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文档简介

免疫酶斑点试验,Dot-ELISA,1,实验目的,2.了解免疫酶斑点技术的用途。,1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法；,2,免疫斑点酶技术的原理,硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。,将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。,3,包被未知抗原,NC,酶标抗体,底物,直接法Dot-ELISA,4,包被抗原,NC,待检抗体,酶标抗体,底物,间接法Dot-ELISA,5,免疫酶斑点技术的特点,1）特异性强，假阳性较少；2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯，检出抗原的敏感性较常规ELISA法高68倍；3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；4）检测结果可长期保存，便于复查。,6,1.小组为单位,实验方法及注意事项,2.膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上,3.酶标抗体放置在冰箱，使用前取出,4.底物临用前配置,5.震荡器全班一台,调整好频率后不要乱动,7,方法(直接法),1.取硝酸纤维素膜片,用笔做好标记方便加样;,2.将稀释的抗原液2-5l加于相应格内,室温自然干燥!,3.将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟;,4.用洗涤液震荡洗涤3次,每次1分钟,吸干;,5.将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟,吸干;,6.将膜片放入洗涤液中,震荡涤洗3次1分钟,吸干;,7.将膜片放入底物液中,震荡15分钟左右观察。,明显棕色斑点者为阳性,8,实验结果,9,免疫酶斑点技术的应用,1.微量抗原的检查;,2
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