（有机化学专业论文）注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究.pdf

中文摘要本项目选取无公害蛋黄粉为原料，系统开展了注射用蛋黄卵磷脂的提取、精制分离、干燥的工艺研究及中试放大，并运用正交法优化了超临界c 0 2 萃取的工艺参数。采用h p l c 、g c 和理化分析等手段研究了精制工艺对卵磷腊组成及乳化性能的影响。通过多批中试放大试验，对放大过程的质量控制因素进行了研究，获得可供注射用的蛋黄卵磷脂的成熟中试工艺条件。建立了蛋黄卵磷脂的乳化性能评价体系及磷脂杂质的快速扫描方法，制定了与进口卵磷脂相对等的质量标准。通过动物急性毒性试验，客观评价了制各的蛋黄卵磷脂的安全性。通过稳定性考察试验，系统研究了制备的蛋黄卵磷脂及其静脉脂肪乳的稳定性。目前已完成仿制药用辅料的申请受理，正在进行技术审评。以上工作为注射用蛋黄卵磷脂的产业化奠定了良好的工作基础。关键词：蛋黄卵磷脂、蛋黄粉、超临界c 0 2 萃取、精制、冷冻干燥、中试放大a b s t r a c tt h ep r o c e s sd e v e l o p m e n ta n ds c a l e - u pf o re x t r a c t i o n ，p u r i f i c a t i o na n dd r y i n go fe g gl e c i t h i nf o ri n j e c t i o n ，u s i n gu n p o l l u t e de g gp o w d e ra sr a wm a t e r i a l w e r ed e v e l o p e d t h eo p t i m a lc o n d i t i o n sf o rs u p e r c r i t i c a lc o ，e x t r a c t i o nw e r eo b t a i n e dt h r o u g ht h eo h o g o n a id e s i g nm e t h o d a n dc h e m i c a lc o n s t i t u e n t sa n de m u l s i f i c a t i o no fl e c i t i l i nc a p a b i l i t yw e r ec o m p a r e db yh p l c g ca n dc h e m i c a la n a l y s i s t h r o u g hp i l o ts c a l e - u pe x p e r i m e n t s ，t h ec o n t r o l l i n gf a c t o r so nl e c i m i nq u a l i t yw e r es t u d i e da n dt h eo p t i m a lp r o c e s so fe g gl e c i m i nf o ri n j e c t i o nw e r eo b t a i n e di nt h ep i l o t s c a l e m e a n w h i l e w ee s t a b l i s h e dt h ee v a l u a t i o ns y s t e mf o re m u l s i f i c a t i o nc a p a b i l i t yo fl e c i t h i n ，d e t e c t i o nm e t h o do fi m p u r i t ya n dq u a l i t ys p e c i f i c a t i o ni na c c o r d a n c ew i t hg e r m a n ys t a n d a r dt h es a f e t ya n ds t a b i l i t yo ft h er e s u l t a n tl e c i 恤i na n dw e r ee v a l u a t e db yt h ea c u t et o x i c i t ye x p e r i m e n t sa n ds t a b i l i t y - a p p r a i s a le x p e r i m e n t s ，u pt on o w , t h ea p p l i c a t i o nf o rp h a r m a c e u t i c a la c c e s s o r i e sw a sa c c e p t e db ys f d a a i lt h o s em e n t i o n e da b o v eh a v el a i da ni m p o r t a n tf o u n d a t i o nf o ri n d u s t r i a l i z a t i o no fe g gl e c i m i nf o ri n j e c t i o nk e yw o r d s ：e g gl e c i t h i n ，s u p e r c r i t i c a lc o ：e x t r a c t i o n ，e g gp o w d e r ,p u r i f i c a t i o n ，f r e e z i n gd r y , p i l o ts c a l e - u p广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷腥塑三苎堑窒墨主些些：一、立项依据1 、项目研究的目的和意义药物制剂辅料的开发对药物制剂质量、疗效等方面具有十分重要的作用，是药物新剂型、新制剂开发的有力保证。