（植物病理学专业论文）杀线虫担子菌的筛选及其对线虫作用的研究.pdf

杀线虫担子菌的筛选及其对线虫作用的研究 摘要 食线虫担子菌的研究始于1 9 4 1 年d r e e h s l e r 建立毒虫霉属( n e m a t o c t o n u s ) ，该类真菌以 捕食和内寄生的方式作用于线虫，食线虫担子菌生防研究较多的是粗皮侧耳( p l e u r o t u s o s t r e a t u s ) ，而其他担子菌研究相对较少。本论文就部分食线虫担子菌生物防治效果和生物 学特性作了初步探讨，主要取得以下结果： l 收集担子菌1 1 8 株，多为野生担子菌，获得纯培养的有5 4 株。经初步筛选，获得 4 8 h 线虫死亡率在8 0 以上的菌株2 0 株，死亡率达1 0 0 0 的有4 株，分别为毛头鬼伞( c o p r i n u s c o m a t u s ) 、t r i c h a p t u ms p 、粗皮侧耳野生株和l d 5 3 。 2 担子菌对线虫的作用方式研究发现：其作用方式有菌丝束缚，毒索毒杀，毒素毒杀 兼寄生和降解虫体。 3 毛头鬼伞( c c o m a t u s ) 对线虫作用及其生物学特性研究显示；菌丝对腐生线虫和植物 寄生线虫均有显著的毒杀效果，作用于p a n a g r e l l u sr e d i v i v u s2 4 1 1 ，线虫死亡率达1 0 0 ，对 茶树和草坪根际植物寄生线虫作用。4 8 h 的死亡率达1 0 0 ：菌丝可产生许多小球状结构。 4 平菇( p o s t r e x t t u s ) 的盆栽试验结果显示：平菇对番茄根结线虫的发生有一定抑制作 用并对番茄的生长也有一定促进作用不同平菇菌株对线虫的抑制效果稍有不同，菌株 2 2 、5 5 2 6 、常平、平菇和黑平菇对番茄根结抑制率分别是5 6 5 2 、5 2 6 3 、5 2 1 7 、4 9 5 0 和4 7 8 3 ；不同菌量的平菇对番茄根结线虫的抑制效果不同，2 5 0 9 盆、1 2 5 9 盆和6 2 5 9 盆抑制率分别为5 6 1 5 ，5 4 5 5 和3 l 8 1 ，对番茄生长的促进作用也有一定的差别。 5 香菇( l e n t i n u se d o d e s ) x e , i 线虫作用及其生物学特性研究显示：菌丝对线虫的作用效果 不高，p p d a 平板菌丝作用p r e d i v i v u s2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 的线虫相对死亡率分别为5 7 、1 9 8 、3 9 4 ；菌丝在不同培养基上生长速度和茂密程度不同，但都能产生晶体物质，在营养 不良的情况下，菌丝有向线虫生长的趋势，且可以产生菌丝环和菌丝网状结构。液体培养基 培养的菌丝滤液对线虫无作用。盆栽试验显示；香菇对番茄根结线虫的作用效果不好，根结 抑制率仅1 8 1 8 ，但对番茄生长有促进作用。 毛头鬼伞、t r i c h a p t u m 即、t r a m e t e ss p 和g a n o d e r m as p 四种菌的杀线虫作用属首次发 现，迄今尚未见正式报道，其中，毛头鬼伞菌毒力强，易培养。有望开发成为新的高效植物 线虫生物防治剂。 关键词：杀线虫担子菌；毛头鬼伞真菌：生物学特性：杀线虫作用 中图分类号：$ 4 3 2 4 + 5 ；s 4 7 6 r e s e a r c h e so nt h es c r e e n i n go fn e m a t o p h a g o u sb a s i d i o m y c e t e s a n dt h e i re f f e c t so nn e m a t o d e s ( l a b o r a t o r yo f p l a n tp a t h o l o g y , c o l l e g eo f a g r i c u l t u r e ，g n i z h o uu n i v e r s i t y , g u i y a n g5 5 0 0 2 5 ) a b s t r a c t t h er e s e a r c ho nn e r n a t o p h a g o u sb a s i d i o m y c e t e sb e g a nf x o me s t a b l i s h m e n to f n e m a t o c t o n u sb yd r e e h s l e ri n1 9 4 1 也ef u n g ia c to nn e r n a t o d e sw i t hp r e ya n d e n d o p a r a s i t e ，m o r er e s e a r c hi nt h ef i e l dw a so np l e u r o t u so s t r e a t u s ，b u tt h eo t h e r s w e r el e s s t l l