艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国cdc性病艾滋病预防控制课件

艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国CDC性病艾滋病预防控制中心 二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会 2004年5月 中国南京 目的方法 监测感染检测抗体检测(EIA/PA/RT) 检测策略 窗口期检测抗原检测，核酸检测 pooling RT-PCR 诊断感染诊断WB 检测策略 近期感染诊断STARSH方法 治疗评价CD4/CD8测定流氏仪检测 显微镜法 病毒载量测定NASBA, b-DNA，RT-PCR 耐药性检测基因型，表型 窗口期检测 抗原检测 核酸检测 Pooling RT-PCR方法 窗口期的范围 定义依据时间长度 抗体检测3-6个月 新的EIA试剂可以缩短至14-21天 抗原检测1-2周 第四代抗原抗体检测试剂可以 使窗口期比第三代抗体试剂缩 短4-5天 核酸检测5-11天 抗原检测 P24试剂盒，第四代EIA试剂（1997年在欧洲正式批 准用于血液筛查） 每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg 每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝，如果病毒载量测 定结果为400拷贝/ml，即等于有2.4X105个分子 =0.0096pg p24抗原/ml，800拷贝/ml，即等于有 4.8X105个分子=0.019pg p24抗原/ml 目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml 抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到 样本（血清/浆）中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒 子中的抗原 EIA测定的抗原浓度(F)：病毒RNA拷贝数推算的抗原浓 度(A)=0.16：2900 样本号EIA(Cutoff) EIA(pg/ml) RNA拷贝/mlp24pg/ml F/A 13.1 0.1 1,4000.033.1 24.7 0.16 37000.091.8 345 1.5 11000.0356 4320 11 800001.95.6 568 2.3 400000.962.4 622 0.73 1900004.50.16 样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测 病毒RNA检测 第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天 病毒RNA检测方法：NASBA,RT-PCR,b-DNA 在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后 抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露 史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检 测进行辅助诊断。 早期诊断应用： 个体检测、血液筛查、性病 门诊病人筛查、PMTCT Pooling RT-PCR 由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作 为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行 核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预 值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）。可 能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原 检测更具成本效益。 1473份样本处理过程 新近感染检测 抗体检测EIA,PA,RTWB试验 阴性抗原检测/核酸检测 阳性STARSH新近感染 STARHS法 1998年开始，美国Janssen RS等专家推出一种新 的实验室方法用于新感染病例的监测，即敏感的酶联免 疫检测法（3A11）和非敏感的酶联免疫检测法（3A11 LS）: 原理：利用感染早期抗体滴度低的特征，以敏感 ELISA试剂（3A11）和非敏感ELISA试剂（3A11-LS） 对经过一定程度稀释的同一样品进行测定，3A11检测呈 阳性而3A11LS检测呈阴性反应者为新发感染，与以往 感染的病例区分开来，可以确切地估测新感染人数。近 几年，该方法已在一些国家得到了应用，为这些国家制 定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。 检测新发或新近HIV感染的目的 l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。 l由单一的患病样本来估计人群发病率。 l以新发感染的个体为研究或干预对象。 l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀 l评估预防措施和目标 l监测亚型和药物抵抗株的传播 l找出适合疫苗实验的高危人群 TARHS：新发HIV血清转换的 血清检测运算法则 暴露 HIV+ AIDS (1)敏感性试验 + + (2)STARHS试验 _ + 在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染 （1） 敏感性试验（EIA） 血清转换早期即可出现阳性 （2） 非敏感性试验（改调的EIA：STARHS ） 血清转换晚期才可出现阳性 新发感染血清转换=EIA+& STARHS- STARHS试验的窗口期 暴露 EIA+ Detuned EIA+ AIDS 窗口期=从EIA+到detuned的EIA+之间的时间 在血清转换者有所不同，依赖于HIV的亚型和试验 Organo Tekniaka, 对亚型B，估计值为： 90% 3.3个月 75 4.0 50 5.1 25 6.4 10 8.2 STARHS的应用条件 非AIDS病人AIDS病人有很低的抗 体水平，象血清阳转 非HAART治疗HAART治疗病人有 很低的抗体水平，象血清阳转 抗体检测策略 监测：初筛-复合-确认策略 EIA-EIA替代策略 诊断：初筛-复合-确认策略 EIA-EIA-PA/RT替代策略 （VCT） WHO和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法，在HIV流行率不同的地区 针对不同的目的而进行的HIV诊断方法 目的 流行率 策略 血液筛查 任何情况下 1 监测 10% 1 10% 2 诊断 征兆/症状 30% 1 30% 2 诊断 症状 10% 2 10% 3 策略1：用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。 策略2：用两种筛选试剂。如果第一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重 复，两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。 策略3：用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是HIV 阳性。 诊断替代策略 1、HIV感染高流行地区的高危人群 2、EIA-1+EI