新型药用辅料的研究开发和产业化在国内一直是一个薄弱的环节，导致我国新型制剂的研究开发滞后于国际先进水平，因此研究开发新型辅料对发展我国医药工业具有重要现实意义。卵磷脂是一类具有重要生理活性和表面活性的生命物质，在生物细胞膜的功能和代谢方面具有十分重要的调节作用。由于蛋黄卵磷脂分子中既有亲水性基团，又有亲油性的基团，是性能稳定、安全的天然乳化剂。供注射用的精制卵磷脂是制各和生产静脉脂肪乳、注射脂质体等药物制剂的关键辅料( 乳化剂) ，也是磷脂中最具高附加值的产品形态。大量的临床实践证明，动物来源的卵磷脂( 如蛋黄卵磷脂) 在生物亲和性和安全性等方面明显优于植物来源的卵磷脂( 如大豆卵磷脂) 。在物理化学性质上，由于蛋黄卵磷脂极易被氧化，活性在2 56 c 时最强，超过5 0 c 后活性基本丧失，静脉注射用要求较高( 不仅纯度高，而且要求要求乳化能力强，并达到静脉注射用的相关要求) ，其提取工艺和技术比较复杂、难度较大，目前世界上只有仅德国、韩国、日本等少数国家拥有既保持活性又有较高纯度的提取工艺和技术，并实现了产业化生产。国内静脉脂肪乳的生产以及脂质体的研究开发的蛋黄卵磷脂辅料几乎全部依靠迸1 2 i 。目前，我国药用级精制卵磷脂的年需求量为2 0 0 吨，目前全部依靠进口，每年消耗外汇近6 亿元。其中德国l i p o i d 公司是生产时间最长、产量最大的国外生产商。其精制卵磷脂产品已经在我国注册，进口药品注册标准号为：j x 2 0 0 1 0 2 4 9 。尽管国内少数企业和研究机构曾先后投入人力和物力，开展了注射用卵磷脂辅料的研究和开发，个别企业 如四川英格尔等) 甚至已获得精制广药集团与中山太拳博士后出站报告“注射用蛋黄9 1 堡脂的工艺避星亡些坐”蛋黄卵磷脂的药用辅料批文和生产许可，但一直未能生产出合格的产品。国内仍然全部依赖从德国、韩国、瑞典、日本等国家进口，进口价格每公斤2 5 0 0 3 0 0 0 元人民币。据粗略估计，日前我国静脉脂肪乳的市场年需求量为2 0 0 0 万瓶，年增长幅度为1 0 左右，“中长链脂肪乳”、“康莱特抗癌注射液”、“榄香烯抗癌注射液”等中药脂肪乳新品种的开发成功，也带动注射用蛋黄卵磷脂的需求量的相应增长。同时加上注射青霉素用的卵磷脂需求和注射用脂质体，需要注射用蛋黄卵磷脂近2 0 0 吨，需要花费近6亿元人民币购买进口卵磷脂产品。本项目依托广药集团建设的”中药提取分离过程现代化国家工程研究中心”的技术平台，采用拥有的超临界c 0 2 萃取技术、薄膜浓缩和冷冻干燥等关键技术，从蛋黄粉中提取分离可供药用蛋黄卵磷脂特别是注射用的蛋黄卵磷脂，实现以提取分离关键技术的突破带动药用辅料的产业化和国产化。本项目在注射用蛋黄卵磷脂的生产工艺、质量分析和控制以及装备等方面形成自主知识产权，实现提取分离高新技术的产业化，满足国内静脉脂肪乳、注射脂质体生产的蛋黄卵磷脂的需求以及替代进口蛋黄卵磷脂产品，将产生显著的经济效益和社会效益。2 、国外相关产品与技术的发展概况卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列为生命的“第三营养素”。早在1 8 4 4 年法国学者g o b l e g 就从蛋黄中分离和发现卵磷脂，并以希腊文命名为l e c i t h o s ，后演变为英文的l e c i t h i n 。磷脂的系统研究始于2 0 世纪3 0 年代的德国，随着对磷脂研究和应用的深入开展，对其结构、性能、功效和生理、生化作用的认识在逐步深化，发现和证实了卵磷脂具有很高的药用及营养价值。但是，由于其提取技术难度大及昂贵的成本，很长时间都未能得到推广。直到2 0 世纪7 0 年代，只有少数发达国家才逐步解决技术问题，并主要采用传统的溶剂萃取方法进行注射用蛋黄卵磷脂生产。其中德题，并主要采用传统的溶剂萃取方法进行注射用蛋黄卵磷脂生产。其中德广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷熙的工苎堡窒墨苎些些：国l i p o i d 公司于2 0 世纪7 0 年代开始生产并提供注射用蛋黄卵磷脂辅料，韩国d 0 0 s a l l 公司也于以2 0 世纪9 0 年代开始生产并销售注射用蛋黄卵磷脂辅料。商业术语j 旨( l e c i t h i n ) 通常指主要由磷脂酰胆碱( p h o s p h o c h o l i n e ，p c ) 、磷脂酰乙醇胺( p h o s p h o e n t l a a n o i ，p s ) 、神经鞘磷脂( s m ) 、肌醇磷脂、丝磷脂和磷脂酸等组成的脂质成分和表面活性成分的混合物，显现明显的生理活性和表面活性，因而具有较高的药用价值和营养价值，目前已广泛用于医药、食品、化工、轻工等领域。除少量人工合成外，卵磷脂主要来源于从天然植物或动物蛋粉中提取得到，如从大豆提取的大豆磷脂或从蛋黄中提取得到的蛋黄磷脂。植物来源的卵磷脂与动物来源的磷脂( 如蛋黄卵磷脂) 的主要区别在于前者较后者含有较高的不饱和脂肪酸和较低的总磷脂和总胆固醇。