肝炎病毒的常见检测手段［ppt课件］

肝炎病毒的常见检测手段 刘颖 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus ）是指引起人类 急、慢性肝炎的DNA病毒,也称丹氏颗粒，简称HBV 。 我国的乙肝病毒感染率约60%-70%；乙肝表面抗原 携带率约占总人口的7.18%，以此计算，全国约有 9300万人携带乙肝病毒，其中乙肝患者大约有3000 万 乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA 病毒科 (hepadnaviridae)，基因组长约3.2kb ，为部分双链环 状DNA。HBV 的抵抗力较强，但6510 小时 、煮 沸10 分钟 或高压蒸气均可灭活HBV。含氯制剂、 环氧乙烷、戊二醛、过氧乙酸和碘伏等也有较好的 灭活效果 肝炎病毒的分类 肝炎病毒是医学术语，指引起病毒性肝炎的病 原体。人类肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁 型和戊型和庚型病毒之分。甲型肝炎病毒呈球 形，无包膜，核酸为单链RNA。乙型肝炎病毒 呈球形，具有双层外壳结构，外层相当一般病 毒的包膜，核酸为双链DNA。除乙型肝炎病毒 遗传物质为双链DNA外，其他类型病毒均为单 链RNA。除了甲型和戊型病毒为通过肠道感染 外，其他类型病毒均通过密切接触、血液和注 射方式传播。 乙肝病毒基因 目前，已可从感染HBV病人的血清中及感染肝脏提纯的病毒核 心中分离出环状双股DNA，从而确定HBV属DNA病毒。目前，由 于克隆化DNA完整核苷酸已经确定，现已证实HBsAg和HBcAg都 是由Dana颗粒的DNA所编码，并且二类基因存在同一DNA分子 上。有人比较病毒基因编码能力和病毒多少，发现HBV DNA负 链能编码全部已知的HBV蛋白质，而其正链开放读码区，不能 编码病毒蛋白。HBVDNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P 及X，能编码全部已知的HBV蛋白质。S区可分为二部分，S基因 和前S基因。S基因能编码主要表面蛋白。S基因之前是一个能编 码163个氨基酸的前S基因，编码Pre S1和Pre S2蛋白。C区基因 包括前C基因和C基因，分别编码HBeAg和HBcAg。P区最长，约 占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。X区可能编码有 154个氨基酸的碱性多肽。 乙肝的抗原 HBV的抗原有3种：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（ HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染 者血液中，是HBV感染以及检测的主要标志。它具有抗 原性，可诱导机体产生特异保护性的抗-HBs，也是制备 疫苗的最主要成分。 核心抗原由183个或185个氨基酸组成，高度磷酸化，是 乙肝病毒核心颗粒的唯一结构蛋白。正由于它存在于 Dane颗粒核心结构表面，被表面抗原覆盖，故不易在血 循环中检出。核心抗原具有强免疫原性，可诱导很强的 体液免疫和细胞免疫，刺激机体产生抗-HBc。 e抗原为可溶性蛋白质，传染性强，游离存在于血液中 ，虽然很早就被发现，在病理上认为是HBV复制以具有 强感染性的一个指标，但其功能尚不清楚。抗-HBe的出 现，是预后良好的征象。 基于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧 光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附 法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方 法。这些方法各有优缺点，所使用的仪器 设备、试剂品质源于不同的国家和地区， 设立的标准曲线以及标准荧光等各不相同 ，得出的数值左右漂浮，偏差很大，得出 的检测值范围也不相同。 HBV-DNA检测则是采用聚合酶链式反应（ PCR）技术，特异性扩增乙肝病毒基因组保 守的C基因区上270bp基因片段，以近于2n 的指数（n为循环次数），在数小时内可将 极微量的HBV-DNA特定的分子片断扩增至 1x1071x108倍，大大提高了HBV的检出率 ，为临床诊断是否为HBV感染提供了一种强 有力的手段。 ELSA ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手 段，反映机体HBV感染的免疫状态。 化学发光是基于ELISA基础上通过改变检测 系统建立的新方法。 乙肝五项指标临床监测意义 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗HBe 抗-HBc 1、- - - - - 过去和现在均未感染HBV 2、- - - - + 曾感染HBV，急性感染恢复期 3、- - - + + 过去和现在均已感染过HBV 4、- + - - - 预防注射疫苗 5、- + - + + 既往感染；急性HBV感染恢复期 6、- + - - + 既往感染；急性HBV感染已恢复 7、+ - - - + 急性HBV感染；慢性HBsAg携带者 8、+ - - + + 急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg 携带者，传染性 弱；长期持续易癌变 9、 + - + - + 急性或慢性乙肝，传染性极强 10、+ - - - - 急性HBV感染早期，HBsAg携带者 11、+ - + - - 急性HBV感染早期，传染性强 12、 - - + + + 急性感染中期 13、+ - + + + 急性感染趋向恢复；慢性携带者 14、+ - - + - 急性感染趋向恢复 15、- - - + - 急性感染趋向恢复 16、- + - + - HBV感染