（分析化学专业论文）高效液相色谱技术对药物和农药的分析应用研究.pdf

高效液相色谱技术对药物和农药分析应用 研究 分析纯学专韭研究生王莉 指导教魉周光明教授 中文摘要 高效液相色谱( h p l c ) 法由于其具有分离效率高，分析速度快，应用范围广 等饶点，已成为露前最有效静分离方法之一。仡学笈光分轿法具有麓灵敏魔，分 析仪器简单，检测限低等优点成为从上个墩纪8 0 年代末至今分析化学研究的一 大煞点。将化学发光分析法与高效液相色谱( h p l c ) 分离法联用的分析技术因其 结合了两者豹优点褒环境科学、生念葶萼学、药物科学及临床医学上褥到愈来愈广 泛的应用。 强裁，涎羞人们物囊生活拳乎黪提衰，食晶豹蘩养与安全闷题疆盏褥到入翻 的关注。营养保健食品的发展成为社会发展的必然趋势。人们过多的食用动物性 食黼帮藉蕊工鹃食麓导致食鑫中鹊馨养袋分翔维生索、绎簸豢、矿貔获等的流失。 其后果直接导致了各种重大疾病。弱外，随着现代化学工业的发展，食品也受到 污染的威胁，食品中的残毒更易诱发某些人体内的不治之疲。因魏，更深入的了 解食品中的有益成分以及有害成分对人民的生活餍量的提商具有很大的意义和 研究价值。因此，本文选择食品中的维生索含量的检测和农药残留蹩的检测为研 究对象。本文主要鹾究了以下且令帮分： 1 研究了维生索b l 和维生素c 与铁氰化钾鲁米诺的高效液相色谱化学发 壳体系熬发光行为，建立了瓣薅溅定v b l 秘。熬h p l c c l 瑟方法，著戒功应 用于蜂蜜和药物的分析中。该法简单、快捷，灵敏度高，线性范围宽。该方法测 定vb l ，v c 分别在5 0 x 1 0 。8 8 0 1 0 巧g m l 与1 0 1 0 - 95 0 1 0 。6g m l 范围内呈良 好的线性关系，检测限分别为8 0 1 0 9g m l 与5 0 x 1 0 4 1g m l 。 2 利用维生素b 6 与高碘酸钾一鲁米诺能够产生化学发光的特性，建立了测定 v b 6 的h p l c c l 的方法。其中在鲁米诺中加入k b r 可以大大增敏该反应，提高了 反应的灵敏度并成功运用于饮料中v e 6 的测定。该方法测定v b 6 的线性范围为5 0 1 0 - 7 5 0 1 0 4g m l ，检测限为2 o 1 0 一g m l 。 3 应用高效液相色谱最常用的紫外检测器，研究了多种维生素的分离分析方 法，成功建立了同时分离测定维生素b l 、b 2 、b 1 2 、c 和叶酸的快速分析测定方 法。该法所用试剂简单易得，操作简便迅速，分离不需要梯度洗脱，准确度和精 密度均较理想，方法的线性范围宽，检出限也较低，用于实际样品分析，结果令 人满意。其中，v b 2 的线性范围为2 0 x 1 0 - 78 0 1 0 g m l ，v b 6 的线性范围为2 0 1 0 6 _ 5 0 1 0 4g m e ，v b l 2 的线性范围为2 0 x 1 0 - 78 0 x 1 0 4 m l ，v c 的线性范 围为5 0 x 1 0 - 7 8 0 1 0 g m l ，叶酸的线性范围为2 0 x 1 0 - 6 - 5 0 1 0 一e g m l 。vb 2 ，v b 6 ，v b l 2 ，v c 和叶酸的检测限分别为6 1 0 9g m l ，6 1 0 一g m l ，7 1 0 一g m j 。，1 x 1 0 。9g m l 和6 1 0 一g m l 。 4 利用高效液相色谱的紫外检测器分离并测定了蔬菜中甲基对硫磷和对硫 磷的残留量，建立了同时测定甲基对硫磷和对硫磷在蔬菜中的残留量的反相高效 液相色谱的分析方法。样品前处理过程简便、方法准确可靠，灵敏度和准确度达 到了农药残留量检测的要求。其中，甲基对硫磷和对硫磷分别在o 0 4 1 0 o o g m l 、o 0 0 2 - 1 0 0 0p g m l 范围内呈良好的线性关系，检出限分别为o 0 3 6 m m l 、o 0 0 0 4 3 “m l 。该方法成功运用于蔬菜样品的分析中。 关键词：高效液相色谱化学发光药物分析农药残留量分析 a p p l i c a t i o no fh p l c d e t e c t i o nt o p h a r m a c e u t i c a la n dp e s t i c i d es a m p l e s s p e c i a l t y ：a n a l y t i c a lc h e m i s t r y r e s e a r c h ：h p l ca n dl u m i n e s c e n c ea n a l y s i s t u t o r ：p r o f e s s o rg u a n g m i n g z h o u p o s t g r a d u a t e ：l iw a n g ( n o 2 0 0 3 5 9 9 ) a b s t r a c t a tp r e s e n t ，h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) h a sm o s t l yb e e n u s e dt oe n h a n c et h