国内外已经开展的体外以及临床应用研究均证明，磷脂能够溶解人体血液中的胆固醇和甘油三酯，保持血管畅通，有效预防高血压、高血脂和多种心脑血管病，又能通过血脑屏障直接进入脑内参与神经递质乙酰胆碱的合成，起健脑增智的作用。同时，由于卵磷脂分子中既有亲水性基团，又有亲油性的基团，是性能稳定、安全的天然乳化剂，尤其适用于静脉脂肪乳的生产中。静脉脂肪乳是一种浓缩的高能量肠外营养液，是以植物油为主要成分，加入适量乳化剂和注射用水制成的水包油型乳剂。自1 9 6 1 年w r e f l i n d首次研究开发了以大豆油为基础、蛋黄磷脂为乳化剂、甘油为等渗剂的脂肪乳剂i n t r a l i p i d 以来，脂肪乳剂的静脉应用被认为是肠外营养发展的重要里程碑。目前该制剂在临床使用已经超过4 0 年，被公认为一种较理想的提供能量和必需脂肪酸的静脉营养制剂，在危重病人、烧伤等救治发挥了不可替代的作用。制备静脉脂肪乳的关键是选用高纯度原料，毒性低、乳化性能强的乳化剂，制得油滴大小适当、粒度均一、质量稳定的脂肪乳剂。广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂蝗垡鲤窒墨主! ! 型较常用的是1 0 和2 0 的脂肪乳剂，新研制的3 0 脂肪乳刘也开始在临床使用。静脉注射用的乳化剂常用的有蛋黄卵磷脂、大豆磷脂以及合成乳化剂一普郎尼克6 8 ( p l u r o n i c 6 8 ) 等，而有以天然卵磷脂为最安全。同时，由于蛋黄卵磷脂是动物胚胎磷脂，更接近于人体需求，生物利用度高，无毒物副反应，实际生产过程和临床应用也证明，蛋黄磷脂优于大豆卵磷脂等其它乳化剂。脂质体( l i p o s o m e ) ：是将药物包封于脂质双分子层内部的超微球状载体制剂。自从1 9 6 5 年英国b a l l 曲a m 发现脂质体的存在，1 9 7 1 年r y m e n 等人将脂质体作为药物载体以来，对脂质体的研究已经日渐深入，并由生命科学和膜科学领域逐渐向临床应用发展。近2 0 年来脂质体在给药系统( d d s )方面有了长足的发展，已将脂质体用作抗癌药物、酶制剂及抗生素药物的载体，特别是用作抗癌药物裁体。1 9 9 0 年世界第一个静脉脂质体一两性霉素b 正式批准后，目前国外已有3 个抗真菌药物和2 个抗癌药物的脂质体得到批准，目前已经上市和正在开发的脂质体还有阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、长春新碱、博莱霉素、庆大霉素、环孢菌素等i i i i i 。国内在7 0年代末沈阳药科大学、中国药科大学等科研院所先后开展脂质体之际的研究，目前已有油酸多相脂质体、紫杉醇脂质体等药物制剂上市。尽管各种脂质和脂质混合物均可以成) i i i i 备脂质体的材料，但由于化合物的纯度、价格、毒性等问题，目前最常用的膜材主要为磷脂，具体包括蛋黄卵磷脂、脑磷脂、豆磷脂以及合成磷脂。虽然合成磷脂不易氧化、组成固定，更适合于制备脂质体，但其价格较高，从生产应用考虑，还是选用价格低廉、易得的卵磷脂或豆磷脂较为合适。由于相当部分脂质体是以静脉注射、肌肉注射等形式，在安全性方面蛋黄卵磷脂优于大豆磷脂。目前，仅德国l i p o i d 、韩国d o o s a n 等国外少数公司掌握t i i 质体辅料的生产技术，国内开展脂质体的研究以及生产的卵磷脂辅料几乎全部依靠进广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及产i ! 鲨l j 。据国外专利文献报道，精制卵磷脂制备方法主要是先用大量的丙酮反复搅拌蛋黄粉多次( 5 6 次) ，充分脱色、脱脂后，再用大量的乙醇搅拌提取多次( 4 5 次) ，提取液浓缩后，通过丙酮反复洗涤或氧化铝吸附一洗脱后，富集卵磷脂成分或除去某些杂质成分，普遍存在有机溶剂耗用大、生产条件苛刻以及吸附洗脱时间长、单位时间料液处理量有限，卵磷脂成品收率低且有较高的有机溶剂残留等缺点。3 、国内耜关产l j 矗与技术现状及已取得的技术水平注射用蛋黄卵磷脂和脂质体的生产过程主要包括提取一分离一浓缩一干燥等四个关键环节。在提取工艺上，传统溶剂法主要采用的萃取溶剂有烷烃类、丙酮、二甲醚、c 1 c 3 脂肪醇或c 1 c 3 脂肪醇与烷烃的二元体系，普遍存在有机溶媒耗用量大、工艺时问长等缺点。上海医药2 0 0 1 年第1 期公开发表的”静脉用磷脂的制备”采用以丙酮脱油一乙醇提取一丙酮洗涤一真空干燥的工艺路线，经过反复精制得到注射用的卵磷脂，除了存在有机溶媒耗用量大、工艺时间长等缺点外，卵磷脂的最后收率也偏低( 5 8 5) 。在1 9 9 9 年1 1 月中国中医药学会建会2 0 周年学术年会的会议论文集刊登的“精制卵磷脂的制备及质量控制”一文中，以新鲜鸡蛋为原料，用丙酮脱色后，9 5 乙醇提取，经过进一步精制浓缩，得到的静脉注射用卵磷脂，其组份分析中也仅注明磷脂酰胆碱( p c 为5 8 6 6 ) 、磷脂酰乙醇胺( p e 为2 7 3 4 ) 和神经鞘磷脂( s p m 为0 5 1 2 ) 的含量范围。c n l 0 5 6 3 7 5 c 专利公开了一种用超临界二氧化碳从蛋黄粉中提取高纯度蛋黄卵磷脂的方法，按文献所说即使所得的是一种高纯度的蛋黄卵磷脂，其卵磷脂中的组成含磷脂酰胆碱( p c ) 7 54 4 、磷脂酰乙醇胺( p e ) 1 2 4 0，溶血磷脂酰乙醇胺( l p e ) 6 6 4 、神经鞘磷脂( s m ) 2 8 2 ，尽管广药集团与中山大学博士后出站报告一。