i s 也e s i sm a d ep r i m a r ys t u d i e so nt h eb i o c o n t r o le f f e c t sa n db i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c so fs o m en e m a t o p h a g o u sb a s i d i o m y e e t e s ，m a i n l yo b t a i n e dt h e f o l l o w i n gr e s u l t s ： lt h ec o l l e c t e db a s i d i o m y e e t e st o t a l e du pt o11 8s t r a i n s ，m o s ta r ew i l d ，a m o n g t h e m5 4s t r a i n sw e r ea c q u i r e dt op u r ec u l t u r ea n dw e r ep r i m a r i l ys c r e e n e d t h e n a c q u i r e d2 0s t r a i n sw i t hn e m a t o d ed e a t hr a t ea b o v e8 0 o n4 8 h w h i c hc o n t a i n e d4 s t r a i n sw i t hn e m a t o d ed e a t hr a t ea t1 0 0 o n4 8 h t h e ya r er e s p e c t i v e l yc o p r i n u a c o i b a t n s ，t r i c h a p t u ms p ，t h ew i l ds t r a i no fp o s t r e a t u sa n d i 矗5 3 2t h es t u d i e so nf u n c t i o nm e t h o d so f b a s i d i o m y e e t e st on e m a t o d e sd i s c o v e r e d ： t h e i rf u n c t i o nm e t h o d sc o n t a i n e dh y p h a et y i n g , t o x i np o i s o n i n g ，t o x i np o i s o n i n ga n d p a r a s i t i z i n ga n dd e c o m p o s i n gn e m a t o d e s 3t h er e s e a r c h e so nt h ee f f e c t so nn e m a t o d e sa n db i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so f c c o m a t u sm a r f i r e s t e d ：t h eh y p h a eh a dd i s t i n c te f f e c to nb a t h s a p r o g e n e o u s n e m a t o d e sa n dp l a n tp a r a s i t i cn e m a t o d e s t h ed e a t hr a t e so fp a n a g r e l l u sr e d i v i v 驸o n 2 4 ha n dp l a n tn e m a t o d e sw h i c hs e p a r a t e df r o m 也es o i la r o u n dt h er o o to f t h et e at r e e s a n dt h eg r a s si nl a w no n4 8 ha 1 1a m o u n t e dt o1 0 0 ：t l l eh y p h a ec o u l dp r o d u c em a n ya s m a l lg l o b a ls t r u c t u r e 41 1 l er e s u l to f t h ep o tt r i a lo fp o s t r e a t u sm a n i t e s t e d ：p o s t r e a t u sc o u l dr e d u c e t h er o o tk n o t so c c u r r i n go nt o m a t oa n dp r o m o t et h eg r o w t ho ft o m a t oi nac e r t a i n d e g r e e ，t h ee f f e c to fd i f f e r e n ts t r a i nh a dal i t t l ed i s s i m i l a r i t v 1 1 1 ec o n t r o le f f e c t so f 2 2 5 5 2 6 。