（外科学专业论文）p53在p21在翼状胬肉中的表达.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉中的表达 前言一6 日i j 舌 材料与方法7 结果9 附图“1 o 附表1 2 讨论l3 参考文献1 5 综述翼状胬肉的研究进展17 致谢2 9 个人简历3 0 中文摘要 p 5 3 与p 2 1 蛋白在翼状胬肉中的表达 摘要 目的：翼状胬肉是眼科较为常见的眼表疾病之一，表面为呈三角形增 厚的球结膜组织病变，其头部侵袭生长入角膜，体部位于睑裂区的一侧， 大多生长在鼻侧，增生的翼状胬肉组织肥厚、血管扩张向角膜中央生长， 可引起角膜散光而导致视力下降。如进入瞳孔区则严重影响视力，尤其是 复发型翼状胬肉给病人造成美容缺陷和视力损害 1 】。现研究表明翼状胬 肉是一组织增生性结膜疾病其发病机理仍不十分清楚，可能与细胞异常增 殖和凋亡异常有关。细胞稳态的维持依赖于细胞增生和凋亡两种过程。正 常情况下，这两种过程处于协调的对立统一状态以确保细胞生死有序。目 前已发现的凋亡相关基因多达数十种，根据其功能的不同分为三类：抑制 凋亡基因，如e i b ，b c l 2 等；促进凋亡基因，如f a s ，b a x ，p 5 3 等；双向调控 基因，如c m y c ，b c l x 等。p 5 3 和p 2 1 基因参与细胞d n a 的修复与合成， 调节细胞的分化和凋亡，控制细胞的周期，是引起人类肿瘤发生最常见的 突变基因。p 5 3 基因突变在翼状胬肉发病中的作用，已得到多数学者的认 可 2 。p 5 3 基因产物可阻止细胞进入s 期，参与抑制细胞增生，并促使 d n a 损伤的细胞进入程序化死亡。突变型p 5 3 基因可翻译成异常p 5 3 蛋 白，并在细胞内聚集。胬肉上皮细胞异常表达p 5 3 蛋白，提示胬肉上皮细 胞呈增生活跃状态。本研究p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉中的表达，旨在探讨 p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉发病机制中的作用，为翼状胬肉的治疗、预后等基 础和临床研究提供理论依据。 方法：选择本院2 0 0 9 1 2 0 0 9 1 l 门诊初发的进行期翼状胬肉手术患者 中选标本3 0 例作为病例组( 术后经病理检查确诊是翼状胬肉的标本) 其 中男性1 5 例，女性1 5 例，年龄3 3 - - - 6 8 岁，平均年龄4 8 3 6 4 - 5 2 8 岁，病 程平均1 1 个月；同期正常结膜( 斜视手术患者结膜) 3 0 例作为对照组， 其中男性1 4 例，女性1 6 例，年龄3 4 6 8 岁。平均年龄为4 6 9 5 4 - 1 5 3 岁。 所有病例均排除其他角膜、结膜疾患，排除青光眼、虹膜炎及其他眼底疾 患，排除全身疾患。应用h e 法及免疫组化法检测3 0 例翼状胬肉组织和 3 0 例正常结膜中p 5 3 与p 2 1 的表达。取实验组和对照组进行固定和包埋、 中文摘要 切片、脱蜡，常规h e 染色后，滴加第一抗体，4 0 c 过夜：滴加生物素化 第二抗体( i g g ) ，3 7 2 0 分钟；切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作 液( s a 豫p ) 、d a b 显色、苏木素复染；显微镜观察：选择实验组和对 照组的阳性和阴性组织相、进行l o o x 和4 0 0 x 的显微照相。表达的强弱均 以h s 为准，免疫组化评分( i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls c o r e si h s ) 方法见参照 一】文献，结合阳性细胞百分比及阳性细胞染色强弱两个方面评分。统计学 方法采用非参数秩和检验；所有数据在s p s s13 0 统计软件上进行，以 a = 0 0 5 做为检验标准。 结果：p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉及正常结膜中均有阳性表达，且p 5 3 在 翼状胬肉中高表达，p 2 1 在翼状胬肉中低表达。 1 两组p 5 3i h s 数值比较：病例组i h s 的z 值为6 6 2 6 ，p 值为 o 0 0 1 ( p o 0 5 ) ，二者差异有统计学意义；( t a b l e l ) 2 两组p 2 1i h s 数值比较：病例组i h s 的z 值为6 8 18 ，p 值为 o 0 0 1 ( p o 0 5 ) ，二者差异有统计学意义；( t a b l e 2 ) 3 病例组p 5 3 与p 2 1 的比较：两组i h s 数值比较z 值为4 7 3 3 ，p 值 为o 0 0 1 ( p o 0 5 ) ，两组的差异有统计学意义，两者的i h s 值用s p e a r m a n 秩相关分析结果，值为o 0 0 1 ( r o 0 5 ) 有统计学意义。 结论：p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉及正常结膜中均有阳性表达，且p 5 3 在 翼状胬肉中高表达，p 2 1 在翼状胬肉中低表达。