es e l e c t i v i t yo fa n a l y t i c a lm e t h o d s ，b e c a u s eo fi t sh i g he f f i c i e n c y f o rs e p a r a t i o no fa n a l y s e sf r o mv a r i o u si n t e r f e r i n gs u b s t a n c e s o n eo ft h em a j o r r e s e a r c ha r e a sa b o u th p l ci n v o l v e st h ed e v e l o p m e n to fs e n s i t i v ed e t e c t i o nm e t h o d s s i g n i f i c a n t l ym o r es e n s i t i v ed e t e c t i o nc a l lb er e a l i z e db yh p l cw h e n t h ea n a l y s e sa r e s u b j e c t e dt ot h eu s i n go fc h e m i l u m i n e s c e n c e ( c ud e t e c t i o n t h ec h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) d e t e c t i o ns y s t e mc o m b i n e dw i t hh p l cs e p a r a t i o nm e t h o dc a l lo f f e re x c e l l e n t a n a l y t i c a ls e l e c t i v i t ya n ds e n s i t i v i t y n od o u b t ，c h e m i l u m i n e s c e n c el i n k e dt oh p l c w i l lb ew i d e l ya p p l i e di ne n v i r o n m e n t a ls c i e n c e ，b i o l o g i c a ls c i e n c e ，p h a r m a c e u t i c a l s c i e n c ea n dc l i n i c a ls c i e n c e t h et h e s i sc o n s i s t so ft w op a r t s o n ei sar e v i e wr e l m e dt ot h ea p p l i c a t i o no f h p l cw i t hp o s t c o l u m nc h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e c t i o nt op h a r m a c e u t i c a ls a m p l e s e m p h a s i si st a k e no nt h ed e v e l o p m e n ti nt h er e c e n tt e ny e a r s t h eo t h e ri sr e s e a r c h r e p o r t sw h i c hi sc o m p o s e do f4c o m p o n e n t sa sf o l l o w s 1 ) d e t e r m i n a t i o no ft h i a m i n a n da s c o b i ca c i db yr e v e r s e d p h a s eh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw i t h c h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e c t i o n ；2 ) d e r e r m i n a f i o no fp y r i d o x i n eb yr e v e r s e d p h a s e h p l cw i t hc h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e c t i o n ；3 ) d e t e r m i n a t i o no fv i t a m i nb 2 ，b 6 ，b 1 2 ， ca n df o l i ca c i db yi o n p a i rr e v e r s e p h a s eh p l c ；4 ) a p p l i c a t i o no fr p - h p l cf o rt h e d e t e c t i o no fm e t h y l p a r a t h i o na n d p a r a t h i o nr e s i d u e si nv