o f t e np o s t r e a t u sa n dp o s t r e a t u sa n db l a c kp o s t r e a t u sw e r e5 6 5 2 5 2 6 3 ，5 2 1 7 ，4 9 5 0 a n d4 7 8 3 sr e s p e c d v e l y t h ep o s t r e a l u sw i t hd i f f e r e n t q u a n t i t yh a dd i f f e r e n te f f e c to nm e l o i d o g y n es p p ，t h ec o n t r o le f f e c t so f t h e2 5 0 9 p o t ， 1 2 5 9 p o t a n d6 2 5 e 矿p o t w e r e5 6 1 5 5 4 5 5 a n d 3 1 8 1 r e s p e c t i v e l y 5t h er e s e a r c ho nt h ee f f e c to nn e m a t o d e sa n db i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so f l e n t i n u se d o d e ss h o w e d ：t h eh y p h a eh a dn o te f f i c i e n t l ya c to np r e d i v i v u s ，t h e n e m a t o d eo p p o s i t ed e a t hr a t e sw e r e5 7 ，1 9 8 ，3 9 4 r e s p e c t i v e l yo nt h ep p d a f l a t c u l t u r em e d i u mo n2 4h ，4 8h ，a n d7 2 h t h eg r o w i n gs p e e d sa n dt h i c kd e g r e e so ft h e h y p h a et h a tc u l t u r e do nd i f f e r e n tm e d i u m sw e r ed i f f e r e n t a n da l 】c o u l dp r o d u c e 2 c r y s t a lm a t e r i a l s ；t h eh y p h a ea l s oc o u l dp r o d u c eh y p h a el o o pa n dh y p h a en e tf o r m s t r u c t u r ea n dg r o wt o w a r dn e m a t o d e su n d e rt h ec o n d i t i o no f m a l n u t r i t i o n t h ef i l t r a t e o f l e d o d e st h a tc u l t u r e di nl i q u i dm c d i m nh a dn oe r i c c to nt h en e m a t o d e t h ep o t t r i a lm a n i f e s t e dt h a tl e d o d e sh a dl o we f f e c to nm e l o i d o g y n es p p ，t h ec o n t r o le f f c c t w a so n l y1 8 1 8 ，b u tc o u l dp r o m o t et h eg r o w t ho f t o m a t o t h ed i s c o v e r yt h a tt h ef o u rs p e c i e sf u n g io fc o p r i n u sc o m a t u & t r i c h a p t u m s p ，t r a m e t e ss p a n dg a n o d e r m as p h a de f f e c to nn e m a t o d e sh a s n ty e ta p p e a ri n f o r m a lp a p e ru pt on o w ，a n dt h ev i r u l e n c eo fcc o m a t u sw a ss t r o n g ，a n di t se a s y c u l t u r e d ，s oi tw i l lb ep r o b a b l ye x p l o i t e da n db e c o m ea e we f f i c i e n tp r e p a r a t i o no f p h y t