注射用蛋黄卵磷腊塑三茎墅壅墨兰些些：卵磷脂的纯度高，还不能作为注射用卵磷脂，仅适用于保健品类。注射用蛋黄蛋黄磷脂因为其提取工艺复杂，技术难度较大，其产业化在国内一直是尚未攻克的重大难点课题。国内虽然有少数企业和研究机构先后投入人力和物力，开展了注射用蛋黄卵磷脂辅料的研究和开发，其中上海、四川等地的个别企业甚至已经获得蛋黄卵磷脂药用辅料的批文和生产许可，但均未能真正实现蛋黄卵磷脂的产业化生产。4 项目完成后市场需求前景、推广应用领域、达到的技术水平及在国民经济发展中的作用4 1 项目完成后市场需求前景、推广应用领域、达到的技术水平卵磷脂是一种重要的化工、食品和医药原料，全世界商品卵磷脂年消耗量约1 0 万吨，其中发达国家占7 0 。在欧美市场上，商品卵磷脂的销售量占营养疗效食品销售的第三位。美国年消耗量约为2 万吨，欧美为3万吨，日本约为1 万吨。预计到2 0 0 5 年，卵磷脂全球消耗量将达到1 4 万吨左右。国内注射用蛋黄卵磷脂及脂质体辅料仍然全部依赖从德国、韩国、瑞典、日本等国家进口，进口价格每公斤2 5 0 0 3 0 0 0 元人民币。据粗略估计，目前我国静脉脂肪乳的市场年需求量为2 0 0 0 万瓶，年增长幅度为1 0 左右，同时加上注射青霉素用的蛋黄卵磷脂和注射用脂质体的需求，需要注射用蛋黄卵磷脂近2 0 0 吨，需要花费近6 亿元人民币购买进口卵磷脂产品。本项目利用先进的超临界c 0 2 萃取技术与设备，生产供注射用的高质量蛋黄卵磷脂产品，所生产的产品质量达到目前国际市场的同类产品质量水平，通过工艺的合理优化，生产成本大大降低，完全可以取代进口，市场前景好。4 2 项目完成后在国民经济发展中的f 隹用4 2l 本项目成功实施并实现产业化后，将为国内静脉脂肪乳及脂质体的堕堡旦皇坐查兰竖主亘堂苎塑童二：生盟旦墨堕塑壁! ! 堕三苎型塞垦兰些些二一生产提供质量稳定、价格优惠的蛋黄卵磷脂，替代进口蛋黄卵磷脂产品，逐步改变药用蛋黄卵磷脂辅料全面依靠进口的局面，部分产品还可打入国际市场，出口创汇。4 2 2 促进我国新制剂、新剂型的发展；4 23 由于采用超临界c 0 2 萃取工艺，将避免使用大量的有机溶剂，减少环境污染；4 2 4 将在工艺、质量控制方法以及设备等方面形成自主知识产权的成果；4 2 5 项目实施成功将体现国家工程研究中心的技术水平以及高新技术改造传统产业的示范和辐射带动作用；4 2 6 在一定程度上将带动蛋鸡养殖、饲料和食品等相关产业的发展。4 2 7 经济效益：项目拟建的生产线预计年生产供静脉注射用蛋黄卵磷脂1 5 吨，副产品蛋黄油9 0 吨，胚胎蛋白粉9 5 吨，预计仅注射用蛋黄卵磷脂的年销售将达到3 7 5 0 万元( 以每公斤2 5 0 0 元计算) 。二、主要的研究内容及需要解决的关键技术、工艺1 、项目开发拟解决的关键工艺技术( 1 )由于蛋黄卵磷脂的热敏性和容易氧化的特点，供静脉注射用的蛋黄卵磷脂的提取、浓缩、干燥的工艺探索，尤其是单元工艺的集成以及设备的配合显得格外重要。( 2 )既往大量文献报道的仅为提取、浓缩或干燥的部分工艺，且绝大多数处于实验室水平，而非经过中试放大、验证以及可以供产业化生产的成熟工艺，更未充分考虑到实际生产过程中物料和能量的具体优化。( 3 ) 静脉注射用的蛋黄卵磷脂的提取、浓缩、干燥的设备选型：围绕工艺要求，对提取、过滤、浓缩和干燥环节的设备进行特殊设计和结构改进：广药集团与中山大学| 尊士后出站报告一“注射用蛋黄! 畔腊的三堇堕塞墨! ! ! 型( 4 ) 供静脉注射和脂质体用蛋黄卵磷脂的表面活性( 尤其是如乳化能力) 的评价体系：由于静脉注射用蛋黄卵磷脂辅料主要以应用其表面活性为特点，必须建立蛋黄卵磷脂的表面活性( 如乳化性能等) 的评价体系，结合工艺的调整和优化，使蛋黄卵磷脂的表面活性达到最佳。2 、主要研究开发内容以中国药品标准作为质量指标，比照国际领先的德国l i p o i d 蛋黄卵磷脂产品质量标准，采用超临界c 0 2 萃取、薄膜浓缩和冷冻干燥等技术，从蛋黄粉中提取分离供静脉注射及脂质体辅料用的蛋黄卵磷脂，并实现产业化和国产化，替代进口蛋黄卵磷脂，满足国内静脉注射用脂肪乳和脂质体生产的需求。( 1 ) 开展国内蛋黄粉生产质量标准的对比研究，在此基础上，完成蛋黄粉制粒、干燥的工艺和优化研究。( 2 ) 采用正交试验设计方法进行蛋黄卵磷脂的工艺研究。分别对超临界c 0 2 摹取、薄膜浓缩、冷冻干燥等重点环节进行研究，获得工艺参数和技术条件，制各供静脉注射及脂质体用的蛋黄卵磷脂。进行中试放大和试生产，优化生产工艺，实现工业化生产。( 3 ) 进行质量标准的研究，建立蛋黄卵磷脂的质量评价体系。采用理化分析( 主要测定含氮量、含磷量、酸值、皂化值和碘值) 、高效液相色谱仪( 测定蛋黄卵磷脂的纯度和组成成分) 、可见一紫外扫描仪等检测磷脂的纯度和理化指标。完成产品的乳化性能试验、表面活性检测、内毒素或热原试验、无菌试验、降压试验、异常毒性试验、血管刺激性实验、急毒和多次给药毒性实验。( 4 ) 完成3 0 0 升2 超临界c 0 2 萃取、薄膜浓缩、冷冻干燥等成套生产线的设备选型、设计、制造、安装调试。( 5 ) 申请精制蛋黄卵磷脂药用辅料生产批文。广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂魄三茎堕塞垦主! 