鼠双微基因2和多肿瘤抑制基因P16在大肠癌中的表达及临床意义

1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 论 著鼠 双 微 基 因 2 和 多 肿 瘤 抑 制 基 因 P16 在大 肠 癌 中 的 表 达 及 临 床 意 义刘 志 勇 ,欧 阳 忠【 摘 要 】 目 的 探 讨 鼠 双 微 基 因 2 (murine double mimute 2 ,MDM2)和 多 肿 瘤 抑 制 基 因 P16 在 大 肠 癌 中 的 表 达及 临 床 意 义 。 方 法 纳 入 2006 年 10 月 2007 年 3 月 收 治 的 67 例 大 肠 癌 患 者 ,另 取 距 肿 瘤 10 cm 以 上 癌 旁 组 织 30例 、 腺 瘤 组 织 20 例 、 正 常 黏 膜 20 例 作 为 对 照 。 采 用 免 疫 组 织 化 学 链 霉 菌 抗 生 物 素 蛋 白 2过 氧 化 物 酶 ( SP) 法 检 测 肠 黏膜 MDM2 和 P16 基 因 蛋 白 表 达 。 结 果 MDM2 在 大 肠 癌 组 织 中 的 阳 性 表 达 率 为 7116 % (48/ 67) ,明 显 高 于 结 肠 腺瘤 组 织 、 癌 旁 组 织 和 正 常 黏 膜 ( P 0105) 。 P16 在 大 肠 癌 组 织 中 的 阳 性 表 达 率 为 3818 % (26/ 67) ,与 结 肠 腺 瘤 组 织7510 % ,癌 旁 组 织 8313 % ,正 常 黏 膜 组 织 9010 %比 较 ,差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P 0105) 。 P16 在 不 同 分 化 程 度 中 表 达 差 异 有 统 计 学 意 义 ( P 0105) ,MDM2和 P16 在 不 同 Dukes 分 期 中 ,有 无 淋 巴 结 转 移 之 间 表 达 差 异 有 统 计 学 意 义 ( P 0105) 。 在 大 肠 癌 中 MDM2 蛋 白 与 P16 蛋 白 表 达 无 明 显 相 关性 ( P 0105) 。 结 论 MDM2 和 P16 的 异 常 表 达 与 大 肠 癌 的 发 生 、 发 展 有 关 ,联 合 检 测 MDM2 和 P16 对 大 肠 癌 的 临床 诊 断 、 治 疗 和 判 断 预 后 有 实 际 意 义 。【 关 键 词 】 大 肠 癌 ；鼠 双 微 基 因 2 ； P16 ；免 疫 组 织 化 学【 中 图 分 类 号 】 R574. 6 【 文 献 标 志 码 】 AExpression of Murine Double Minute Gene 2 and Multiple Tumor Suppressor P16 Gene in Colorectal Carcinoma and ItsClinical Signif icance L IU Zhi2yong , OU YA N G Zhong . Department of Galactop hore S urgery , the Fi rst A f f iliatedHos pital of Gannan Medical College , Ganz hou , J iang xi 341100 , P. R. ChinaCorres ponding author : OU YA N G Zhong , E2mail :oyz l yl 163. com【 Abstract】 Objective To explore expression of murine double minute gene 2 (MDM2) and multiple tumor sup2pressor P16 gene in colorectal cancer and its clinical significance. Methods The expression of MDM2 and P16 in 67specimens of colorectal carcinoma ,30 specimens of lateral tissue of carcinoma ,20 specimens of colonic adenoma ,and 20specimens of normal colonic tissue were detected by SP immunohistochemistry