肝功能中各检测项目的测定方法

肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义 1、血清总胆汁酸 TBA： （1）测定方法：A、酶循环法，B、3a-HDS 法（3-a 羟类固醇脱氧酶） （2）测定原理 方法 A：胆汁酸被 3 羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及口-硫代烟酰胺嘌 呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成 3 酮类固醇及硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸 还原型。此外，生成的 3 酮类固醇在 3 羟基类固醇脱氢酶及 硫代烟酰胺嘌 呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及 烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。以上 依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的 -硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型 的吸光度，计算血清中胆汁酸的量。 方法 B：在 3-a 羟类固醇脱氧酶作用下，各种胆汁酸 C3 上 位的羟基脱 氧形成羰基，同时氧化型 NAD 还原成 NADH 随后 NADH 上的氢由黄递酶催化转移 给硝基四氮唑蓝（NTB）产生甲替,用磷酸中止反应,甲替的产量与总胆汁酸成正 比，在波长 540nm 比色,与同样处理的标准品比较，计算其含量。 （3）临床意义 1.测定血清中胆汁酸可提供肝胆系统是否正常，肝、胆疾病时周围血循环中的 胆汁酸水平明显升高。急性肝炎早期和肝外阻塞性黄疸时可增至正常值的 100 倍以上。对肝胆系统疾病的诊断具有特异性。 2可敏感地反映肝胆系统疾病的病变过程。肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高 与其他肝功能试验及肝组织学变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清 胆汁酸的升高，常比其他检查更为灵敏。据报道，急性肝炎、肝硬化、原发性 肝癌、急性肝内胆汁郁滞、原发性胆汁性肝硬化以及肝外阻塞性黄疸，其血清 胆汁酸均 100 出现异常。上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。 2、丙氨酸氨基转移酶 ALT （1）测定方法：酶偶联法，赖氏法，连续监测法 （2）测定原理：L-丙氨酸 + -酮戊二酸-ALT-L-丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 +NADH+H+-LD-L-乳酸+NAD+ （3）临床意义： 谷丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV 携带者、重 型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT 的升高只表 示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起谷丙转氨酶转氨酶 升高。 在急性肝炎及慢性肝炎与肝硬化活动，肝细胞膜的通透性改变，谷丙转 氨酶就从细胞内溢出到循环血液中去，这样抽血检查结果就偏高，转氨酶反映 肝细胞损害程度。但谷丙转氨酶缺乏特异性，有多种原因能造成肝细胞膜通透 性的改变，如：疲劳、饮酒、感冒甚至情绪因素等等。上述原因造成的转氨酶 增高一般不会高于 60 个单位，转氨酶值高于 80 个单位就有诊断价值，需到医 院就诊。另外需要注意，谷丙转氨酶活性变化与肝脏病理组织改变缺乏一致性， 有的严重肝损患者谷丙转氨酶并不升高。因此肝功能损害需要综合其他情况来 判断。 3、天门冬氨酸氨基转移酶(AST) (1)测定方法：酶偶联法 (2)测定原理： （3）临床意义：天冬氨酸氨基转移酶在心肌细胞中含量最高，但肝脏损害时也 可使其血清浓度升高，临床常作为心肌梗死和心肌炎的辅助检查。天冬氨酸氨 基转移酶(AST)的正常值为 040U/L，当丙氨酸氨基转移酶(ALT)明显升高， (ALT/AST)比值大于 l 时，就表示肝脏发生了实质性损害。 四、碱性磷酸酶 ALP （1）测定方法：连续监测法 （2）测定原理：在 pH=10 的环境中，ALP 催化磷酸二苯钠的水解，生成苯酚 AST L-门冬氨酸 + -酮戊二酸 草酰乙酸 + L-谷氨酸 NAD + 苹果酸-L H +NADH + 草酰乙酸 MD 和磷酸氢二钠，苯酚与 4-氨基安替比林反应生成色素原，该色素原经铁氰化钾 氧化生成红色醌亚胺衍生物。测定红色物质的吸光度就可以计算酶活力的大小。 （3）临床意义：临床上测定 ALP 主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊 断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高 ALP 血清水平，可测定同工酶 以协助明确其器官来源。 1.生理性增高。儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高 12 倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升 高。 