p 5 3 在翼状胬肉中的表达 较正常结膜中的表达明显升高，提示翼状胬肉中细胞凋亡基因受到损伤，抑 癌活性丧失，使它具有很强的组织增殖能力。p 2 1 在翼状胬肉中的表达较 正常结膜中的表达明显降低，提示由于p 2 1 的降低，机体不能产生正常的 蛋白。使细胞内信号传导紊乱，细胞增殖失控，从而使组织具有很强的增 殖能力。二者与翼状胬肉的表达有一定相关性。翼状胬肉是多因素参与的 复杂的病理过程，选择性p 5 3 抑制剂与p 2 1 增强剂可以成为治疗翼状胬 肉新的靶点，对抑制进展期翼状胬肉的提供新的思路。p 5 3 与p 2 1 在翼状 胬肉形成过程中的相互作用机制尚不完全清楚，对此还需进一步研究。 关键词：p 5 3 ；p 2 1 ；翼状胬肉；免疫组织化学；细胞因子；细胞增殖 英文摘要 e x p r e s s i o no fp 5 3a n dp 2 1i np t e r y g i um a b s t r a c t o b j e c t i v e ：p t e r y g i u m i sm o r ec o m m o n e y e d i s e a s eo fo c u l a r s u r f a c e t h es u r f a c eo ft h ep t e r y g i u mi s t r i a n g u l a ri ns e c t i o nt h i c k e n db a l l c o n j u n c t i v a lo r g a n i z a t i o n sa n dt h eh e a dg r o w si n t ot h ec o m e a t h eb o d yi so n t h es i d eo ft h ec r a c ko ft h eu p p e rs e c t i o n ，a n dm o s t l yg r o w sf r o mt h es i d eo f t h en o s e t h eg r o w t h p a r t o ft h eo r g a n i z a t i o nw i t ht h e p t e r y g i u m s v a s o d i l a t i o n g r o w s i n t ot h ec e n t e ro ft h e e o m e a ，w h i c h c a nc a u s e a s t i g m a t i s mi ns i g h t i tw i l ls e r i o u s l ya f f e c tt h es i g h t l i g h ti ft h ep u p i lo ft h e a r e ai sa t t a c k e d ，e s p e c i a l l yt h et y p eo ft h ep t e r y g i u mw h i c hw a se x c i s e db e f o r e w i l lc r e a t eb e a u t yo fv i s i o nd e f e c t sa n dd a m a g e s n o ws t u d yi n d i c a t e dt h e p t e r y g i u mw h i c hw a se x c i s e di s a l l o r g a n i z a t i o n o fa d d i t i o n a la d m i s s i o n c o n j u n c t i v a ld i s e a s e ，i t so c c u r r e n c eo fm e c h a n i s m si ss t i l ln o t v e r yc l e a r ，i t s p r o c e d u r e sa n dt h ea p o p t o s i sc e l l sw e r ee x t r e m e l yr e l e v a n t t h em a i n t e n a n c e o fc e l l s t a t i o n a r yi sd e p e n d e do nt h ea p o p t o s i sc e l l sg r o w t h sa n dt w o d i f f e r e n tp r o c e s s e s u n d e rn o r m a lc i r c u m s t a n c e ，t h e s et w op r o c e s s e si nt h e c o o r d i n a t e do ft h es t a t et oe n s u r et h e u n i t y o f o p p o s i t e so r d e r l y c e l l d e a t h n o ww eh a v ef o u n dt h en u m b e ro f d o z e n so fc e l