from october 2006 to march 2007. Re2sults The positive expression rate of MDM2 in the tissues of colorectal carcinoma was 7116 % (48/ 67) , which washigher than that in lateral tissue of carcinoma , in the tissues of colonic adenoma ,and in the normal colonic tissue ( P 0105) . The positive expression rate of P16 in the tissues of colorectal carcinoma was 38. 8 % (26/ 67) , which was lowerthan 7510 % in the tissues of colonic adenoma , 8313 % in lateral tissue of carcinoma , and 9010 % in the normal colonictissue ( P 0105) . The positive expression rates of P16 in variant differentiated colorectal carcinoma had sig2nificant difference ( P 0105) . There was significant difference among colonic adenoma in different Dukes staginggroup s ,associated with lymphatic metastasis and without lymphatic metastasis ( P 0105) . In the tissues of color2ectal carcinoma ,the positive expression of MDM2 and P16 had no obvious correlation ( P 0105) . Conclusion Thevariation of MDM2 and P16 expression in colorectal carcinoma contribute to the occurrence and development of the car2cinoma. United detection of MDM2 and P16 can be an important index to treatment ,diagnose , and prognosis of color2ectal carcinoma.【 Key words】 Colorectal carcinoma ；Murine double minute gene 2 ； P16 ； Immunohistochemistry【 作 者 单 位 】 赣 南 医 学 院 第 一 附 属 医 院 乳 腺 外 科 (江 西 赣 州 ,341100)【 作 者 简 介 】 刘 志 勇 (1980 - ) ,男 ,江 西 赣 州 人 ,主 治 医 师 ,硕 士 ,E2mail :barton123321 163. com【 通 讯 作 者 】 欧 阳 忠 ,E2mail :oyzlyl 163. com988华 西 医 学 2010 ,25 (5) West China Medical Journal ,Vol. 25 ,No. 5 May. 2010 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 大 肠 癌 包 括 结 肠 癌 和 直 肠 癌 ,是 常 见 的 消 化 道 恶性 肿 瘤 之 一 。 在 消 化 道 肿 瘤 中 已 仅 次 于 胃 癌 ,位 居 第二 。 近 年 来 ,分 子 生 物 学 研 究 显 示 大 肠 癌 的 发 生 涉 及多 种 癌 基 因 的 激 活 及 抑 癌 基 因 的 失 活 ,在 肿 瘤 克 隆 形成 过 程 中 ,基 因 改 变 早 于 形 态 改 变 ,对 这 些 基 因 及 其 产物 进 行 检 查 ,将 有 助 于 早 期 诊 断 。 鼠 双 微 基 因 2 ( mu2rine double mimute 2 , MDM2) 是 一 个 高 度 扩 增 的 基因 。 