2.病理性升高（1）骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移 等；（2）肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等； （3）其他疾病如甲状旁腺机能亢进。3.病理性降低见于重症慢性肾炎、儿童甲 状腺机能不全、贫血等。 5、乳酸脱氢酶 LDH （1）测定方法：连续监测法、比色法、荧光法。 （2）测定原理：乳酸脱氢酶(LDH)在辅酶 I 的递氢作用下，使乳酸脱氢而生成 丙酮酸。氧化型辅酶 I（NAD+）还原成还原型的辅酶 I（NADH），引起 340nm 处吸光度的改变，其吸光度的增加速率与标本中 LDH 浓度成正比。 （3）临床意义： 1、用于 AMI 和亚急性 MI 的辅助诊断：AMI 后 818 小时开始升高，peaktim 为 2472 小时，持续时间 610 天。AMI 时 LD 的升高倍数多为 56 倍，个别 可高达 10 倍。 2、由于 LD 特异性低，通常可用于观察是否存在组织、器官损伤。如 LD 持续正 常，可除外组织、器官损伤；如 LD 总酶活性升高，可能有组织、器官损伤，常 用于广泛性癌症化疗时的监测医学教育网搜集整理。 3、各种疾病的急性时相、血液病（巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血）、 心肺疾患（AMI、肺梗塞）、肝胆疾患（肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸、心力衰竭 和心包炎时肝淤血）、恶性肿瘤、肾疾患、脑血管病变、肌病、休克等 LD 及其 病变部位相应优势的同工酶含量均可增高。 6、谷氨酰转肽酶 GT （1)测定方法：速率法 （2)测定原理：-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺+甘氨酰甘氨酸-谷氨酰甘 氨酰甘氨酸+5-氨基-2-硝基苯甲酸。生成的 5-氨基-2-硝基苯甲酸在 410nm 波 长处有吸收峰，其形成的速率与血清中 -GT 活性成正比，故通过测定吸光度 增加的速率即可测出 -GT 的活性 （3)临床意义：(1)原发性或转移性肝癌时，血中 GGT 明显升高。其原因是癌 细胞产生的 GGT 增多和癌组织本身或其周围的炎症刺激作用，使肝细胞膜的 通透性增加，以致血中 GGT 增高(2)阻塞性黄疸、急性肝炎、慢性肝炎活动期、 胆道感染、肝硬化等都可使 GGT 升高。(3)其他疾病如心肌梗塞、急性胰腺炎 及某些药物等均可使血中 GGT 升高。谷氦酰转肽酶（y-GT），正常值为 50 单 位。急性乙肝时可升高，但持续 1 个月左右就会下降；如果长期升高不降，可 能会向慢性肝炎转化。慢性乙肝有时可达 200 单位或更高，且不容易消失，目 前还缺少特效使其下降其他如酒精性肝病、脂肪肝、胆石病、肝内胆管结石等 也可以升高；黄疸长期不消退（胆汁淤积）时也会升高。要注意的是，若发生 肝癌时，y-GT 的上升值可达正常值的 1 0 倍以上，对其升高者一定要结合临床 其他资料加以综合分析。 7、胆碱酯酶 CHE （1)测定方法：纸片法 （2)测定原理：丁酰硫代胆碱被 ChE 水解，生成硫代胆碱和丁酸；所释放的硫 代胆碱与二硫代硝基苯甲酸反应生成黄色的硝基苯甲酸衍生物，在 405nm 波长 下检测吸光度变化的速率就可以检测 ChE 的活性。 （3)临床意义：急性病毒性乙肝：乙肝患者血清胆碱酯酶降低与病情严重程度 有关，与黄疸程度不一定平行，若持续降低，常提示预后不良。 慢性乙肝：慢 性迁延型乙肝患者此酶活力变化不大，慢性活动性乙肝患者此酶活力与急性乙 肝患者相似。 肝硬化：若处于代偿期，血清胆碱酯酶多为正常，若处于失代偿 期，则此酶活力明显下降。 亚急性重型乙肝：亚急性重型乙肝患者特别是肝昏 迷患者，血清胆碱酯酶明显降低，且多呈持久性降低。 肝外胆道梗阻性黄疸： 患者血清胆碱酯酶正常，若伴有胆汁性肝硬化则此 酶活力下降。 急慢性肝炎、 肝硬化、肝功能不全时胆碱酯酶明显降低，慢性胆道疾患， 肝癌合并肝硬化时 胆碱酯酶降低。 有机磷中毒、营养不良、感染及贫血也可使胆碱酯酶降低。脂 肪肝、肾脏病变、肥胖则出现血清胆碱酯酶增高。 8、腺苷脱氨酶 ADA （1）测定方法：Kaplan 法 奈氏显色法、Kalckar 氏法 PNP 法 （2）测定原理：ADA 催化腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷，再经嘌呤核 苷磷酸化酶（PNP）作用生成次黄嘌呤，次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶（XOD） 作用转变为尿酸和过氧化氢（H2O2）。H2O2 在过氧化物酶（POD）存在的 情况下，可与 N-乙醛-N-（2-羟基-3-硫丙基）-3-甲基苯胺（EHSPT）和氨基安 替比林（4-AA）生成醌染料，醌染料生成速率与 ADA 含量相关。 （3）临床意义：1、急性肝炎时 ADA 仅轻中度增高；在慢性活动性肝炎和肝硬 变时，ADA 活性的阳性率可达 90%左右，增高程度也较明显；重症肝炎时，ALT 不高，但 ADA 常明显升高；在阻塞性黄疸时， ADA 活性升高很少。2、测定胸 腹水及脑脊液标本中的 ADA 活性，有鉴别诊断价值。结核性胸腹水中 ADA 活力 显著高于癌症及炎症胸腹水中 ADA 活力，对早期诊断结核性胸、腹膜炎有较高 的敏感性和一定的特异性。