e g e t a b l e s 1 d e t e r m i n a t i o no ft h i a m i na n da s c o b i ca c i db yr e v e r s e d - p h a s eh p l cw i t h c h e m i l u m i n e s e e n e ed e t e c t i o n an o v e lh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p hc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) 一 c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) d e t e c t i o nm e t h o df o rs i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no f t h i a m i n b i ) a n da s e o r b i ca c i d ( v c ) b a s e do nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c er e a c t i o no fv m a n dv c w i t hl u m i n o l f e k 3 ( c n ) 6 一k b rs y s t e mw a sd e v e l o p e d t h ep r o p o s e dm e t h o dh a sb e e n a p p l i e dt o t h ed e t e r m i n a t i o no fv b la n dv ci nap h a r m a c e u t i c a la n dh o n e y p r e p a r a t i o n t h i sh p l c c lm e t h o ds h o w e dg o o dl i n e a r i t yw h e ni tw a se v a l u a t e d s i m u l t a n e o u s l y o nv b la n dv ca n dt h ew o r k i n gr a n g ef o rt h es y s t e mw a s 5 0 1 0 8 - 8 0 1 0 5g m la n d1 0 1 0 - 9 5 0 1 0 。6g m lw i t hal i m i to f8 0 1 0 - 9g m l a n d5 0 x 1 0 g m lr e s p e c t i v e l y t h er e l a t i v es t a n d e r e dd e v i a t i o n s ( r s d ) ( n = 1 1 ) w e r eo 8 f o rv b i ，a n d2 9 f o rv cw i t har e g r e s s i o ne q u a t i o no ft h ef o r m ) 一 5 3 2 3 7 x + 1 2 7 3 5a n d y = 5 7 3 4 x 1 0 z x + 1 2 6 6 2 d e t e r m i n a t i o no fp y r i d o x i n eb yr e v e r s e d p h a s eh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h yw i t hc h e m i l u m i n e s g e n c ed e t e c t i o n an o v e lh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p hc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) 一 c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) d e t e c t i o nm e t h o d f o rs i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no f a y r i d o x i n e ( v b 6 ) b a s e do nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c es t r e n g t hr e a c t i o no fv b 6w i t h l u m i n o l k 1 0 4s y s t e mw a sd e v e l o p e d ，t h ep r o p o s e dm e t h o dh a sb e e na p p l i e dt ot h e d e t e r m i n a t i o no fv b 6i nd r i n k s t h i sh p l c c lm e t h o ds h o w e dg o o dl i n e a r i t yw h e ni t w a se v a l u a t e ds i m u l t a n e o u s l yo nv b 6a n dt h ew o r k i n gr a n g ef o rt h es y s t e mw a s 5 0 x 1 0 - 7 - 5 0 1 0 4g m lw i t hal i m i to f2 0 x 1 0 。