抑 癌 基 因 P16 又 叫 M TS 基 因 ,是 一 种 细 胞 周 期中 的 基 本 基 因 ,直 接 参 予 细 胞 周 期 的 调 控 ,负 调 节 细 胞增 生 及 分 裂 ,一 旦 缺 失 、 突 变 ,则 会 导 致 细 胞 恶 性 增 生 ,导 致 恶 性 肿 瘤 发 生 。 原 癌 基 因 MDM2 的 激 活 、 抑 癌 基因 P16 的 失 活 与 多 种 肿 瘤 的 发 生 、 发 展 有 关 ,如 恶 性胶 质 瘤 、 肺 癌 、 膀 胱 癌 、 肝 癌 、 胰 腺 癌 等 ,均 可 见 到MDM2 基 因 扩 增 或 过 度 表 达 和 (或 ) P16 基 因 表 达 缺失 或 下 调 。 本 文 应 用 免 疫 组 织 化 学 链 霉 菌 抗 生 物 素 蛋白 过 氧 化 物 酶 ( SP) 法 检 测 了 MDM2 与 P16 在 大 肠癌 中 的 表 达 ,并 探 讨 了 其 对 大 肠 癌 的 诊 断 、 治 疗 和 判 断预 后 的 临 床 意 义 。1 资 料 与 方 法1. 1 一 般 资 料2006 年 10 月 2007 年 3 月 本 院 收 治 67 例 大 肠癌 患 者 。 其 中 男 38 例 ,女 29 例 。 年 龄 25 76 岁 , 50 岁 的 25 例 , 50 岁 的 42 例 。 患 者 均 经 手 术 及 病 理证 实 ,未 经 放 化 疗 等 抗 肿 瘤 治 疗 。 分 化 程 度 :高 分 化12 例 ,中 分 化 32 例 ,低 分 化 23 例 。 临 床 分 期 :DukesA 期 6 例 ,B 期 32 例 ,C 期 24 例 ,D 期 5 例 。 有 淋 巴转 移 38 例 ,无 淋 巴 转 移 29 例 。 另 取 距 肿 瘤 10 cm 以上 癌 旁 组 织 30 例 ,腺 瘤 组 织 20 例 ,正 常 黏 膜 20 例 作为 对 照 。1. 2 试 剂抗 MDM2 和 P16 鼠 抗 人 的 单 克 隆 抗 体 购 自 美 国NeoMarkers 公 司 ；广 谱 型 SP 试 剂 盒 、 DAB 染 色 剂 购自 福 建 迈 新 生 物 技 术 公 司 。1. 3 方 法所 有 腊 块 标 本 行 4 m 厚 连 续 切 片 。 SP 法 免 疫 组织 化 学 染 色 按 试 剂 盒 说 明 操 作 ,磷 酸 盐 缓 冲 液 ( PBS)代 替 一 抗 作 阴 性 对 照 。 用 己 知 阳 性 片 作 阳 性 对 照 。MDM2 以 肿 瘤 细 胞 核 呈 棕 黄 色 为 阳 性 着 色 , P16 以 肿瘤 细 胞 核 和 细 胞 浆 呈 棕 黄 色 为 阳 性 着 色 。 在 400 倍 显微 镜 下 计 数 至 少 5 个 随 机 视 野 ,取 平 均 值 , MDM2、P16 肿 瘤 细 胞 阳 性 数 510 %为 阴 性 , 510 %为 阳 性 。对 比 分 析 不 同 年 龄 、 性 别 、 组 织 、 分 化 强 度 、 肿 瘤 分 期 和有 无 淋 巴 转 移 患 者 大 肠 癌 中 MDM2 和 P16 基 因 蛋 白的 表 达 。1. 4 统 计 学 方 法采 用 SPSS10. 0 软 件 分 析 ,数 据 统 计 采 用 2 检 验和 秩 和 检 验 , P 值 0105) 。大 肠 癌 组 织 中 MDM2 基 因 蛋 白 的 阳 性 表 达 率 为7116 % ,在 腺 瘤 组 织 、 癌 旁 组 织 、 正 常 黏 膜 中 均 无 表 达 ,差 异 有 统 计 学 意 义 ( P 0105) 。 大 肠 癌 中 P16 基 因 蛋白 的 阳 性 表 达 率 为 3818 % ,与 腺 瘤 组 织 (7510 %) 、 癌旁 组 织 (8313 %) 、 正 常 黏 膜 组 织 (9010 %) 之 间 差 异 有统 计 学 意 义 ( P 0105) 。 P16 基 因 蛋 白在 不 同 分 化 程 度 中 表 达 差 异 有 统 计 学 意 义 ( P 0105) ,且 随 着 肿 瘤 的 分 化 程 度 减 低 , P16 基 因 蛋 白 阳性 表 达 率 减 低 ,且 高 、 中 、 低 分 化 组 两 两 比 较 ,差 异 均 有统 计 学 意 义 ( P 01 05) 。 MDM2 基 因 蛋 白 随 着 分 期 级别 的 提 高 ,阳 性 表 达 率 明 显 增 加 ( P 0105) 。 