la p o p t o s i sg e n e s ，i ti s d i v i d e di n t ot h r e ec a t e g o r i e sa c c o r d i n gt ot h ed i f f e r e n c eo fi t sf u n c t i o n ：c o n t a i n t h ea p o p t o s i sg e n e s ，s u c ha se i b ，b c l - 2 ，a n ds oo n ；p r o m o t et h e a p o p t o s i s g e n e s ，s u c ha s ，f a s ，b a x ，p 5 3 ，a n ds oo n ；t w o w a yc o n t r o lt h eg e n e t i c ，s u c h a s c m y c ，b c l x ，a n ds oo n ；p 5 3a n dp 2 1g e n e si n v o l v e di nc e l l u l a rd n a r e p a i r a n ds y n t h e s i s ，r e g u l a t ec e l ld i f f e r e n t i a t i o na n d a p o p t o s i s ，c e l lc y c l e c o n t r 0 1 p 5 3 g e n ea n dp 2 1a r et h em o s tc o m m o ng e n e sc a u s i n gh u m a n t u m o r t h e yt a k ep a r ti nc e l ls y n t h e s i s ，t h er e p a i ro ft h ec e l l so ft h e p o l a r i z a t i o na n dt h ea p o p t o s i sc e l l sa n dc o n t r o lp e r i o d m o s ts c h o l a r s h a v e a c c e p t e d t h a tt h er o l eo ft h ep 5 3 g e n e m u t a t i o n si nt h e p t e r y g i u mo c c u r r e n c e t h ep r o d u c to fp 5 3g e n em a yp r e v e n tac e l li n t os p e r i o d ，a n di nr e s t r a i nc e l l sg r o w t h ，a n dc a nm a k ed a m a g ec e l l so fd n a i n t o 3 英文摘要 _ - 一一_ 一 d e a t hp r o g r a m m u t a t i o np 53g e n ec a nb et r a n s l a t e di n t oa na b n o r m a lp 5 3 p r o t e i n ，a n dg a t h e r si nt h ec e l l t h ea b n o r m a le x p r e s s i o no fp 53i n p t e r y g i u m se p i t h e l i a lc e l l ss u g g e s t st h ee p i t h e l i a lc e l l g r o w t hi na na c t i v e s t a t e i no r d e rt od i s c u s st h ef u n c t i o no fp 5 3a n dp 2 1i nt h ep t e r y g i u m s s e i z u r e s m e c h a n i s m ，w es t u d i e dt h e e x p r e s s i o n o fp 5 3a n dp 21 i n p t e r y g i u m t h e nw ew i l lo f f e r at h e o r e t i c a lb a s i so nt h e p r o g n o s i s ，t h e t r e a t m e n ta n dc l i n i c a lr e s e a r c h m e t h o d s ：w ec h o o s e d30s p e c i m e n sn e c kp t e r y g i u mi nt h ee a r l y s t a g e p a t i e n t s a sac a s eg r o u p ，w h og o ti n f e c t e df o rt h ef i r s tt i m ea n ds u f f e r e d s u r g e r yi np e r i o do f2 0 0 9 1t o2 0 0 9 11 ( a l lp a t i e n t sw