3、脑脊液 ADA 检测可作为中枢神经系统疾病诊断和 鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎 ADA 活性升高，病毒性脑膜炎不升高。 9、总胆红素 TBil （1）测定方法：重氮盐法 （2）测定原理：血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，所 以称为直胆，因此重氮法又称 1min 胆红素测定法，非结合胆红素测定时要以咖 啡因-苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应，抗坏血酸破坏剩余 重氮试剂，加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由 530nm 转到 598nm，非胆红素的 黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计，使灵敏度和特 异性升高，最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺 酸之间形成的黄色色素混合而成 （3）临床意义：增高见于（1）肝脏疾患：急性黄疸型肝炎、急性黄色肝坏死、 慢性活动性肝炎、肝硬化等。总胆红素测定试剂盒（2）肝外的疾病：溶血型黄 疸、血型不合的输血反应、新生儿黄疸、胆石症、肝癌、胰头癌等。 降低见于：总胆红素偏低的原因5有可能是因为缺铁性贫血，缺铁性贫血是由 于体内缺少铁质而影响血红蛋白合成所引起的贫血。缺铁性贫血的症状就是面 色微黄或苍白，但是否缺铁性贫血还要做进一步检查，红细胞形态、血清铁、 血清铁蛋白检查。厌食的人如果缺锌，也会引起总胆红素偏低。 10、直接胆红素 DBIL （1）测定方法:重氮盐法 （2）测定原理：胆红素呈黄色，在 450nm 附近有最大吸收峰。胆红素氧化酶 (BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm 下降，下降程度与胆红素 被氧化的量相关。在 pH8.0 条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因 而检测 450nm 吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入 SDS 及胆酸钠等阴离 子表面活性剂可促进其氧化。 在 pH3.74.5 缓冲液中，BOD 催化单葡萄糖醛 酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分 胆红素氧化，非结合胆 红素(Bu)在此 pH 条件下不被氧化。用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素 (ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下 450nm 吸光度的下降值可反 映结合胆红素的含量 （3）临床意义：血清直接胆红素超过 4.5mg/L 有临床意义。正常血清中结合 胆红素仅占总胆红素的 4%-5%，其浓度一般40%，而胆汁瘀积性黄疸时常在 60%以上，最高的可达 90%，有一定鉴别诊断价值。 11、血浆总蛋白 TP （1）测定方法：化学法、物理法、染料结合法。 （2）测定原理：利用蛋白质中相对恒定的含氮量（16%），芳香族氨基酸上苯 环共轭双键具有吸收紫外光的性质，酸性下与某些带负电荷染料特异结合 （3）临床意义：(1)血浆总蛋白生理性波动：直立体位由于体液分布原因，血 液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位稀。因而久卧床者血清总蛋白比直 立活动时约低 3-5g/L。新生儿血清总蛋白可比成人低 5-8g/L。60 岁以上的老 人约比成人低 2g/L。(2)血浆总蛋白增高：血液浓缩导致总蛋白浓度相对增 高：严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时， 由于毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管，血液发生浓缩。慢性肾上腺 皮质功能减退的患者，丢失钠的同时伴随水的丢失，血浆也可以出现浓缩现象。 血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，如多发性骨髓瘤患者。(3) 血浆总蛋白降低：血液稀释导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗 溶液获各种原因引起的钠、水潴留。 摄入不足和消耗增加：食物中长期缺 乏蛋白质或慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，均可造成血清蛋白浓度降低。 蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾病综合症大量蛋白尿 等，均可使血清总蛋白浓度降低。 12、白蛋白 ALB （1）测定方法：盐析法，免疫法，染料结合法 （2）测定原理：清蛋白在 pH4.2 的缓冲液中带正电荷，可与带负电荷的染料 （BCG）结合形成蓝绿色复合物，630 nm 波长处有吸收峰。 （3）临床意义：增高：主要由于血液浓缩而致相对性增高减低：见于肝硬变合 并腹水及其他