8g m lr e s p e c t i v e l y t h er e l a t i v e s t a n d e r e dd e v i a t i o n s 限s d ) ( n = 5 ) w e r e2 8 f o rv b 6 ，w i t har e g r e s s i o ne q u a t i o no f t h ef o r my = 9 5 4 4 7 2x + 1 4 8 8 3 d e t e r m i n a t i o no fv i t a m i nb 2 ，b 6 ，b 1 2 ，ca n df o l i ca c i db yi o n p a i rr e v e r s e p h a s eh p l c a na c c u r a t ea n dr e l i a b l ei o n - p a i rr e v e r s ep h a s eh p l cm e t h o dw a se s t a b l i s h e df o r t h ed e t e r m i n a t i o no fv b 2 ，v b 6 ，v m 2 ，v ca n df o l i ca c i d t h e s ev i t a m i n sc a nb e s e p a r a t e do nh y p e r s i l c l 8 ( o d s 2 ，5 1 a m ，4 6 m m x l 5 0 m m ，) c o l u m nb yu s i n gv ( m e t h a n 0 1 ) v ( 0 5 a c e t i ca c i d ) = 3 0 ：7 0 ( a d d2 5 m m o lp e n t a n es o d i u mm e r c u r i ct h i o c y a n a ) a s m o b i l ep h a s ew i t hu vd e t e c t o ra taw a v e l e n g t ho f2 5 4 n m t h es t a n d a r de u r v ew a s l i n e a r ：2 0 1 0 - 7 8 0 1 0 一g m l ( v b 2 ) ，2 0 1 0 6 5 o x l 0 4 9 m l ( v b 6 ) ，2 0 x 1 0 7 - 8 0 1 0 4 9 m l ( v b l 2 ) ，5 0 x 1 0 - 7 - g 0 x 1 0 一e c m l 4 v c ) a n d2 0 x 1 0 6 - 5 o x l o e d m lf r o l i ca c i d ) t h e ；” d e t e c t i o nl i m i tw e r e6 1 0 9 9 m l ，6 1 0 。8g m l ，7 1 0 。9j g m l ，1 1 0 _ 9 9 m la n d 6 1 0 8 g m ef o rv b 2 ，v b 6 ，v b l 2 ，v ca n df o l i ca c i d t h em e t h o dh a sb e e ns u c c e s s f u l l ya p p l i e dt o t h ed e t e r m i n a t i o no ft a b l e to fc o m p l e xv i t a m i na n dh o n e yo nt h em a r k e t ，w h i c h p r o v e dt ob es i m p l ea n dr a p i d 4 a p p l i c a t i o no fr p h p l cf o rt h ed e t e c t i o no fm e t h y l - p a r a t h i o na n dp a r a t h i o n r e s i d u e si nv e g e t a b l e s a r a p i dm e t h o dh a sb e e nd e v e l o p e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fm e t h y l - p a r a t h i o na n d p a r a t h i o nr e s i d u e si nv e g e t a b l e sb yt h er e v e r s e d - p h a s eh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y t h i sa p p r o a c ha l l o w st h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fp a r a t h i o n a n dm e t h y l p a r a t h i o n ，w i t h o u td e d i o u ss a m p l et r e a t m e n t s h y p e r s i lc l s c o l u m n ( 4 6 m i l l 。