e r ed i a g n o s e db y p a t h o l o g i c a ls p e c i m e n so fp t e r y g i u m ) i n c l u d i n g15m e na n d15w o m e n ，a g e d 3 3t o6 8 ，4 8 3 64 - 5 2 8y e a r so l do na v e r a g e ，w i t h11 m o n t h s p t e r y g i u mo n a v e r a g e a n dw et o o kt h en o r m a lc o n j u n c t i v a ( c o n j u n c t i v a lf r o m s q u i n t s u r g e r y ) 30c a s e sa st h ec o n t r o lg r o u p ，w h i c hi n c l u d i n g1 4m e na n d16w o m e n ， a g e d3 4t o6 8 ，4 6 9 54 - 1 5 3y e a r so l do na v e r a g e a l lc a s e sw e r er u l e do u t o t h e rc o r n e a ，c o n j u n c t i v ad i s e a s e ，e x c l u s i o no fg l a u c o m a ，i r i t i s ，a n do t h e r r e t i n a ld i s o r d e r s ，e l i m i n a t eb o d y d i s o r d e r s i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yw a su s e dt o d e t e c tp 5 3a n dp 21 e x p r e s s i o ni n3 0c a s e so fp t e r y g i u ma n do t h e r3 0o f n o r m a lc o n j u n c t i v a w em a d et h ee x p e r i m e n t a lg r o u pa n d c o n t r o lg r o u pf i x e d ， e m b e d d e d ，s l i c e da n dd e w a x e d ，d r i p p e dt h ef i r s t a n t i b o d yd o w n 4 o v e r n i g h t ；d r i p p e db i o t i n y l a t e ds e c o n da n t i b o d y ( i g g ) d o w n ，3 7 2 0m i n u t e s ； d r i p p e dh o r s e r a d i s hh r p s t r e p t a v i d i nw o r k i n gf l u i d ( s a r m e ) d o w n ，s t a i n e d i t b yd a b ，h e m a t o x y l i n ；m i c r o s c o p y ：s e l e c t e dp o s i t i v ea n dn e g m i v e o r g a n i z a t i o n so fe x p e r i m e n t a lg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ，t o o kp h o t o su n d e r 10 0 xa n d4 0 0 t 0 0 ki h sa s s t a n d a r d ，i m m u n o l l i s t o c h e m i c a ls c o r e si h s m e t h o dr e f e rt o r e f e r e n c e 4 】，s c o r e da c c o r d i n gt ot h ep e r c e n t a g eo f p o s i t i v e c e l l sa n dt h ee x t e n do fs t a i n i n go fp o s i t i v ec e l l s ，t o o kn o n p a r a m e t r i c r a n ka n dt e s ta ss t a t i s t i c a l m e t h o d s ；a 1 1d a t ap r o c e s s e dw i t hs p s s13 0 s t a t i s t i c a ls o t h v a r e ，t o o kt h ev a l u e o r e ( 0 5 ) a st h es t a n d a r d r e s u l t s ：t h ee x p r e s s i o no fp 5 3a n dp 2 1w e r eb o t hp o s i t i v ei np t e r y g i u m a n dn o r m a l c o n j u n c t i v a t h ee x p r e s s i o no fp 5 3i n p t e r y g i u m w a s - - - - - - 一 一。 