P16 基因 蛋 白 随 着 分 期 级 别 的 提 高 ,阳 性 表 达 率 明 显 降 低( P 0105) 。 见 表 1。MDM2 基 因 蛋 白 在 有 淋 巴 转 移 者 中 的 阳 性 率 为8412 % ,明 显 高 于 在 无 淋 巴 转 移 者 中 的 阳 性 率 5512 %( P 0105) 。 P16 基 因 蛋 白 在 有 淋 巴 转 移 者 中 的 阳 性率 为 2111 % ,明 显 低 于 在 无 淋 巴 转 移 者 中 的 阳 性 率6211 %( P 0105) 。3 讨 论癌 基 因 MDM2 是 Oliner 等 1 在 1992 年 用 小 鼠MDM2cDNA 为 探 针 ,从 人 的 基 因 库 中 筛 选 得 到 的 一个 同 源 基 因 ,即 人 的 MDM2 基 因 ,已 经 用 杂 交 分 析 的方 法 将 其 定 位 在 染 色 体 12q13 14 上 ,已 在 多 种 肿 瘤中 发 现 其 突 变 与 扩 增 。 研 究 表 明 MDM2 是 P53 负 反馈 调 节 环 中 的 重 要 因 子 。 当 MDM2 过 度 表 达 时 阻 断P53 蛋 白 的 转 录 激 活 ,P53 功 能 抑 制 或 失 活 ,导 致 细 胞异 常 增 生 ,促 进 细 胞 癌 变 。 另 一 方 面 ,由 于 MDM2 的活 性 表 达 ,即 使 是 低 水 平 MDM2 的 表 达 ,也 将 会 引 起细 胞 成 瘤 性 的 增 强 2 。 文 献 报 道 ,MDM2 基 因 在 恶 性肿 瘤 中 有 明 显 的 扩 增 与 表 达 325 。 本 研 究 结 果 显 示 ,098 West China Medical Journal ,Vol. 25 ,No. 5 May. 2010 华 西 医 学 2010 ,25 (5) 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 表 1 MDM2 和 P16 基 因 蛋 白 表 达 与 大 肠 癌 患 者 临 床 病 理 特 征 的 关 系特 征 MDM2例 数 阳 性 (例 ) 阳 性 率 ( %) 2 值 P值 P16阳 性 (例 ) 阳 性 率 ( %) 2 值 P值性 别 男 38 28 73. 7 0. 18 0. 05 16 42. 1 0. 402 0. 05 女 29 20 69. 0 10 34. 5年 龄 (岁 ) 50 25 17 68. 0 0. 69 0. 05 11 44. 0 0. 453 0. 05 50 42 31 73. 8 15 35. 7不 同 组 织 大 肠 癌 67 48 71. 6 26 38. 8 腺 瘤 组 织 20 0 0 17. 42 0. 05 15 75. 0 28. 870 0. 05 14 43. 8 9. 816 0. 05 低 分 化 23 20 87. 0 3 13. 0肿 瘤 分 期 A 5 2 40. 0 4 80. 0 B 24 15 62. 5 4. 97 0. 05 13 54. 2 5. 292 0. 05 C 32 25 78. 1 8 25. 0 D 6 6 100. 0 1 16. 7淋 巴 转 移 有 38 32 84. 2 6. 82 0. 05 8 21. 1 11. 650 0. 05 无 29 16 55. 2 18 62. 1MDM2 基 因 蛋 白 在 大 肠 癌 中 高 表 达 , 阳 性 率 为7116 % ,与 黄 照 权 等 6 和 熊 首 先 等 7 的 研 究 结 果 基 本一 致 ,明 显 高 于 腺 瘤 组 织 、 癌 旁 组 织 、 正 常 黏 膜 组 织 ,说明 大 肠 癌 的 发 生 与 MDM2 高 表 达 有 关 。 另 外 ,Abdel2Fattah 等 8 研 究 发 现 ,MDM2 基 因 蛋 白 在 大 肠 癌 组 织中 高 表 达 ,MDM2 基 因 蛋 白 在 大 肠 癌 组 织 中 高 表 达 是大 肠 癌 发 生 的 一 个 早 期 事 件 。 本 研 究 发 现 ,MDM2 基因 蛋 白 随 着 Dukes 分 期 级 别 的 升 高 ,MDM2 阳 性 表 达率 增 加 ,而 且 MDM2 在 有 淋 巴 转 移 的 阳 性 率 明 显 高 于无 淋 巴 转 移 的 阳 性 率 ,说 明 MDM2 的 高 表 达 与 大 肠 癌的 浸 润 、 转 移 有 关 。 