3 0 0m i l l ，5i x m ) w i t hc h 3 0 h ：h 2 0 ( 6 0 ：4 0 ，v 厂v ) s o l u t i o na sm o b i l ep h a s e ， u l t r a v i o l e td e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a sa t2 7 0n l t l t h ec a l i b r a t i o ng r a p h sw a sl i n e a ri n t h ec o n c e n t r a t i o n r a n g eo fo 0 4 1 0 0 0i x g m l 0 0 0 2 1 0 0 0p g m lf o r m e t h y l - p a r a t h i o na n dp a r a t h i o n ，r e s p e c t i v e l y t h el i m i t so fd e t e c t i o nw e r eo 0 3 6 t g m lf o rm e t h y l p a r a t h i o na n d0 0 0 0 4 3 g m lf o rp a r a t h i o n ( s n = 3 ) t h e a v e r a g er e c o v e r yo fm e t h y l p a r a t h i o na n dp a r a t h i o nw e r e9 1 8 9 4 8 而mr s d f r o m1 0 6 t o2 4 1 t h i sm e t h o di ss i m p l ea n dr e l i a b l e k e y w o r d s ：h p l c ，c h e m i l u m i n e s c e n c e ，p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s ，p e s t i c i d e a n a l y s i s 1 序言 第一部分综述 高效液相色谱法( h p l c ) 是在经典柱色谱理论基础上，引入气相色谱的塔板等 有关理论和先进技术，并加以改进和发展起来的一门现代液相色谱学。它是现代 分离和测定的一种重要手段。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下 列主要优点：1 采用高压输液泵输送流动相，流速快；2 应用了颗粒极细规则均 匀的固定相，柱效高，分离效率高；3 广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了 灵敏度。4 不受试样挥发度和热稳定性的限制，非常适用于分离生物大分子、离 子型化合物、不稳定的天然产物以及各种高分子化合物等。目前，随着色谱技术 的发展，结合计算机各种软件的开发，使h p l c 与各种检测仪器联用，更加拓宽 了h p l c 的应用范围。 高效液相色谱仪是7 0 年代发展起来的一种现代分离分析仪器，高效液相色谱 仪一般分为四个部分：高压输液系统，进样系统，分离系统以及检测系统和数据 记录处理系统。高压输液泵将具有不同极性的流动相压入装有填充剂的色谱柱， 样品经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各成分先后进入检测器，记录色谱 图，进行定性定量分析。近年来，高效液相色谱仪的各个组成部件都有新的发展， 使h p l c 分析更加灵敏准确、简便快速。特别是联用技术的发展，使之在食品分 析、药物分析、环境监测及生命科学等领域的应用更具重要意义。 应用于液相色谱的检测器除应具有灵敏度高、噪音低、线性范围宽、响应快、 死体积小等特点外，还应对温度和流速的变化不敏感。在液相色谱中，没有一个 既灵敏又通用，还可用于梯度洗脱的检测器。因此，在液相色谱的发展中，检测 器的改进是入们研究中遇到的最大的挑战。现在，各种各样检测器的研究论文层 出不穷，如紫外可见光度检测器，拉曼光谱检测器，荧光检测器，化学发光检 测器，质谱检测器，电化学检测器，核磁共振检测器以及光电二极管阵列检测器 等等【1 1 。随着后来的发展，毛细管液相色谱和毛细管电泳中使用敏感的吸收系数 检测器。r o e h l i n 2 1 弓j 用3 6 篇文献比较不同类型的检测器。