4 英文摘要 s i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a ni nn o r m a lc o n j u n c t i v a ，a n dt h ee x p r e s s i o no fp 2 1i n p t e r y g i u m w a ss i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a ni nn o r m a lc o n j u n c t i v a k e yw o r d s ：p 5 3 ；p 2 1 ；p t e r y g i u m ；i m m u n o h i s t o c h e m i c ；a lm e t h o d ； c y t o k i n e s ；p r o l i f e r a t i o nc e l l s 5 研究论文 p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉中的表达 e 刍 网看 翼状胬肉是一种以新生的纤维血管组织自球结膜生长向角膜表面侵 袭为特点的结膜疾病；组织学上，它是由萎缩的结膜上皮和增生肥大的血 管化组织及弹性退变结缔组织构成。因结缔组织增生及血管增生的程度 差异造成不同的外观，但其病理改变基本一致，病理学和病理生理学研 究证实翼状胬肉是增生性病变 3 5 】。翼状胬肉上皮下主要是新生血管和 纤维结缔组织，尤其是复发性翼状胬肉 6 】，提示新生血管和纤维组织与翼 状胬肉发生发展间有重要联系。r a t n a k e r 等通过病理检查把翼状胬肉分为 三型，即血管瘤型表现为基质内有大量血管束伴有血管间水肿；纤维型表 现为基质内主要是各种纤维夹杂很少量血管；混合型表现为基质内血管 束与纤维比例大致相等。 p 5 3 基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因在短短的十多年 里，人们对p 5 3 基因的认识经历了癌蛋白抗原，癌基因到抑癌基因的三 个认识转变。现已认识到，引起肿瘤形成或细胞转化的p 5 3 蛋白是p 5 3 基因突变的产物，是一种肿瘤促进因子，它可以消除正常p 5 3 的功能， 而野生型p 5 3 基因是一种抑癌基因，它的失活对肿瘤形成起重要作用。 p 2 1 基因与人类肿瘤相关，定位在1 2 号染色体上p 2 1 基因对人类癌 症影响最大它好像分子开关：当正常时能控制调控细胞生长的路径；发 生异常时则导致细胞持续生长并阻止细胞自我毁灭她参与细胞内的 信号传递，当p 2 1 基因突变时该基因永久活化不能产生正常的蛋白，使 细胞内信号传导紊乱，细胞增殖失控而癌变 p 5 3 和p 2 1 基因分别是参与调控细胞凋亡和细胞增生的重要的物 质。我们现应用免疫组织化学法检测翼状胬肉组织中p 5 3 与p 2 1 的表达， 旨在探讨p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉发病机制中的作用，为翼状胬肉的治疗、 预后等基础和临床研究提供理论依据。 研究论文 材料与方法 1 材料 1 1 标本 选择本院2 0 0 9 年2 月2 0 1 0 年2 月门诊初发翼状胬肉手术患者体部 胬肉标本3 0 例作为病例组( 注：经病理检查确诊是翼状胬肉) 其中男女 各15 例，年龄3 5 - - - - 6 7 岁，平均年龄4 7 5 6 士3 1 2 岁，病程平均l o 个月； 选择同期正常结膜( 外伤手术患者结膜) 3 0 例作为对照组，其中男女性 各1 5 例，年龄3 5 - - - 6 7 岁。平均年龄为4 6 9 3 士2 5 3 岁。所有病例均排除 其他角膜、结膜疾患，排除青光眼、虹膜炎及其他眼底疾患，排除全身 疾患。 1 2 免疫组化试剂及仪器 抗( p 5 3 、p 2 1 、河北博海生物工程开发有限公司分装美国s a n t a c r u z 公司产品) 、s p 、d a b ( 购于河北博海生物工程开发有限公司) ； 显微镜：蔡司；c m o s ：日本奥林巴斯；多功能真彩色细胞图象分析管理 系统：美国m e d i ac y b e m e f i c s 公司i m a g e p r op l u s ；切片机：德国莱卡 r m 2 0 1 5 ；离心机：北京离心机厂l d z 5 2 型；电子天平：瑞士 m e t t e r a e l 0 0 型；移液器：德国e p p e n d o r f ；干燥箱：日本三洋 m i r - 1 5 3 型；低温冰箱：日本三洋m d f 3 8 2 e 型；恒温水浴箱：江苏太 仓医用仪器厂d s h z 3 0 0 型；医用微波炉：浙江临安爱迪仪器厂 y w y 7 8 1 b 型。 