因 此 ,不 能 单 纯 说 MDM2 基 因 蛋白 在 大 肠 癌 组 织 中 高 表 达 是 大 肠 癌 发 生 的 一 个 早 期 事件 。 而 是 进 一 步 说 明 MDM2 基 因 蛋 白 在 大 肠 癌 组 织中 的 高 表 达 与 大 肠 癌 的 的 发 生 、 发 展 有 关 。 近 年 来 ,随着 基 因 诊 断 技 术 的 不 断 进 步 ,基 因 治 疗 也 成 功 应 用 于肿 瘤 的 治 疗 , MDM22siRNA 作 为 一 种 基 因 特 异 治 疗药 物 ,可 通 过 特 定 的 MDM2 下 调 ,诱 导 细 胞 周 期 停 止和 凋 亡 ,抑 制 体 内 肿 瘤 生 长 。 此 外 ,MDM22siRNA 还能 协 同 增 加 DNA 损 伤 药 的 抗 癌 活 性 。 因 此 ,MDM22siRNA 完 全 可 作 为 一 个 有 前 景 的 基 因 特 异 药 物 用 于人 类 癌 症 的 治 疗 9 ,10 。抑 癌 基 因 P16 是 1994 年 Kamb 等 11 发 现 的 新 抗癌 基 因 ,定 位 于 9 号 染 色 体 短 臂 2 区 1 带 (9p21)上 ,编码 蛋 白 能 在 G1 期 竞 争 性 抑 制 CyclinD 与 CD K4 结合 ,从 而 阻 止 细 胞 G1 期 向 S 期 转 化 ,对 细 胞 生 长 起 负调 控 作 用 。 该 期 缺 失 或 突 变 都 可 导 致 细 胞 的 恶 性 生长 12 。 谢 敏 等 13 在 研 究 中 发 现 ,P16 蛋 白 在 大 肠 癌 组织 和 大 肠 正 常 组 织 中 的 表 达 分 别 为 2713 %和 6316 % ,且 随 着 大 肠 癌 组 织 恶 性 程 度 的 上 升 而 降 低 。 表 明 P16蛋 白 表 达 的 缺 失 与 大 肠 癌 的 发 生 及 恶 性 程 度 有 关 。 本研 究 中 P16 在 大 肠 癌 中 阳 性 表 达 率 为 3818 % ,明 显 低于 腺 瘤 组 织 、 癌 旁 组 织 、 正 常 黏 膜 组 织 ,说 明 大 肠 癌 的发 生 与 P16 基 因 低 表 达 有 关 。 李 玉 军 等 14 在 研 究 中发 现 大 肠 癌 P16 蛋 白 表 达 阳 性 率 为 6010 % ,与 癌 组 织分 化 程 度 成 正 相 关 ,与 癌 组 织 浸 润 深 度 和 Dukes 分 期成 负 相 关 。 无 区 域 淋 巴 结 转 移 者 的 P16 蛋 白 表 达 阳性 率 为 761 9 % ,伴 区 域 淋 巴 结 或 远 处 器 官 转 移 者 为5010 % ,二 者 差 异 有 统 计 学 意 义 。 Reed 等 15 认 为 ,P16 蛋 白 缺 失 为 肿 瘤 细 胞 的 浸 润 和 转 移 提 供 了 选 择 性生 长 优 势 。 我 们 发 现 ,大 肠 癌 P16 蛋 白 表 达 随 着Dukes 分 期 级 别 的 升 高 ,阳 性 表 达 率 明 显 减 低 , P16 在有 淋 巴 转 移 的 阳 性 率 明 显 低 于 无 淋 巴 转 移 的 阳 性 率 ,说 明 P16 的 低 表 达 与 大 肠 癌 的 浸 润 、 转 移 有 关 。 另外 ,P16 在 不 同 分 化 程 度 肿 瘤 中 ,阳 性 率 有 明 显 差 异 ,肿 瘤 分 化 程 度 越 低 ,其 阳 性 率 越 低 ,P16 蛋 白 的 表 达 可反 映 肿 瘤 的 恶 性 程 度 ,可 以 与 病 理 一 起 为 诊 断 和 判 断预 后 提 供 帮 助 。 在 基 因 治 疗 方 面 ,科 研 人 员 将 外 源 性P16 基 因 导 入 P16 基 因 缺 失 的 肿 瘤 细 胞 内 ,从 体 内 外两 方 面 实 验 均 观 察 到 P16 基 因 对 肿 瘤 细 胞 生 长 有 明显 抑 制 作 用 ,目 前 对 恶 性 胶 质 瘤 、 喉 癌 、 肝 癌 、 胃 癌 等 恶性 肿 瘤 进 行 了 广 泛 的 研 究 ,拥 有 广 泛 的 应 用 前 景 。本 研 究 还 发 现 ,MDM2 蛋 白 与 P16 蛋 白 表 达 在 大肠 癌 中 无 明 显 相 关 性 ,说 明 他 们 在 大 肠 癌 发 生 发 展 中 ,有 可 能 分 别 通 过 不 同 途 径 发 挥 生 物 学 功 能 。 