b e r t h o d 论述了液相色 谱中激光检测器的使用，讨论了液相色谱检测器性能，相关激光性能，以及几个 激光l c 相结合的例子。d a s g u p t a 3 】引用1 7 0 篇参考文献论述柱后操作技术在离 予甑谱0 c ) c p 改进选择性和敏感度。总之，检测器的研究其拱同的方向均朝着灵 敏痰毫、熏臻性好、响应扶、线蛙蕊围塞、逶应笾隧广、对滤魂攘浚量帮瀑度波 动不敏感、死体积小等特性发展。 纯学发光( c h e m i l u m i n e s c e n c e , c l ) 稔溅翼奔设备麓肇、线瞧范鑫宽、分辑遮浚绥 及灵敏度高等优点，是一种有效的微量和痕攫分析手段，已在环境科学、临床检 验、药学、工监分析等领域褥蓟广泛的应用 4 , 5 , 6 1 。怒楚，化学发光检测鲍弱陲性 在于：1 可供发光用的试剂嗣前尚有限；2 ，发光机理有待进一步研究；3 。检测的 选择性不高。因此，高分辨的高效液相色谱与高灵敏度的c l 检测手段相结合， 成为一静理想豹分离分辑方法，缮副人们数广泛重视【7 1 。本章主要分绍h p l c 柱 后梭测技术的应用，侧重介绍h p l c c l 联用技术的成用情况。 2 h p l c 柱后检测系统 2 1h p l c 常规检测系统 h p l c 检测器的研究工作直处于发展之中。其中，紫外可见检测器f u v ) ，示 差攒毙检测器( 鞑) ，焚光检溅稳( f l d ) 是h p l c 兹豢援捡溅爨。 紫外可见检测器以其灵敏度高，噪音低，线性宽等特点成为h p l c 中应用最广 泛静裣瓣嚣。它不仅具有嵩斡选择健和灵敏度，两虽对舔凌滚度，浚速波动，冲 洗剂组成的变化不敏感，因此无论等度洗脱还是梯度洗脱都可以使用。对强吸收 的物质检测限可达l n g 。 示差折光检测器又称为据射指数梭测器，是一种通用型的检测器。它主要是应 用空间排阻色谱在简分子工业以及食品和饮料工业中糖的枪测，由于工业界较少 发表瑟溪l 缮瓣结暴，其论文数相对较少。缀煲l 上只怒与滚动熠据射攒数毒蓑髯豹 样晶都可以用它来进行检测，其检测限可达到1 0 一1 0 一e m e 。但由于物质的折射 辜对滏度交位 # 繁敏感，戳魏检溺器登矮在蓬温条佟下迸露捡灞。 荧光检测器是一种高灵敏度和高选择性的检测器，它的灵敏度高出紫外检测器 数酉倍，虽所需样黼量小，因此在药物和生亿分析中广泛应用。许多彳七合镌，特 别摄芳香竣的化合物、生化物质，如有机胺、维生索、激素、酶等的检测方愆得 到了广泛的应用。 2 2 2h p l c 柱后化学发光检测 自从1 9 7 4 年h a r t k o p 【8 】首次报道了液相化学发光检测法，3 0 多年来，这种检测 技术以其仪器设备简单，操作方便，灵敏度高，线性响应范围宽等优点广泛地应 用于冶金、化工、环保、生物、医学、药学和临床等组分复杂、含量低的样品分 析o 儿12 1 。与其他检测方法相比，c l 检测是建立在氧化还原反应所引起的能量 转移原理基础上，一般情况下需要两种或者两种以上物质混合反应，才可能产生 发光现象。所以，h p l c - c l 检测装置往往包括如图1 所示的4 大部分，即输液 泵、色谱柱、混合器和c l 检测器。待测组分经色谱柱分离后与发光试剂混合发 生c l 反应，流通池亦即发光池内的光信号由光电倍增管或者其他光电转换器件 转换并放大，最后由记录仪或者数据采集装置记录。由于该检测法不需要光源和 复杂的光学系统，直接检测发光强度，消除了光源不稳定和杂散光的干扰，因此 灵敏度很高。 s a m p l ei n j e c t o r c a r r i e l s o l u t i o n p u m p c l r e a g e n t p u m p w a s t e 图1高效液相色谱柱后化学发光检测装置示意图 目前，利用化学发光体系可进行检测的物质很多，但最常用的化学发光体系主 要有鲁米诺，光泽精，过氧草酸盐( 或酯) 一荧光物质h 2 0 2 ，r u ( b i p y ) 3 2 r u ( p h e n ) 3 2 。 等电致发光，c e ( i v ) ，高锰酸钾还原性有机物等。h p l c 的高分辨率和c l 的高灵 敏度将相结合，成为一种理想的分离分析方法，得到人们的广泛重视，广泛应用 于药物、环境、医学、食品等各方面【1 3 , 1 4 】。 3 柱后化学发光在药物分析方面的应用 3 1 抗生索类药物的分析 抗生素是人及动物常用的药物之一，p e n aa i ”1 等采用k 3 f e ( c n ) 6 o h 发光体系 嚣窳了霆环索、差淘舀环素、无承疆嚣素戳及无东差蠢霆环素，羧灞袋分搿为 2 , 0 ，0 5 ，0 0 1 和0 0 4 雌l 。y a o t l 6 1 等利用l u m i m o l 。k 1 0 4 o h 体系测定了先锋霉 素、头穗氯氨苄、先锋霉索v l 帮关孢羟氮苄，稔测限分潮为0 9 ，0 4 ，1 0 帮 1 0 i r t g l 。吴迎春等【1 7 】利用c e ( i v ) 在酸性条件下与氯化可得松发生化学发光发应 测定了注射液中氢化可得松的含量，其检测限为0 0 7 4 9 9 m l 。其他抗生素类的 药物灼化学发光法照表l 。 