咝：三、项目研究的基础1 、项目立项过程( 1 ) 2 0 0 1 年广州市重点科技攻关项目，资助经费4 5 万元；( 2 ) 2 0 0 2 年初列为国家发改委“中药提取分离纯化高技术产业化示范”专项的主要内容之一；( 3 ) 2 0 0 2 年同时被列为广药集团企业博士后项目；( 4 ) 2 0 0 4 年被列为广东省企业技术创新项目，获得资助经费2 0 0 万元。2 、主要研究进展( 1 ) 项目自2 0 0 1 年3 月在广药集团内部立项以来，曾获广州市重点科技攻关项目的资助( 资助经费4 5 万元) ，先后对不同产地的蛋黄粉进行了筛选和比较，完成了蛋黄粉制粒、干燥工艺的优化和质量控制研究。通过正交试验对蛋黄粉的提取分离、浓缩和干燥条件进行了优化，先后完成1 6 0 批次共计5 0 0 k g 蛋黄粉的超临界c 0 2 萃取和精制分离的小试实验，初步证明采用以超临界c 0 2 萃取、精制浓缩和冷冻干燥的工艺流程是可行的，为工艺研究和产业化奠定了基础。( 2 ) 2 0 0 2 年7 月为加快“注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及产业化”项目的进展和技术攻关，通过与中山大学化学与化工学院联合开展企业博士后研究工作。( 3 ) 目前已经完成4 0 0 k g 蛋黄粉的中试试验，重点开展了超临界c 0 2萃取、低温浓缩和冷冻干燥等关键环节的工艺条件放大、验证和优化，对小试的局部工艺条件和参数进行了合理的调整。( 4 ) 经过工艺的反复摸索和原料的筛选。提取制备的小试和中试蛋黄卵磷脂样品经中山大学分析测试中心、广州侨光药业、广州进出口检验所、广州市医工所等单位检测，其理化指标均符合中国卫生部药品标准第广药集团与中山大学博士后出站报告一。注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及产业化”二部第六册中“注射用蛋黄卵磷脂”项下规定，同时对产品进行了磷脂组分分析、重金属含量和胆固醇含量、乙醇残留量等一系列的检测工作，制备的样品经过广州侨光药厂、广州市进出口检验所、中三大学分析测试中心、广州市医药工业研究所等单位的检测，在性状、磷脂纯度、理化指标、磷脂杂质含量、乳化力等指标上与德国l i p o i d 公司的蛋黄卵磷脂产品相一致，优于韩国产品，给项目组全体成员极大的信心，同时也证明总体的技术方案是可性的，展现项目继续推进的美好前景。详细见广州侨光药厂提供的检测报告。( 5 ) 本项目历经3 年多的研究，建立了蛋黄卵磷脂的组分分析方法、乳化性能评价体系以及磷脂杂质等质量分析方法，并且就提取工艺和注射用蛋黄卵磷脂的产品标准申请了l 项国家发明专利，具有完全的自主知识产权。( 6 )目前已经完成卵磷脂的稳定性实验、质量标准的制定以及急毒试验，正在进行药用辅料的报批。项目已被列为2 0 0 4 年广东省企业技术创新项目，获得资助经费2 0 0 万元。目前本项目已完成蛋黄卵磷脂辅料的市场调查、总体工艺设计和土建建设、蛋黄粉原料筛选、小试和中试试验研究以及生产型设备的选型等工作。药用辅料的报批已经获得受理号，正在国家新药评审中心进行技术评审。以上工作为实现蛋黄卵磷脂的产业化和国产化奠定良好的技术基础。四、卵磷脂综述4 1 卵磷脂的组成和性质卵磷脂是一类具有重要生理活性和表面活性的生命物质，最先由法国学者g o b l e y 于1 8 4 6 年从蛋黄和脑中分得，并根据希腊语“l e k f t h o s 即蛋黄之意命名为“l e c i t h i n ”。卵磷脂广泛存在于大豆、蛋黄和动物内脏中，堑壅里皇些盔兰堕主亘些塑塑堂二：垄塾里墨重塾堕堕塑三苎旦窒墨兰些些二一其中以蛋黄中卵磷脂含量最高，约占蛋黄总重的9 4 。磷脂在生物细胞膜的功能和代谢方面具有十分重要的调节作用，也是生命的基础物质之一。大豆或蛋黄磷脂的主要成分为磷脂酰胆碱( p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ，p c ，狭义也称卵磷脂) 、磷脂酰乙醇胺( p h o s p h a t i d y l e t h a n o l a m i n e ，p e ，也称脑磷脂) 、磷脂酰肌醇( p h o s p h a t i d y h n o s i “，p i ) 、磷脂酸( p a ) 等，根据提取和分离的工艺不同，各个成分的组分有差异。大量深入的研究和临床使用证明，蛋黄卵磷脂作为胚胎磷脂的优越性始终是大豆磷脂所无法比拟的。蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量比大豆磷脂高3 倍，而磷脂酰胆碱又是体现磷脂功能性质的主要成分( 磷脂酰胆碱是胆碱的重要来源) 。蛋黄卵磷脂中卵磷脂和脑磷脂占有比例大，大豆磷脂中则含有其它磷脂化合物较多。两者多汉磷脂的组成及含量见表i 1 所示。表1 - 1蛋黄礴脂和大豆黼的组成磷脂种类蛋黄磷脂大豆磷脂磷脂酰胆碱( p c )7 33 0磷脂酰乙醇胺【p e )1 52 2磷脂酰肌酵口i )l1 8磷脂酸( p a l2磷脂酰丝氨酸口s )3 4神经鞘磷脂( s m )2 3缩醛磷脂1卵磷脂中各种磷脂成分的结构式如下所示。