o n e m a t o d eb i o c o n t r 0 1 k e y w o r d ：n e m a t o p h a g o u sb a s i d i o m y c e t e s ；c o p r i n u sc o m a t u s ；b i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s ； n e m a t i c i d a le f f c c t 第一章杀线虫担子菌的筛选 l 前言 线虫作为植物的重要病原物之一，据估计全世界每年因线虫危害给粮食和纤维作钧造成 的损失约1 2 ，给蔬菜、花生、烟草和一些果树造成超过2 0 的损失( 刘维志，2 0 0 0 ) 。但因 其具有隐蔽性，多寄主性，顽固性，易传播的特点其种群增长迅速，防治困难( 张克勤， 2 0 0 1 ) 。自从2 0 世纪4 0 年代化学技术的革命后，化学杀虫剂被广泛用于农林业生产，并在害 虫防治中占居重要地位。但由于人们长期过分依赖化学农药，且缺乏生态意识，而造成了严 重的环境污染。单杀线虫剂而言，以往使用的多为高毒化学农药，这些药物对人畜不安全， 对环境污染严重，易使线虫产生抗药性，对有益生物杀伤力强。鉴于此，人们将目光转向了 生物防治。 在自然条件下，捕食线虫真菌是调节线虫密度的主要园子之一( 张克勤，2 0 0 1 ) 。而应 用食线虫菌物对植物寄生线虫进行生物防治的想法萌芽于2 0 世纪3 0 年代末。但进展缓慢。 直至法国的c a y r o l 等( 1 9 7 8 ) 研制出第一个商品制剂r o y a l 3 0 0 ，用于防治d i t y l e n c h u s m y c e l i o p h a g u s ；其后又研制r o y a l 3 5 0 ，防治m e l o i d o g y n es p p ( c a y r o l ，1 9 8 1 ) ；第三个商品制 剂是菲律宾研制的b i o c o n ，用于防治h e l e r o d e r as p p ( t i m m ，1 9 8 7 ) 。这些成功的例子，充 分显示了捕食线虫真菌的广阔应用前景。 食线虫菌物( n e m a t o p h a g o u sf i | l l g i ) 是指寄生、捕食和毒杀线虫的一类微生物包括真 菌界的壶菌门、接合菌门、子囊菌门、担子菌门、半知菌门及假菌界的卵菌门 而食线虫担子菌的研究始于d r e c h s l e r ( 1 9 4 1 ) 建立毒虫霉属( n e m a t o c t o n u s ) ，其菌丝具锁 状联合以捕食和内寄生的方式作用于线虫，在此领域研究较多的是粗皮侧耳( p l e u r o t u s o s t r e a t u s ) 自t h o r n & b a r t o n ( 1 9 8 4 ) 首次报道了粗皮侧耳能够击倒侵染和消解线虫后，向红琼 等( 2 0 0 0 ) 人对粗皮侧耳的杀线虫机理进行了深入的研究，证明该菌为杀主寄生。其室内盆栽 试验结果显示，粗皮侧耳对花生根结线虫的防治效果与化学药荆防效相当( 向红琼，2 0 0 1 ) 。 这一结果说明：食线虫担子菌在植物线虫的生物防治方面具有诱人的潜力。迄今已发现食线 虫担子菌约2 0 个属，近9 0 个种。但是，根据生物学家的观点。菌物与微管植物已知种数的比 例约为4 ：1 - - 6 ：1 ，全球微管植物若以2 5 万种计算挪么菌物估计达1 5 0 万种，而目前仅知其中的 4 6 ( 向红琼等，2 0 0 2 ) 。以此推算还有8 0 0 0 余种食线虫菌物末被发现。因此。有必要进行 广泛的调查和收集已知和未知的担子菌，并对其进行杀线虫测试和系统的研究 贵州地处我国西南部的云责高原。气候温和、雨量充沛，地形复杂，适宜于多种大型 真菌生长繁殖，食用真菌资源十分丰富，毒菌的种类也不少，是我国大型真菌资源丰富的省 区。据张雪岳等对贵州8 6 个县( 市) 的调查研究，单主要食用真菌就有2 9 个科7 2 屑，2 4 1 种， 主要的毒菌有1 9 个科，3 4 个属，7 5 种( 张雪岳。1 9 9 1 ) 。贵州丰富的担子菌资源为筛选高 毒力的杀线虫担子菌提供了有利条件。 故本试验收集担子菌1 1 8 株，并从中筛选出4 株高教菌株。为今后在食线虫担子菌的 线虫生物防治方面的进一步研究提供了基础依据。 4 2 材料和方法 2 1 担子菌的来源及分离 2 1 1 野生担子菌的采集 采集时间：主要集中于2 0 0 4 年4 月2 0 0 4 年1 0 月间每逢雨后的第二天。 采集地：多为贵阳市花溪区周边林地、路旁、腐木桩、枯枝落叶及房檐椽术上，有个别 菌株采于花江镇和荔波县。 2 1 2 其他担子菌的来源 贵州大学植物病理学实验室保存和贵州大学微生物真菌室保存，还有3 株是从菜市场购 得。 2 1 3 担子菌的分离 用蘸有7 5 消毒酒精的脱脂棉球将担子菌子实体表面擦净，将子实体沿其柄中线纵向 分开，用灭菌的镊子夹取- - 4 , 块内部组织置于平板p d a 培养基，( 2 5 1 ) 培养。 