物模型制备。 3、模型复制好后，进行实验处理喂养，每天观察实验指标。 四、可行性分析: 1、SD 大鼠来源方便，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。 2、实验设备简单，可直接在实验室进行。 3、实验所需药少，资金花费少，存活率高。 五、完成实验条件： 对照组 实验组 测量血糖血脂 定时定量给予加油木酚 素的饲料 定时定量给予正