c h 2 一o - c o r tc h 2 0 一c o r irz o c 一0 一c h0r z o c 一0 一c h0c h ：一0 一p 一0 一c h z g h 2 n 飞c 融) ，c h r 0 一户一0 一c h 2 一c m h 瞄o一0磺脂酰胆碱0 哨- p h s p i i n l 由1 c _ 0 1 1 他，p c )群詹硗己肆脏一p i 口珊i 毋l e t h 矾口i 辄mpe )c h z - 0 一c o r ，jr 2 一o c 一0 一c h03 h ，o 一6 一。一c h 。一c h c o o hli 0 n 霹磷脂酰墼氧馥( l 、口p h 4 暑p h 姐铆懈l n e )c h 。一0 一c o r tr 2 一o c - o c h00 ho hc h 2 一。一e 一0 o h6 x0 h6 h磷鹰硫矶醇伍一啼h q 神出d 砷l n o d 诎咖广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷月笪塑三茎堑型! 些：鲫溅e 锌鹫，、c 黼陟p _ 谯1 h 枷h 矿剁w 椭捧c , h l o c o eic h o c o ri?c h , o p 加hi纛磨黻纯的磷脂酰胆碱是吸水性的白色蜡状物，在空气中由于不饱和脂肪酸的氧化而变为黄色或棕色。磷脂酰胆碱不溶于水及丙酮，易溶于乙醚、乙醇及氯仿中。磷脂酰胆碱在脑、神经组织、肝脏、肾上腺及红细胞中含量较多，蛋黄中含量最多( 约占8 1 0 ) ，所以称为卵磷脂。卵磷脂的系统研究开始于2 0 世纪3 0 年代的德国，随着对卵磷脂研究和应用的深入开展，世人对其结构、性能、功效和生理生化的认识在逐步深化。由于卵磷脂实用价值的开拓和发展，开展卵磷脂的精细分离技术和精细有机合成技术以及化工系统工程的研究，使高纯卵磷脂、精细卵磷脂得到迸一步的开发应用。进一步的研究虽然发现和证实了卵磷脂具有很高的药用及营养价值，但由于其提取技术难度极大、提取成本昂贵，所以在很长时间内大规模的提取和精制技术都未能得到推广。直到6 0 年代，发达国家才实现了工业化生产粗磷脂，并且将其广泛应用于食品、医药、化妆品和工业助剂领域。到2 0 世纪7 0 年代末，欧美少数发达国家利用大豆作为原料，逐步解决技术问题，利用传统的溶剂萃取方法进行生产，得到纯度稍高的磷脂。在此基础上继续完善工艺，得以从蛋黄中提取出蛋黄卵磷脂。广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及产业化：目前，蛋黄卵磷脂的分离提纯方法主要有溶剂分离技术、酶催化精制提取法、无机盐复合沉淀法、半透膜分离法、柱层析法、乙酰化法和超临界c 0 2 萃取法。其中最传统最常用的方法是溶剂提取法。近年来，世界卵磷脂工业发展迅速，年产量达到1 5 0 k t 。美国a d m公司、r i c e l a n d 公司、德国l u c a s m a y e r 公司、德国l i p o i d 公司、韩国d o o s a n公司等生产的数十种卵磷脂几乎囊括了世界市场。目前，我国已有1 0 余家企业生产大豆卵磷脂，但是都是小规模的生产，还未形成产业化规模，技术水平也落后于世界先进水平。生产蛋黄卵磷脂的厂家则更少。国内目前有1 0 余药厂用精制卵磷脂，年用量为2 0 0 吨左右，均从国外进口。同时随着磷脂青霉素生产厂的不断增加，脂质体、磷脂复合物等新产品的不断推广应用，精制蛋黄卵磷脂需求量会逐年增加。国内的蛋黄卵磷脂产量远远不能满足市场需要，大部分卵磷脂特别是高纯度蛋黄卵磷脂完全依赖进口。如德国l i p o i d 公司是世界上生产高纯度蛋黄卵磷脂的老牌厂家，在2 0 世纪7 0 年代即实现了产业化生产。韩国d o o s a n 公司也在9 0 年代实现了精制蛋黄卵磷脂的工业化生产。4 2 磷脂的分类商业术语磷脂( l e c i 也i l l ，p h o s p h o l i p i d 或p h o s p h a t i d e ) 通常主要指由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、神经鞘磷脂等组成的脂质成分和表面活性成分的混合物，显现出明显的生理活性和表面活性。一般主要指大豆磷脂和蛋黄磷脂两大类。按照卵磷脂的纯度及处理方式可以分为粗制磷脂、精制( 脱脂) 磷脂、酶处理磷脂、分提磷脂和化学处理磷月旨等种类，详细见表1 2 。广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及产业化”表1 - 2 主要商品磷脂产品种类产品分类主要内容将在制油过程中所得到的胶质的水分去除后所得到的褐色的膏状物，或者从蛋黄粉中粗制磷脂粗提出来的磷脂膏状物，其中磷脂含量约为六成左右。精制( 脱采用丙酮、乙醇、乙酸乙酯等有机溶荆及超滤法、超临界流体萃取技术将粗制磷脂中脂) 磷脂的油及其它微量杂质除去后的高纯度制品，有粉末状、颗粒状等品种。酶处理磷磷脂经酶处理后的制品，如用磷脂酶a 2 处理后提高了亲水性能的溶血卵磷脂等。脂采用溶剂及其它分提技术提高磷脂浓度，或采用层析分离技术所得到的制品，主要用分提磷脂于化妆品、医药中。化学处理采用乙酰化改善磷脂的乳化性能；采用氢化提高磷脂的氧化稳定性；采用羟基化改善磷脂磷脂的亲水性能等得到的产品，大部分用于化妆品及医药品中。由于大豆磷脂研究和应用的历史较悠久，且加工和销售价格较蛋黄卵磷脂低，故目前市场上主要商品磷脂产品为大豆磷脂。但是深入的研究和临床使用证明，蛋黄卵磷脂作胚胎卵磷脂的优越性始终是大豆卵磷脂无法比拟的，国际市场愈来愈趋向于接受蛋黄卵磷脂作为食品添加剂和药物辅料。卵磷脂由于其特殊的生理活性和表面活性日益受到人们的青睐。