2 1 4 培养基及配方 保存及活化培养基：p d a ； 测试培养基：c m a ( 2 0 9 玉米粉2 0 9 琼脂，1 0 0 0 m l 水) 。 2 2 杀线虫担子菌的筛选方法 2 2 1 供试线虫 p a n a g r e l l u sr e d i v i v u s 为一种小杆日腐生线虫。卵胎生，常用作食线虫菌物研究的指示 线虫和诱饵线虫( k e n n e d y , 1 9 7 9 ；k w o k ，1 9 9 2 ；t a 弓a n ，1 9 5 5 ；划维志，1 9 9 5 ) ，用燕麦片培养基 ( 燕麦片l o g 水3 0 r a l ) 培养。由中科院微生物所刘杏忠研究员馈赠 2 2 2 担子菌的培养及杀线虫测定 取备保存菌株于p d a 平板活化后，置于c m a 平板的中央，2 5 c 培养，待菌丝长满平 板，向每皿内加2 0 0 0 条m l 的p r e d i v i v u s 液0 5 m l ，4 8 h 观察，每皿取十个视野，并记录死亡 线虫数。每种处理3 个重复，且以未接茸的相应培养基平板作对照。计算线虫的死亡率( 向 红琼，2 0 0 0 ) 。 3 结果与分析 3 1 担子菌的收集、分离及保存 共收集担子菌1 1 8 株。其中野生担子菌8 9 株( 表1 1 ) ：保存菌株2 6 株( 表j 2 ) ；市场 购得3 株( 表1 2 ) 。经分离和转接获得菌丝纯培养的有5 4 株；5 的福尔马林液浸标本3 8 株；拍摄有担子菌生境及其子实体的菌株有6 7 株( 图1 1 一图1 2 ) 衰1 i 野生担子苗的采集及分离 编号分离时间采集地点分离是否成功有无液浸标本有无照片 0 4 2 2 5 0 4 2 2 5 0 4 2 2 5 0 4 2 2 5 0 4 2 2 5 0 42 2 9 0 42 2 9 校分场 校分场 校分场 校分场 校分场 花溪公园河边 花溪公园河边 盯坩增加n跎3 2 4 z 5 2 6 2 7 3 9 4 0 43 4 2 4 3 4 4 4 5 4 6 4 7 4 8 4 9 5 0 5 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5 6 5 7 l d i l d 2 l d 3 l d 4 l d s i a 6 l d 7 l d 8 l d 9 l d i o l d l l l d l 2 l d l 3 l d l 4 l d l 5 l d l 6 l d l 7 l d l 8 l d l 9 0 4 2 2 9 0 42 2 9 0 4 2 2 9 0 4 2 2 9 0 4 4 1 6 0 4 4 1 6 0 4 _ 4 1 6 0 4 4 1 7 0 4 4 1 7 0 4 4 1 7 0 4 4 1 7 0 4 4 1 7 0 4 4 1 7 0 4 4 2 l 0 4 4 2 1 0 4 4 2 3 0 4 4 2 3 0 4 4 、2 3 0 4 4 2 4 0 4 4 2 4 0 4 4 2 4 0 4 ，4 2 4 0 4 42 4 0 4 5 1 9 0 4 5 1 9 0 4 5 1 9 0 4 5 2 9 0 4 6 1 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 4 6 8 0 46 8 0 4 6 1 7 0 4 6 1 7 0 4 6 1 7 0 46 1 7 0 4 6 1 7 花溪公园麟山 花温公园鹧山 花溪公园辩山 校园 花溪农居房椽上 花溪 花溪 花溪公园 花溪公园 花溪公园 花溪公园 校内 花溪公园 校分场 校分场 校园内 校园内 校园内 花溪公园 花溪公园 花溪公园 校分场 校分场 校分场 校分场 校分场 花溪一青岩公路旁 校园内 校园内 校园内 技园内 校园内 校园内 校园内 校园内 校园内 校园内 花溪公园 花溪公园 花溪公园 花溪公园 花溪公园 6 v v 0 v v v v l v v v 0 v v 0 v v 0 j j j l d 2 00 46 j 7 花溪公园 j l d 2 10 46 1 7 花溪公园 l , d 2 2 0 4 6 1 7花溪公园 l d 2 30 4 6 1 7 花溪公园 l d 2 40 46 1 7 花溪公园 i a 2 50 4 6 2 2 校园腐术 l d 2 60 4 6 2 2 校园腐术 l d 2 70 4 6 2 2 校园木桩 l d 2 80 4 6 2 2 校园土壤中 l d 2 90 4 6 2 2 校园地面松籽上 j l d 3 00 4 6 2 2 校园土壤中 l d 3 10 4 6 2 5 校内茶园 a 3 20 46 2 5 校内茶园j l d 3 3 0 4 6 2 5控内茶园j l d 3 4 0 4 6 2 5 校内茶园 l d 3 50 4 7 6 校园腐木 j l d 3 60 4 , 7 6 校园腐术 l d 3 70 4 7 6 校园腐术 l d 3 80 4 7 6 校园腐木j l d 3 90 