表1 抗生素药物的化学发光分析 3 2 中枢神经系统药物分析 吗啡类生物碱具有镇痛、中枢抑制、呼吸抑制等作用。b a r n e t t l 2 7 1 等用 k m n 0 4 0 c d 多聚磷酸发光俸系建立了吗啡、东瑟菜、筱噶茸 的c e - c l 方法， 其检测限分别为0 2 5 ，0 2 5 ，和0 5 1 t m o l l 。杨光明【2 8 】簿用l u m i n 0 1 k 3 f e ( c n ) 6 - o h 抑制发光体系测定了扑热息痛的含餐，其检测限为7 , 4 x 1 0 8g m l 。其他中枢神经 系统类药物的分析见表2 。 表2 中枢神经类药物的化学发光分析 3 3 循环系统药物分析 r a g a b 利用1 , 2 一- - ( 3 一氯苯酚) 乙二胺作为柱前衍生试剂，用二一 4 一硝基一( 3 ，6 ，9 一 三噫葵基羧基) 苯酚 草酸- - h 2 0 2 化学发光体系，利用h p l c c l 法同时测定了人 体血浆中的正肾上腺素、肾上腺素和多巴胺。其他循环系统药物的分析见表3 。 3 4 维生素的分析 维生素是人体的六大营养要素之一，是维持生物体正常代谢和机能的必需物 质。常用的维生素分为水溶性和脂溶性两大类。目前利用h p l c c l 柱后发光检 测的维生素大部分为水溶性的维生素。张赕图口6 等利用碱性k 3 f e ( c n ) 6 发光体系 建立了r p h p l c - c l 测定维生素片剂中的b l 和b 2 ，其检测限分别为2 0 x 1 0 4g l 和8 0 x 1 0 4g l 。李峰 3 7 】等利用l u m i m 0 1 k 1 0 4 h 2 0 2 测定了维生素c ，其检测限 为6 0 x l o m o l l 。w e i 3 础等将维生素b 1 2 酸化分解后利用l u m i m o l h 2 0 2 体系间接 测定了维生素b 1 2 的含量。m a 3 9 1 等利用r h 6 g c e ( i v ) 一h 2 s 0 4 测定了l 维生素c ， 其检测限为0 1 p m o l l 。s o n g 4 0 1 和w a n g 4 1 1 等用l u m i n 0 1 k 3 f e ( c n ) 6 o h 一分别测定 了维生素b l 和b 2 ，其检测限分别为6 6 n m o l l 和4 6 p _ g l 。李保新4 2 1 等利用 k 3 f e ( c n ) 6 - n a o h 发光体系，测定了芦丁，其检测限为3 0 x 1 0 4g l 。孙春燕h 列 等采用k m n 0 4 一h 2 s 0 4 一h c h o 测得叶酸的检测限为2 4 1 0 一m o l l 。李利清 4 4 1 等利 用在酸性介质中k m n 0 4 与维生素b 6 发生氧化还原反应测定了维生素b 6 的含量， 其检测限为5 8 1 0 g l 。 表3 循环系统药物的化学发光分析 3 5 其他药物的分析 h p l c c l 在各种药物的分离和检测中运用极为广泛。贺彩霞 5 5 等利用 l u m i n 0 1 k 3 f e ( c n ) 6 o h 一体系建立了测定绿原酸和芸香甘的方法。c u i h u a 【5 6 】等利 用多酚对l u m i n o l k 3 f e ( c n ) 6 o h 体系具有抑制作用建立了分离测定绿原酸、儿 茶酚等7 种酚类药物的方法。a i r i d a sd a p k e v i c i u s 5 7j 等利用l u m i m o l h 2 0 2 一m p l l 发光体系测定了1 6 种抗氧化药物的h p l c c l 法。m a k o t ot s u n o d a 【5 踟等利用过氧 化草酸盐( t d p o ) 一h 2 0 2 体系测定了多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素。其他药物 的分析见表4 。 6 袭4 其他药物的化学发光分析 4 i - i p l c 在农药分析方面的应用 乍力杀虫剂、除草荆、杀真菌裁，农药具有毫效、使豫方便等特点广泛应用 予农业、工业等领域。但与此同时产生的环境问题也日益严重。农药对人和动物 豹海牲 乍爝豁魄较大，缝大秘分农药是尉毒物，它曩j 避入入髂会导致严重懿疾瘸。 由于农药在生产、运输以及农业中的运用不当，农药保存与贮藏过程中与食品混 军l 在一莛，久翻食，鬻含畜农罄兹丧麓导致食镄中毒蕊至瑟亡罄7 j 雒。农药逶这皮获、 呼吸以及肠胃吸收等途径进入人体后对体内胆碱酯酶的活性产生抑制作用，使其 失去催仡水解乙醮耱碱的力，从而使大鬣的乙醯艟碱在体内蓄积，导致腿碱麓 神经处于过度兴套状态而出现中舔症状【6 9 。我国怒世界上农药生产和消费的大 国，要预防和处理农药引越的环境、食品污染等问髓最有效的策略就是尽早尽快 的捡 翼l 农药并提出耀应的对簧。对照，我聪g b 5 1 2 7 8 5 援定：粮食申豹敌敖畏、 对硫磷、马拉硫磷的检测限量分别为o 1 p p m 、0 1p p m 、3p p m ，果蔬分别为0 2p p m 和不缛捡爨。我国静农药帮药兹残罄分耩技零开始予2 0 嫠纪5 0 年代，方法主要 有化学法、比色法和生物测定法。