国际磷脂研究集团( t h ei n t e r n a t i o n a ll e c i t h i ns t u d yg r o u p ) 于1 9 8 6 年在美国芝加哥召开的第四届国际磷脂会议上成立，每年都举行一次国际性聚会，互通科研、生产应用及销售方面的信息。从近几年看，国外许多公司都致力于高附加值磷脂产品的开发及其应用技术的研究。从磷脂的市场结构看，目前已逐渐由传统的低级粗制品向高级精制品或酶改性精制品以及复合制品转变。4 3 卵磷脂的应用“m 5 1蛋黄卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的三大营养素，属胚胎磷脂，有效成分含量高，生物利用度高，具有非同小可的保健功能。蛋黄卵磷脂广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂的工艺研究及j 兰业世可以预防脂肪肝，促进肝细胞再生，可降低血清胆固醇含量，防止肝硬化并有助于肝功能的恢复；蛋黄卵磷脂有益于糖尿病的恢复，糖尿坏疽及动脉硬化等并发症患者有一定的疗效；蛋黄卵磷脂可以增进血液循环，改善血清脂质，清除过氧化物，使血液中胆固醇及中性脂肪含量降低，减少脂肪在血管内壁的滞留时间，促进粥样硬化斑的消散，防止由胆固醇引起的血管内膜损伤，对高血脂和高胆固醇具有显著的功效，可预防和治疗动脉硬化。蛋黄卵磷脂本身除了拥有的显著的保健功能外，它同时是一类具有重要生理活性和表面活性的生命物质，由于蛋黄卵磷脂具有两性分子结构，含磷酸根及胆碱基的极性端具有亲水性，两个较长的碳氢链非极性端具有亲脂性，这种独特的理化特性和生理活性在制药工业中具有十分重要的意义，使精制蛋黄卵磷脂可以用作制备各种药物制剂的乳化剂和辅料，作为重要的辅料广泛应用于生产静脉脂肪乳、注射脂质体、复乳、磷脂复合物、血浆代用品等制剂中。精制蛋黄卵磷脂还可用于青霉素的添加剂，起到促进药效吸收，减轻疼痛、增强疗效、抗过敏的作用。药用卵磷脂特别是注射用卵磷脂，是研究、制各和生产静脉脂肪乳、注射用脂质体、复乳、磷脂复合物、血浆代用品等药物终端制剂的关键辅料j ，也是磷脂研究开发中最具高附加值的产品形态。国外除了把卵磷脂作为保健食品外，还在临床上用于防治心脑血管及肝、肿瘤等疾病。蛋黄卵磷脂作为药物制剂及给药载体正在步入研究和应用的新阶斟4 “。精制蛋黄卵磷脂目前最为广泛的应用是用作脂肪乳剂的乳化剂。脂肪乳剂是一种水包油型的乳化液，用于人体静脉输液，能完全被吸收，对恢复健康增强体力有一定的作用，用于不能肠道进食的患者的治疗，是一种极为重要的肠外营养剂。目前国内主要有华瑞制药有限公司、广州侨光制药厂、四川蜀乐药业股份有限公司、昆明康普莱特制药有限公司、广州绿十字药业有限公司、北京费森尤斯卡比医药有限公司等生产静脉脂肪乳注广药集团与中山大学博士后出站报告一“注射用蛋黄卵磷脂的工芝研究及产! ! 型射液，均从国外进口精制蛋黄卵磷脂用作乳化剂。精制蛋黄卵磷脂也可应用于脂质体制剂的生产。脂质体是一种人工制备的类脂小球体，以卵磷脂为主要原料，一个或多个类似细胞膜的类脂双分子层包裹着水相介质组成。脂质体是一种新型的药物载体，可以制备抗癌药物的新剂型，表现出低毒性和高效性。微乳制剂也是一种新型的药物释放载体，制各微乳制剂最理想的乳化剂是精制蛋黄卵磷脂，蛋黄卵磷脂生物相容性好，无毒，且本身也具备良好的生理活性。微乳液滴一般小于o1um ，作为药物载体具有透明、稳定、吸收完善、靶向释药等优点，在同一体系中可作不同亲脂性药物的媒介物，并可制成复方制剂，以提高药物疗效，降低毒副作用。微乳制剂可以用作多种给药途径，如口服制剂、注射剂、透皮吸收制剂、靶向给药制剂等。蛋黄卵磷脂与卵磷脂胶囊作为药物制剂已有生产，作为保健食品除了有进口软胶囊外，国内也有多家生产，为准字号产品，如四川英格尔生物工程责任有限公司生产的卵磷脂片。德国罗纳一普朗克乐安公司生产的强力肝得健软胶囊也是以蛋黄卵磷脂为主药，添加各种维生素而制得，应用于急性或慢性肝炎、肝硬化、肝中毒症，由各种原因引起的肝脏脂肪变性，胆汁郁积等症。该公司同时生产立保脂妥胶囊，也是以蛋黄卵磷脂为主药，用于治疗静脉粥样硬化等症。一些药物或中药有效成分与磷脂形成的络合物和复合物，通过与卵磷脂复合而形成载体系统或前体药物，可有效提高天然活性成分的体内吸收，显著改善其生物有效性。蛋黄卵磷脂本身具有一定的药理作用，与其它天然活性成分复合得到多种磷脂复合物，其理化性质和生物特定较原化合物均有不同程度的改变，具有较强的亲脂性。如磷脂与非甾体抗炎药阿司匹林为代表的水杨酸类、消炎痛为代表的吲哚乙酸类和芳基乙酸类消炎镇痛药形成络合物，可使药物的刺激作用明显减少。一些皂甙内药物与磷脂形成复合，其亲脂性明显增加，从而改善了口服的吸收并提高了生物利垫塞里皇主坐查堂堕圭亘堂堂塑堂= ：生墅里墨重塾堕塑塑三苎堑窒垦兰些些：一用度。蛋黄卵磷脂在医药领域中的应用方兴未艾，作为优良的天然乳化剂和给药载体，无毒副作用，且能增强药物活性，可使活性成分在较低剂量下发挥效用，具有安全性，再加上其自身也有药用价值，所以，蛋黄卵磷脂的研究应用具有广阔前景。