4 7 6 校园腐木 l d 4 00 4 7 7 花江腐未 i , d 4 10 4 7 7 花江腐术 j l d 4 20 47 1 1 校园茶树下 l d 4 3 0 4 7 11 校园松树下 l d 4 4 0 4 7 1 i 校园内 i , d 4 50 4 7 1 1 校园内 i , , d 4 60 4 7 1 2 花浜公园树上j i , d 4 70 4 7 1 2 花浜公园树下 i , d 4 80 4 7 1 2 花溪公园括甜上 l d 4 90 4 7 1 2 花溪公园树下 _ z i s 00 4 7 1 2 花溪公园树下 i x l s l 0 4 7 1 2 花溪公园小路旁 l d 5 20 4 7 ，1 2 花溪公园活树杆上j l d 5 30 4 7 1 2 花溪公园地上腐叶 l d 5 4 0 4 7 2 9 校分场 j l d 5 50 48 3 党校校园 l d 5 60 4 8 1 3 荔波县 l d 5 70 4 9 2 7 校园腐术 l d 5 80 4 9 2 7 校园腐术j l d 5 90 4 1 0 1 5 校闻内j 表1 2 其他菌株收集和分离 编号 名称 分离及获取时间来源纯培茬星查盛塾 平9 6 常平 兰平 无孢 5 1 8 4 凤8 3 0 1 l 2 6 c r 0 4 杂1 7 大杂 金针菇1 9 协优 猴头 灵芝 太球盖苗 灰树花 黑平菇 1 0 9 杂交1 7 c 8 9 5 5 2 6 广温8 申香 苏香 市售香菇 市售金针菇 市售平菇 白侧耳 毛头鬼伞 撞病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 檀病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 檀病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 植病教研室 檀病教研室 花溪菜市场 花溪菜市场 花溟菜市场 植病教研室 微生物真菌室 3 2 杀线虫担子菌的筛选 用纯培养的5 4 株担子菌测定对只r e d i v s v u s 作用效果结果表明：不同的担子菌对线虫的 作用效果不同。 测试的担子菌中有1 5 株为侧耳属( p l e u r o t u s ) ，均具有毒素球，对线虫具有较高的作用 效果，4 8 h 线虫死亡率均在8 0 以上，菌号为2 、5 、9 、1 0 、1 2 、1 7 、2 2 、3 0 、3 1 、3 2 、3 3 、 3 4 、3 5 、3 6 和5 8 处理线虫死亡率分别为8 9 1 1 、8 4 6 8 、9 5 4 5 、9 1 4 5 、8 4 1 l 、 9 9 、1 0 0 、b 2 7 3 、9 7 、9 5 、9 4 1 3 、9 6 、9 3 0 5 和9 7 5 0 。 试验结果还说明，侧耳属的不同种类或菌株问对线虫的毒力有所不同。菌株2 2 处理线 虫4 8 h 的效果达1 0 0 ，而菌株3 l 对线虫的处理效果为8 2 7 3 。 所采集的野生担子菌多数菌株对线虫的作用效果较差甚至无作用，仅有1 7 、2 2 、2 4 、 8 v v v v v v 0 v 寸v v v 筋嚣西拍巧筋巧”巧”笱巧巧撕嬲4 4 4 4 4 4坫博，笛4埘埘猫埘秘埘播猫埘!詈猫蟛埘撕!詈：尝!晏蟠咐脾舛舛咐似舛*舛舛舛舛舛舛僻舛舛舛舛舛舛舛 0 0 0 0 0 ，0 0 m n 坨n h垢埔n跎拈孔弘”鸲黯四碍始 3 9 、4 7 、l d 2 2 、l d 5 3 和l d 5 6 等8 株的杀线虫效果较好，处理线虫4 8 h 的死亡率分别为： 9 9 、1 0 0 、1 0 0 、7 5 9 6 、9 7 4 8 、7 6 5 8 、 1 0 0 和9 0 9 1 ( i _ a 5 6 为束缚率) 。 所有测试菌株中4 8 h 线虫死亡率达1 0 0 的共有4 株，分别是菌株2 2 、2 4 、l d 5 3 和毛 头鬼伞( 表：1 3 ) 。 表1 3 杀线虫担子菌的筛选结果 菌株编号名称或类别接菌日期接虫日期4 8 h 死亡率( )毒素球备注 2常平0 4 6 80 4 6 1 68 9 1 1 4 55 1 8 40 4 6 80 4 6 2 18 4 6 8 9 杂1 70 4 6 80 4 6 1 69 5 4 5 4 1 0大杂0 4 6 80 4 6 1 69 1 4 5 l l金针菇1 90 4 6 80 4 6 1 61 9 6 1 2协优0 4 - 6 80 4 6 1 68 4 1 14 1 3 猴头0 4 6 8 0 4 7 2 08 9 5 菌丝生长不好 1 5 大球盖菌0 4 6 - 80 4 6 2 l3 6 0 1 6 灰树花0 4 6 8 0 4 7 2 03 7 8 菌丝未生长 3 l黑平菇0 4 6 80 4 6 2 18 2 7 34 3 21 0 90 4 6 80 4 6 1 59 7 o o 3 3 杂交1 70 4 6 80 4 6 1 59 5 0 0 3 4c 8 90 4 680 