2 方法 2 1 脏法 2 1 1 取材固定和包埋、切片： 取实验组和对照组标本组织尽可能新鲜，p b s ( 磷酸盐缓冲液) 洗，取 小于0 5 c m x 0 5 c m x 0 1 c m 组织块。用4 多聚甲醛( 0 1 m p b s ，p h 7 0 , - 一7 6 ， 含o i d e p c ) 进行固定，经7 0 乙醇3 0 分钟、8 0 乙醇3 0 分钟、9 0 乙醇3 0 分钟两次、9 5 乙醇3 0 分钟两次、1 0 0 乙醇3 0 分钟两次、二甲 苯透明3 0 分钟两次、5 5 。c 石蜡中3 0 分钟两次、用铜制模具包埋组织块； 将厚度5 u m 的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，6 0 。c 过夜； 将切片浸于二甲苯中5 分钟两次、1 0 0 乙醇5 分钟两次、9 5 乙醇5 分 研究论文 钟两次、9 0 乙醇5 分钟两次、8 5 乙醇5 分钟两次、7 5 乙醇5 分钟两 次、自来水冲洗、p b s 洗两次；l 甲醇双氧水，室温1 0 分钟，蒸馏水洗1 次，0 1 m p b s 洗3 次5 分钟； 2 1 2h e 染色 将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。酸水及氨 水中分色，各数秒钟。流水冲洗1 小时后入蒸馏水片刻。入7 0 和9 0 酒精中脱水各1 0 分钟。入酒精伊红染色液染色2 _ 3 分钟。染色后的切 片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。 2 2 免疫组化法 2 2 1 取材固定和包埋、切片： 取实验组和对照组标本组织尽可能新鲜，p b s ( 磷酸盐缓冲液) 洗，取 小于0 5 c m 0 5 c m 0 1 c m 组织块。用4 多聚甲醛( o 1 m p b s ，p h 7 0 7 6 ， 含o 1 d e p c ) 进行固定，经7 0 乙醇3 0 分钟、8 0 乙醇3 0 分钟、9 0 乙醇3 0 分钟两次、9 5 乙醇3 0 分钟两次、1 0 0 乙醇3 0 分钟两次、二甲 苯透明3 0 分钟两次、5 5 石蜡中3 0 分钟两次、用铜制模具包埋组织块； 将厚度5 u m 的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，6 0 c 过夜； 将切片浸于二甲苯中5 分钟两次、1 0 0 乙醇5 分钟两次、9 5 乙醇5 分 钟两次、9 0 乙醇5 分钟两次、8 5 乙醇5 分钟两次、7 5 乙醇5 分钟两 次、自来水冲洗、p b s 洗两次；1 甲醇双氧水，室温1 0 分钟，蒸馏水洗 1 次，0 1 m p b s 洗3 次5 分钟；切片上滴加抗原修复液，室温1 0 分钟， o 1 m p b s 洗3 次5 分钟；切片上滴加正常山羊血清封闭液，室温2 0 分 钟。甩去多余液体，不洗。 2 2 2 加第一抗体，加第二抗体 切片上滴加第一抗体，4 。c 过夜，o 1 m p b s 洗3 次5 分钟。切片上 滴加生物素化第二抗体( i g g ) ，3 7 。c 2 0 分钟，o 1 m p b s 洗3 次5 分钟； 切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液( s - a h r p ) ，3 7 2 0 分钟， 0 1 m p b s 洗3 次5 分钟； 2 2 3d a b 显色 使用d a b 显色试剂盒l m l 蒸馏水加显色剂a 、b 、c 各一滴，混匀， 加至标本上，显色6 分钟，充分水洗； 2 2 4 复染 研究论文 苏木素复染细胞核1 分钟，充分水洗、1 盐酸酒精分化、1 氨水反 蓝、充分水洗、经7 0 乙醇5 分钟、8 0 乙醇5 分钟、9 0 乙醇5 分钟两 次、9 5 乙醇5 分钟两次、1 0 0 乙醇5 分钟两次脱水、二甲苯透明5 分 钟两次、中性树脂封片； 2 2 5 显微镜观察 选择实验组和对照组的阳性和阴性组织相、进行1 0 0 x 和4 0 0 x 的显微 照相。选择有意义的组织相，经登录、编号、采集、分析、读取数据、 最后存盘。 2 3 结果判断标准 p 5 3 ，p 2 1 结果判定标准：光镜下观察，细胞核呈浅黄色或深棕色染色 的细胞为阳性细胞；细胞浆或细胞膜呈浅黄色或深棕色的细胞为假染色 以及无棕黄色染色的细胞均视为阴性细胞。( f 喀1 4 ) 表达的强弱均以免疫 组化评分( i h s ) 为准：a 为阳性细胞百分比( 无阳性细胞= 0 ，阳性细胞占 1 1 0 = 1 ，1 1 - 5 0 = 2 ，5 1 8 0 = 3 ，8 1 1 0 0 = 4 ) ，b 为阳性细胞染色 强弱( 阴性= 0 ，弱阳性= 1 ，中度阳性= 2 ，强阳性= 3 ) ，a ，b 两项乘 积即为该例组织的i h s 。 2 4 统计方法 病例组与对照组间采用i h s 评分成组设计两样本比较的秩和检验，病 例组p 5 3 和p 2 1 两样本比较的秩和检验。所有分析采用s p s s l 3 0 统计软件 包，取a = 0 0 5 做为检验标准。 