另 外 ,MDM2 阳 性 表 达 同 时 P16 阴 性 表 达 者 4118 % ( 28/67) ,明 显 高 于 MDM2 蛋 白 阳 性 表 达 同 时 P16 蛋 白 阳性 者 的 2919 %(20/ 67) 、 MDM2 阴 性 表 达 同 时 P16 阴性 表 达 者 的 1914 % (13/ 67) 。 说 明 大 肠 癌 的 发 生 、 发展 不 仅 与 MDM2 激 活 过 度 表 达 或 P16 失 活 不 表 达 有关 ,而 且 可 能 是 MDM2 与 P16 共 同 参 与 的 结 果 。综 上 所 述 ,MDM2 激 活 过 度 表 达 及 P16 失 活 不 表达 与 大 肠 癌 的 发 生 、 发 展 有 关 ,对 大 肠 癌 的 临 床 诊 断 、治 疗 和 判 断 预 后 有 实 际 意 义 。4 参 考 文 献 1 Oliner JD , Kinzler KW , Meltzer PS , et al . Amplification of agene encoding a p532associated protein in human sarcomas J .Nature ,1992 ,358 (6381) :80283. 2 Fakharzadeh SS , Trusko SP , George DL . Tumorigenic potentialassociated wit h enhanced expression of a gene t hat is amplified in198华 西 医 学 2010 ,25 (5) West China Medical Journal ,Vol. 25 ,No. 5 May. 2010 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. a mouse tumor cell lineJ . EMBO J ,1991 ,10 (6) :156521569. 3 McQueen C , Montgomery E , Dufour B , et al . Giant hypopha2ryngeal atypical lipomatous tumorJ . Adv Anat Pat hol ,2010 ,17(1) :38241. 4 Zhang MF , Zhang ZY , Fu J , et al . Correlation between expres2sion of p53 ,p21/ WAF1 ,and MDM2 proteins and t heir prognos2tic significance in primary hepatocellular carcinoma J . J TranslMed ,2009 ,7 (1) :110. 5 Schmidt M K , Tommiska J , Broeks A , et al . Combined effect sof single nucleotide polymorphisms TP53 R72P and MDM2SNP309 ,and p53 expression on survival of breast cancer patient sJ . Breast Cancer Res ,2009 ,11 (6) :R89. 6 黄 照 权 ,朱 立 健 ,周 媛 ,等 . MDM2 基 因 产 物 在 大 肠 癌 中 的 表 达 及其 临 床 意 义 J . 右 江 民 族 医 学 院 学 报 ,2003 ,25 (1) :11213. 7 熊 首 先 ,朱 尤 庆 ,何 军 . MDM2 和 p53 在 大 肠 癌 组 织 中 的 表 达 及其 意 义 J . 长 江 大 学 学 报 C :自 然 科 学 版 ,2007 ,4 (1) :11213. 8 Abdel2Fattah G , Yoffe B , Krishnan B , et al . MDM2/ p53 pro2tein expression in t he development of colorectal adenocarcinomaJ . J Gastrointest Surg ,2000 ,4 (1) :1092114. 9 Liu W , He L , Ram rez J , et al . Interactions between MDM2and TP53 genetic alterations , and t heir impact on response toMDM2 inhibitors and ot her chemot herapeuti