4 ，6 1 59 4 1 3 3 55 5 2 60 4 6 8 0 4 6 1 69 6 0 0 j 3 6 广温8 0 4 6 8 0 4 6 ，1 59 3 0 5 4 3 7 申香 0 4 7 4 0 4 7 1 31 5 6 5 3 8 苏香 0 4 7 4 0 4 ，7 ，1 31 8 ，3 8 生长正常 5 8 自侧耳0 4 6 2 70 4 7 49 7 5 0 5 9 毛头鬼伞0 4 7 40 4 7 1 2 1 0 0 0 0 线虫僵死，且变色 1 7侧耳属0 4 6 80 4 6 1 6 9 9 0 0 2 2 野生平菇0 4 6 80 4 6 1 61 0 0 0 04 2 4 t r i c h a p t u m 印0 4 6 8 0 4 6 2 11 0 0 0 0 可产生星状体 2 8 市售香菇0 4 6 80 4 6 2 61 0 0 8 3 0 市售平菇0 4 6 80 4 6 1 58 3 5 4 3 9持鉴定0 4 ，6 8 0 4 6 2 17 5 9 6 4 l 待鉴定0 4 6 80 4 6 2 11 9 5 4 3 金针菇0 4 6 80 4 6 1 5 3 1 5 4 7 嚣口舢”盯0 4 6 80 4 6 1 69 7 4 8 4 9 灵芝0 4 6 80 4 7 2 03 6 8 菌丝生长差 5 4 多孔菌科0 4 680 4 7 2 03 + 7 8 菌丝生长差 5 5 多孔菌科0 4 6 80 4 7 2 03 7 8 菌丝未长 5 6 漏斗棱孔菌0 4 6 80 4 7 2 03 8 2 5 7 裂褶菌0 4 680 4 7 43 9 5 l d ! 待鉴定0 4 6 80 4 7 44 0 0 9 l d 2 l d 4 l d l 5 l d 2 0 l d 2 2 l d 2 3 l d 2 4 l d 2 6 l d 3 6 l d 3 8 l d 4 0 l d 4 l l d 4 4 l d 5 0 l d 5 l l d 5 3 l d 5 4 l d 5 6 l d 5 7 l d 5 8 待鉴定 待鉴定 待鉴定 g a n o d e r m as p 待鉴定 待鉴定 特鉴定 待鉴定 待鉴定 待鉴定 待鉴定 待鉴定 待鉴定 待鉴定 特鉴定 特鉴定 持鉴定 待鉴定 马勃属 特鉴定 0 4 7 4 0 4 7 4 0 4 7 4 0 47 4 0 47 4 0 4 7 4 0 4 7 4 0 47 4 0 4 8 5 0 4 8 5 0 4 8 5 0 4 8 5 0 48 ，5 0 4 85 0 4 8 5 0 4 8 5 0 4 85 0 4 8 5 0 4 8 5 0 4 8 5 c k 夏丐1 碌丽甄蕊虱两丽i 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 7 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 1 3 0 48 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 1 5 0 4 8 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 1 3 0 4 8 ，2 3 0 4 8 1 3 3 7 0 4 7 5 7 1 6 3 2 1 4 7 6 5 8 3 6 5 1 2 5 6 8 0 5 2 4 ，5 7 4 9 0 5 3 5 8 9 0 7 5 7 6 3 5 6 1 0 4 5 1 0 0 0 0 4 5 0 9 0 9 l 3 8 5 4 3 8 3 5 7 生长较好 有束缚菌丝结构生成 菌丝生长较好 大龄虫分解 菌丝生长好 菌丝生长良好 宣生菌核 菌丝束缚线虫率 4 结论与讨论 4 1 本实验筛选出毛头鬼伞、t r i c h a p t u ms p 和t r a m e t e ss p 三种担子菌有极好的杀线虫效果， g a n o d e r m as p 对线虫也有一定的作用。以上四种担子菌的杀线虫作用均属首次发现，至今 尚未见其它正式报道，而2 、5 、9 、1 0 、1 2 、1 7 、2 2 、3 0 、3 1 、3 2 、3 3 、3 4 、3 5 、3 6 和5 8 号菌均属侧耳属，已有较多的研究；2 8 、3 7 和3 8 为香菇菌，其对线虫有作用，也曾有报道 ( 向红琼2 0 0 2 ) ，1 3 为猴头，其对线虫有作用已经报道( 李国红等，2 0 0 1 ) ，其他菌株因未 能鉴定无法确定前人是否有过研究 4 2 野生担子菌的分离实验，仅用了p d a 作为分离培养基，分离的成功率低，有可能会丢 失一些有用的杀线虫菌源：鉴定培养基仅使用了c m a ，有些已获的纯培养的菌株在其上 生长不好，甚至不生长，这也有可能丢失一些杀线虫菌源。 o 1 前言 第二章几种担子菌对线虫的作用方式 食真菌线虫可以吞食真菌而某些真菌则通过营养菌丝形成捕食器官捕食线虫，有些通过 内寄生方式消解线虫，有些通过产生毒素毒杀线虫等方式获得生存( 董锦艳，2 0 0 1 ) 。