主要参考文献【1 江波，江林涌，周汉良磷脂酸和溶血磷脂酸的生理功能生理科学进展，2 0 0 2 ，3 3 ( 2 ) ：1 5 9 - 1 6 2【2 n e m o zg ，s e r ec ，c o n t im s d e c u v ea c t i v a t i o no f r o l i p r a m - s e n s i t i v e ，c a m p s p e c i f i cp h o s p h o d i e s t e r a s e i s o f o r m s b yp h o s p h a t i d i ca c i dm o lp h a r m a c o l ，1 9 9 7 ，5 1 ：2 4 2 - 2 4 9【3 3l i m a o l ac ，s c h a a pd ，m o o l e n a rwh ，e ta lp h o s p h a t i d i ca c i da c t i v a t i o no fp r o t e i nl ( i n a s ec _ o v e r e x p r e s s e di nc o s c e l l s ：c o m p a r i s o nw i t ho t h e rp r o t e i nk i n a s eci s o t y p e sa n do t h e ra c i d i cl i p i d sb i o c h e mj ，1 9 9 4 ，3 0 4 ：1 0 0 1 1 0 0 8 4 a n & e s e nb t ，r l z z om a ，s h o m ek ，e ta lt h er o l eo f p h o s p h 撕d i ci nt h er e g u l a t i o no fm e i l a n 诬k e r ks i g n a l i n gc a s c a d ef e b sl e t t ，2 0 0 2 ，5 3 l ( 1 ) ：6 5 6 8 5 】z h a oi ，s h e nss ，f i s c h e reh s t i m u l a t i o nb yp h o s p h o l i p i d so fap r o t e i n - t y r o s i n e - p h o s p h a t a s ec o n t a i n gt w os r ch o m o l o g yd o m a i n sp r o cn a i la c a ds c iu s a ，1 9 9 3 ，9 0 ：4 2 5 1 - 4 2 5 5 6 r e e v e sdl ，t h e m p s o nmg ，d a c kgl ，e ta lt h er o l eo fp h o s p h a t i d i ca c i di np h a t e l e t - d e r i v e dg r o w t hf a c t o ri n d u c e dp r o l i f e r a t i o no fr a th e p a t i cs t e l l a t ec e l l sh e p a t o l o g y ，2 0 0 0 ，31 ：9 5 - 1 0 0 7 】刘平，舒良磷脂酰丝氨酸的药理及临床应用研究进展国外医学药学分册，1 9 9 1 ，18 ( 4 ) ：2 0 7 - 2 1 0 8 l ir ，w i n gll ，k i v c hdg ，e ta 1 e f f e c t so fc h r o n i cn i c o t i n ea n db a l o p e r i d o la d m i n i s t r a t i o n0 1 1m u s c a r i n i cr e c e p t o r - m e d i a t e dp h o s p h o l i n o s i t i d et u r n o v e ri nr a tb r a i ns l i c e s ，p s y c h o - p h a r m a c o l o g y ，1 9 9 2 ，1 0 9 ：2 4 8 9 张泽林磷脂酰肌醇激酶：肌醇磷脂代谢、肿瘤发生及其它华西药学杂志，1 9 9 2 ，7 ( 1 ) ：4 5 - 4 9【1 0 路新强，张雁芳，汪海，磷脂酰肌醇对体温调节中枢胆碱能受体功能的调节作用军事医学科学院院刊，1 9 9 7 ，2 1 2 ) ：1 1 2 1 1 51 7 堑叁旦皇生坐查兰苎主亘当塑塑鱼二：星堑旦墨重塑壁堕堕三苎堑窒丝兰些些：一【1 l j 沈同，王镜岩，生物化学北京；高等教育出版社( 第二版) ，1 9 9 0 ：5 3 5 4 1 2 s a f f o r df ，e ta lt e s t i n gt h ee f f e c t so fd i e t a r yl e c i t h i no nm e m o r yi nt h ee l d e r l y ：a ne x a m p l eo fs o c i a lw o r k m e d i c a lr e s e a r c hc o l l a b o r a t i o nr e s e a r c ho ns o c i a lw o r kp r a c t i c e ，1 9 9 4 ，4 ：3 4 9 1 3 b a r e n h o l zy ，e ta ls 州n g o m y e l i ni nb i l a y e r sa n db i o l o g i c a lm e m b r a n e s b i o c h e