结果 p 5 3 与p 2 1 在翼状胬肉及正常结膜中均有阳性表达，且p 5 3 在翼状 胬肉中高表达，p 2 1 在翼状胬肉中低表达。 l 两组p 5 3i h s 数值比较：病例组i h s 的z 值为一6 6 2 6 ，p 值为 0 0 0 1 ( p 0 0 5 ) ，二者差异有统计学意义； ( t a b l e l ) 2 两组p 2 1i h s 数值比较：病例组i h s 的z 值为6 8 1 8 ，p 值为 0 0 0 1 ( p 0 0 5 ) ，二者差异有统计学意义；( t a b l e 2 ) 3 病例组p 5 3 与p 2 1 的比较：两组i h s 数值比较z 值为4 7 3 3 ，p 值 为o o o l f p 2 2 5r n n 时才有手术指征【4 1 1 。现在认为只要影响 患者的视功能或美观时就可以考虑手术。当翼状胬肉长入角膜后造成散 光，什么时候手术才能尽可能地减少翼状胬肉对视功能的影响，需要多方 面的研究来确定。有人认为胬肉早期，其进展的微环境尚未建立，积极 手术可以减少角膜缘等组织破坏，减少复发；但也有学者认为，翼状胬肉的 进展缓慢，可以观察，有的甚至终生都无手术必要，同时也能避免手术复 发的困扰，因此不宜过早手术州。 翼状胬肉一旦复发，则进展很快，表现为胬肉充血、肥厚。多次复 发可以造成睑球粘连，眼球运动障碍，角巩膜变薄、复视等并发症。因 此复发性翼状胬肉手术有其特殊的治疗原则，复发性胬肉切除手术需在 上次手术反应完全静止6 个月以上方可再次手术，因其胬肉复发情况不同 选择不同手术方式。近年开展较多的为角膜缘干细胞移植等方法。 翼状胬肉切除结膜瓣转位联合丝裂霉素应用，据报道：手术切除后 使用m m c 明显优于其他抗代谢药物，在一定程度上优于单纯切除加结 膜瓣转位手术的效果，而且安全、简单，但是长期高浓度点眼则可引起 很多并发症，药物的进一步实用还在探索中。 翼状胬肉切除自体角膜缘干细胞移植术，由于角膜缘干细胞具有一 定的细胞再生能力，可影响结膜细胞的转向分化而发生异常。在正常生 理条件下，角膜缘干细胞的增殖可以抑制异常的结膜上皮细胞的长入， 防止角膜缘血管受侵。所以当角膜缘受损或者缺失时，角膜上皮细胞增 殖能力减弱或者丧失，使结膜上皮以及新生血管长入导致翼状胬肉向角 膜中央的进展。杜振亚【8 】通过对7 6 只眼的翼状胬肉切除自体角膜缘干细胞 移植手术治疗，均无复发。手术中分离结膜与胬肉头体部，并将角巩膜上 的胬肉组织充分剥离，暴露透明角膜及巩膜，切除翼状胬肉，取其上方 或下方结膜上皮连同部分角膜缘上皮组织，将其缝合于清除干净后的病变 区，其角膜缘侧与植床的角膜缘相对应，暴露3 r a m 巩膜带。此方法为病 变区角膜缘提供正常的上皮来源，使角膜恢复透明，同时可以阻止异常 综述 结膜组织增生，有效防止胬肉复发。 候永吉等报道 6 1 ，利用翼状胬肉切除联合结膜移植巩膜表层剥切术减 少翼状胬肉复发。切除胬肉，裸露4 m m x 4 m m 大小的巩膜病变区，切除表 层巩膜，自体结膜移植，此方法即切除了病变区相应的所有组织，阻断 了异常血管的连接，去除了胬肉增殖的基本条件，减少胬肉复发。 当翼状胬肉侵犯瞳孔区时需考虑视力是否受到影响，切除胬肉联合 自异体板层角膜移植，利用植片的免疫屏障作用，减少免疫反应，使植 片保持透明，降低胬肉复发。 黄天菊等【9 l 通过对2 4 眼侵犯角膜瞳孔区的翼状胬肉行此手术治疗，均 无复发，植片均透明，术后视力明显提高。 各种手术方法的适应证不同，对于初发的翼状胬肉，单纯切除联合结 膜移植的复发率比联合羊膜移植更低【4 8 l 。联合羊膜移植可以减少结膜的 损害，保持眼表微环境，其主要适于自体结膜组织缺少患者，以及部分 复发患者。翼状胬肉切除联合结膜或者羊膜移植，适于复发性翼状胬肉 和发展到角膜瞳孔缘的翼状胬肉。联合角膜缘干细胞移植术能有效降低 胬肉复发可能，适于角膜缘损坏或者缺失，角膜缘干细胞功能严重破坏 以及复发性翼状胬肉。由于角膜干细胞的直接特异性表面标志尚未找到， 仍难以做到分离与纯化，因此尚难确认角膜干细胞移植的说法【4 9 l 。 近年来，由于角膜缘干细胞移植术的不断推广，术中角膜缘组织的 损伤难以避免，造成假性胬肉等并发症的出现。有学者提出术中取角膜 缘干细胞时，切除深度不要超过前弹力层，范围 1 4 圆周；我们在切除 胬肉时不需要剔除很干净，以免损伤正常的角膜缘结构，造成角膜缘干 细胞的破坏；取自体结膜时仅取表层上皮，薄薄一层，尽量不损伤到筋 膜，最大限度地减少对眼表微环境的破坏。 总之，翼状胬肉手术中，胬肉的完整剔除，角膜缘干细胞移植再生， 抗代谢药物m m c 的使用等等，是眼科医生预防胬肉复发的主要手段；但 是由于目前临床上的翼状胬肉手术仍没有定量的原则，根据不同的患者 选择不同术式，选择手术时临床医生需要慎重。 