它们 以其独特的食线虫机制，成为线虫生物防治的主要来源之一。不同的食线虫菌物对线虫具有 不同的作用方式，对食线虫菌物作用方式的研究，是食线虫菌物用于生物防治有害线虫的基 础，可以为增强真菌捕食线虫能力提供必要的科学依据故本文作者就筛选到的几株担子菌 菌物对p a n a g r i e l l u sr e d i v i v u s 线虫的作用方式做了初步的研究。 2 材料与方法 2 1 供试菌株 2 2 号菌是从采于贵阳市花溪区花溪公园河边立枯树上的子实体分离而获得； 2 4 号菌是从采于贵阳市花溪区花溪公园麟山立枯木上的子实体分离而获得( 图2 1 ) ： 4 7 号苗是采于贵州大学农学院校园内的断木桩上的子实体分离而获得( 图2 2 ) ； l d 2 0 是采于贵阳市花溪区花溪公园活树上的子实体分离而获得( 图2 3 ) ； l d 5 3 是采于贵阳市花溪区花溪公园落叶上的菌丝分离而获得( 图2 4 ) ； l d 5 6 是从菜市场耍得子实体分离而获得。 2 2 供试线虫 pr e d i v i v u s 2 3 培养基 测试培养基：c m a ：活化培养基：p d a 。 2 4 作用方式 在活化的2 2 号、2 4 号、4 7 号、l d 2 0 、l d 5 3 、和l d 5 6 平板菌丝的菌落边缘用内径6 m m 打孔器打取菌圆片，接入直径7 c m c m a 平板中央，( 2 5 1 ) 培养7 一1 5 d ，加入约1 0 0 0 条只r e d i v i v u s 活虫连续观察。 3 结果与分析 3 1 2 2 号菌对只r e d i v i v u s 的作用方式 2 2 号菌为一株粗皮侧耳野生菌，成熟菌丝体能产生大量与主干菌丝近垂直的分泌细胞 其顶端产生毒素球( 图2 5 ) ，毒素球随培养时间增长而增多，毒素球易溶于水菌落边缘的幼 龄菌丝不产生毒素球。将约1 0 0 0 条产r e d i v i v u s 线虫加入到菌丝平板上最初线虫活跃地穿 行于菌丝间，并与毒素球接触，随着穿行时间的增长，毒素球大量消失线虫活力减弱， 2 4 h 线虫被击倒，最终停止不动，随后菌丝侵入虫体，2 4 h 后线虫开始被分解( 图2 6 ) 有的局部解体并伴有从虫体长出具毒素球的菌丝体现象。4 8 h 后线虫变形、解体并长出大量 的菌丝体。 3 22 4 号菌对pr e d i v i v u s 的作用方式 2 4 号菌为t r i c h a p t u ms p ，其子实体正面有灰白相问的同心环纹。该菌的分离菌丝在p d a 上生长茂盛，且在低温4 c t 仍能生长，其斜面保存培养基上菌落难以分离。c m a 平板上 培养的菌丝，在生长后期，上可产生星形物( 图2 7 ) ，且发出非常难闻的气味。向其中加入 pr e d i v i v u s2 d 后，线虫全部死亡且开始分解，最终线虫被分解为许多小泡( 图2 8 ) ，轮廓 模糊。 3 34 7 号菌对只r e d i v i v u s 的作用方式 4 7 号菌是采自花溪公园腐木上，属多孔菌科的栓孔菌( t r a m e t e ss p ) 。该菌的分离菌丝 在p d a 上生长茂盛，且在低温4 c 下仍能生长其斜面保存培养基上菌落难以分离。c m a 平板上培养的菌丝生长稀疏，待菌丝长满平板，向其中加入pr e d i v i v u s2 d ，线虫开始分解 且线虫严重畸形( 圈2 9 至图2 1 2 ) 。菌丝可以以线虫为食源，面生长出较为茂盛的菌丝。 3 4l d 2 0 对只r e d i v i v u s 的作用方式 l d 2 0 是灵芝属( g a n o d e r m a ) 的一种，生长于活立树上。该菌菌丝在c m a 上生长较好， 加入pr e d i v i v u s 液1 d 后，有的线虫被菌丝产生的收缩环缠住，有些紧紧的勒住线虫( 图2 1 3 至图2 1 6 ) ，将线虫束缚在以菌环为基点做来回的扭动，线虫越扭动，收缩环勒的越紧。有 的一条线虫上面有三个束缚环( 图2 1 3 ) 或两个束缚环( 图2 1 5 ) 让线虫的括动更为有限。 3 5l d 5 3 对pr e d i v i v u s 的作用方式 i a 5 3 是一未经鉴定的菌株，该菌生长方式特殊。在( 2 5 4 - i ) 温箱中的p d a 平板上 培养，接菌8 d 后，菌丝长满培养皿。在平板的中央及其周边产生乳白色的茸毡状菌丝突起 ，开始形成菌核( 图2 1 7 ) 其上很快生出透明的液球，即菌核形成初期( 图2 1 8 ) ，待菌在 p d a 平板生长1 4 d ，突起处长出2 - - 4 m m 黑色的菌核( 图2 1 9 ) 。c 姒培养l d 5 3 。菌丝生长稀 疏，待菌丝长满培养皿，加入只r e d i v i v u s 液2 d 后，线虫披分解( 图2 ，2 0 ) 3 6l d 5 6 对置r e d i v i v u s 的作用方式 l d 5 6 的菌丝在p d a 上生长茂盛，菌丝有明显的锁状联合( 图2 , 2 1 )