这些方法缺乏专性，灵敏度也不高。气相色 谬于2 0 嫠纪6 0 年代应露予农药和药物残鬣静分繇，大大稳离了农药残蟹貔含量 的检测水平。2 0 世纪8 0 年代以来，高效液相色谱技术运用于这一领域，并广泛 应用于对热不稳定和离子激农药的检测。2 0 世纪9 0 年代农药和药物残留分析技 术日新月异，一些新的方法已进入应用阶段。 在农药残留物的分析中，h p l c 有许多优点。对于热不稳定或易挥发的农药 残留物分析可选择适当的温度 7 0 , 7 1 l 。h p l c 还提供了可供选择的多种检测方法， 如比色法、电位法、荧光法、折光率检测器、紫外可见光度法等。h p l c 可以 对难挥发的化合物进行同时检测。能用h p l c 测定的农药有氨基甲酸酯类、有机 磷类、杀菌剂类和脲类农药等。 4 1 氨基甲酸酯类农药的分析 氨基甲酸酯类农药是一类应用广泛，药效高的农药。由于其对热不稳定性常 常采用高效液相色谱法进行分离和测定。目前，大多数氨基甲酸酯类农药的 h p l c 检测都是采用反相c 1 8 或c 8 柱进行分离，然后利用u v 检测或柱后衍生 荧光法进行检澳l j 7 2 , 7 3 。张洪兰【7 4 1 采用c 1 8 柱提取生物体液中7 种氨基甲酸酯类 农药，采用二极管矩阵检测器和多通道信号检测，得到最低检测限2 0 n g l 。 a r g a u e r l 7 5 1 利用柱后衍生荧光法对2 4 种氨基甲酸酯类农药进行了测定。于文莲口q 等利用该方法测定了谷物中9 种氨基甲酸酯类农药，其最低检测限为5 1 a g k g 。李 恰【7 7 1 等利用u v 检测，测定了乳品中氨基甲酸酯类农药的含量。王建华【78 j 等提 出了在柱前水解电化学安培法测定4 种氨基甲酸酯类农药的方法，其最低检测限 为1 0 p g l 。 4 2 有机磷类农药的分析 有机磷农药中大多数化合物的吸收都在远紫外，因此大多数该类农药都利用气 相色谱法进行分析7 9 1 。对于一些不稳定的有机磷农药，可用h p l c m s 进行分析 测定。据a o a c ( 美国公职分析化学师学会) 报道，近半数的有机磷农药已建立起 高效液相色谱法【8 0 】。k a r e n 8 1 】对采用高效液相色谱法和气相色谱法测定马铃薯中 的有机磷农药进行了对比。j u h l e r 采用固相萃取高效液相色谱法测定了肉中的有 机磷农药8 2 1 。m o l i n a 8 3 1 通过固相萃取提取了环境中的有机磷农药，并用高效液 相色谱进行了测定。白洁洪【8 4 l 等利用c 1 8 柱对3 种有机磷农药进行了测定，3 种有机磷的分离度均达到了1 2 以上。包宏【8 5 】等采用h p l c 测定了西红柿种克线 磷残留量进行了检测。王建宁【8 6 】等利用h p l c c l 法测定了敌敌畏的含量，并对 有关反应的动力学行为和反应机理做了研究。黄光明8 7 1 等利用h p l c c l 法测定 了蔬菜中敌敌畏、甲基对硫磷的含量。 本研究工作的目的与意义 目前，随着人们物质生活水平的提高，食品的营养与安全问题日益得到人们 的关注。营养保健食品的发展成为社会发展的必然趋势。人们过多的食用动物性 食品和精加工的食品导致食品中的营养成分如维生素、纤维素、矿物质等的流失。 其后果直接导致了心血管、糖尿病等重大疾病。另外，随着现代化学工业的发展， 食品也受到污染的威胁，食品中的残毒更易诱发某些人体内的不治之症甚至中毒 死亡。因此，随着科学技术的进步和检测手段的发展，更深入的了解食品中的有 益成分以及有害成分对人民的生活质量的提高具有很大的意义和研究价值。故本 文选择食品中的维生素含量的检测和农药残留量的检测为研究对象。 本文尝试运用高效液相色谱及其与化学发光联用的方法测定食品中的维生 素及农药，期望能提高传统的高效液相色谱法检测同类物质的灵敏度和检测限； 避免采用繁琐的柱前柱后衍生，减少操作步骤，提高分析速度；同时采用非梯度 洗脱，提高了系统的稳定性和灵敏度。这既是本方法建立的意义又是本文期望能 达到的目标。 9 参考文献 【l 】m c k i n l e ywa ，p o p o v i c hdj ，l a y n e 鼍鞠a m 。l a b ，1 9 8 0 ，1 2 ( s ：3 7 ，弱，4 2 ，4 5 2 r o c k l i nrd ，唧c h r o m a t o g r s c i ，1 9 9 1 ，5 4 6 ：1 7 5 - 1 8 7 隧d a s g u p t apk ，疆。c h r o m a t o g r s c i ，1 9 8 9 ，2 7 ：4 2 - 4 8 【4 4 林金明，i m 】化学发光基础理论研究与应用，北京：化学工业出版社，2 0 0 3 【5 】g a r c i a - c a m p a n a am ，b a e y e n sw rg f m i 。c h e m i l u m i n e s c e n c ei na r i a l y t i c a lc h e m i s t r y , n e wy o r k ：m a r c e ld e k k e g2 0 0 1