综述 参考文献 1d ig i r o l a m on ，c h u ij , c o r o n e o m t ，e t a l p a t h o g e n e s i so fp t e r y g i a ：r o l eo f c y t o k i n e s ，g r o w t hf a c t o r s ，a n dm a t r i x m e t a l l o pr o t e i n a s e s j p r o gr e t i n e y er e s ，2 0 0 4 ，2 3 ( 3 ) ：1 9 5 - 2 2 8 2s o l o m o n a s p t e r y g i u m j 】b rjo p h t h a l m o l ，2 0 0 6 ，9 0 ( 8 ) ：7 6 9 7 7 2 3 刘祖国，王华努力提高我国翼状胬肉的手术水平 j 】中华眼科杂志， 2 0 0 7 ，4 3 ( 1 0 ) ：8 6 5 8 6 7 4 马科，徐亮，张士元，等北京特定地区翼状胬肉患病率的流行病学调查 【j 】中华眼科杂志，2 0 0 5 ，4 1 ( 1 ) ：6 3 6 4 5 阎启昌，刘忠鑫，邸悦，等三亚地区翼状胬肉发病与紫外线暴露时间相 关关系研究 j 】中华医学杂志，2 0 0 6 ，1 1 9 ( 1 2 ) ：1 3 0 8 1 3 1 0 6 张明昌，王勇重视翼状胬肉的基础与临床研究 j 】中华眼科杂志， 2 0 0 7 ，4 3 ( 1 0 ) ：8 6 8 - 8 7 1 7t s a iw ，c h a n gk c ，l i nc l ，e ta 1 p 5 3e x pr e s s i o ni n p t e r y g i u mb y i m m u n o h i s t o c h e m i c a la n a l y s i s ：as e r i e sr e p o r to f12 7c a s e sa n dr e v i e wo f t h el i t e r a t u e j c o m e a , 2 0 0 5 ，2 4 ( 6 ) ：5 8 3 5 8 6 8 王勇，张明昌，胡义珍细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p 2 7 k i p l 在翼 状胬肉中的表达 j 月艮科新进展，2 0 0 5 ，2 5 ( 1 ) ：5 2 。5 3 9p a r kt k ，ji nk h t e l o m e r a s e a c t i v i t y i npt e r y g e a la n dn o r m a l c o n j o n c t i v a l 印i t h e l i u m 【j 】k o r e a njo p h t h a l m o l ，2 0 0 0 ，14 ( 1 ) ：8 5 8 9 10t a nd t ，t a n g w y ，l i uy p ，e ta 1 a p o pt o s i sa n da p o pt o s i sr e l a t e dg e n e e x p r e s s i o ni nn o r m a l c o n j u n c t i v aa n d p e t r y g i u m【j 】 b r j o p h t h a l m o l ，2 0 0 0 ，8 4 ( 3 ) ：2 12 216 1 1n o mm s a c t ao p h t h a l m o l ，19 7 9 ；5 7 ：9 6 12c h e njk ，t s e n gr j ，l i ns s ，e ta 1 f i b r o b l a s ti s o l a t e df r o mh u m a n p t e r y g i ae x h i b i ttr a n s f o r m e dc e l lc h a r a c t e r i s t i c s i nv i tr oc e l ld e vb i o l a n i m ，a p r l9 9 4 ；3 0 a ( 4 ) ：2 4 3 2 4 8 1 3 刘祖国，谢玉环，张梅表皮生长因子受体家族在翼状胬肉上皮内的异 常表达【j 中华眼科杂志，2 0 0 0 ；3 6 ( 5 ) ：3 7 2 3 7 4 14q uz ，l i e b l e rj m ，p o w e rm r ，e ta 1 m a s tc e l l sa r eam a j o rs o u r c eo f 2 5 综述 b a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o ri nc h r o n i ci n f l a m em a t i o na n dc u t a n e o u s h e m a n g i o m a a m ，j ，p a t h o l ，s e p 19 9 5 ；14 7 ：56 4 5 7 3 15p o w e r sm r ，q u z ，o b r i e n b ，e t a l i m m u n o l o c a l i z a t i o no fb f g fi n p t e r y g i a ：a s s o c i a t i o nw i t hm a s tc e l l s c o m e a ，s e p 19 9 7 ；16 ：5 4 5 5 4