（食品科学专业论文）副溶血性弧菌电化学免疫传感器的研制.pdf

浙江工商大学硕士学位论文 副溶血性弧菌电化学免疫传感器的研制 摘要 细菌性食物中毒是影响食品安全的一个非常重要的因素。副溶血 性弧菌( v p ) 是一种嗜盐性细菌，通常存在于近海海水、海底沉积物、 浮游生物、海产品( 鱼类和贝类) 及腌渍食品中，是夏秋季沿海地区引发 食物中毒的首要病原菌。人多因食入未煮熟的海产品或污染此菌的盐 渍食物而感染，潜伏期为2 2 6h ，最短仅1h ；主要症状为腹痛、腹 泻、呕吐和发热等，粪便为水样，少数呈血水样或粘液血便。如果不 及时治疗，可能会危急生命。 免疫传感器是由生物学、医学、物理、化学和电子学等学科相互 渗透所形成的新研究领域，其在食品安全快速检测、临床医学、环境 监测和军事等领域都有重要应用。凭借其微型化、低成本、特异性强、 灵敏度高、检测快速方便和容易实现在线检测等优点，免疫传感器已 成为当前的研究热点。抗原抗体固定化技术是研究和开发免疫传感器 最为关键和重要的工作。 本论文主要围绕以下几个方面开展了一些工作： 1 副溶血性弧菌抗原与抗体的制各 本实验成功制备了副溶血性弧菌抗原与抗体，平板计数得抗原浓 度为1 0 1 0c f u m l ，抗原形态学表征与文献报道一致；通过微量滴定凝 集法测得抗体效价为1 2 8 。实验结果表明，副溶血性弧菌抗原与抗体都 浙江工商大学硕士学位论文 具有良好的生物活性和特异性，这为后续工作的顺利开展奠定了基础。 2 电极预处理与表征 本实验对玻碳电极和丝网印刷电极进行预处理，通过形态学表征 和电化学表征验证预处理效果。实验结果表明，电极预处理达到了预 期效果，玻碳电极和丝网印刷电极都具有较好的一致性和重现性，这 为后续实验的顺利开展奠定了基础。 3 基于壳聚糖金胶和丝网印刷电极的副溶血性弧菌电流型酶免疫传感 器的研制 本实验将a n t i v _ p 掺杂于壳聚糖金胶中，并修饰于丝网印刷电极表 面，从而制备一次性副溶血性弧菌免疫传感器。实验中采用循环伏安 法和激光扫描共聚焦显微镜表征免疫传感器。采用夹心法检测v p ，免 疫传感器先在待测样品中室温孵育3 0m i n ，然后在h r p a n t i v p 溶液 中室温孵育3 0m i n 。采用循环伏安法监测酶促反应，通过免疫反应结 合于免疫电极表面的h r p a n t i v p 能够催化硫堇和过氧化氢，利用还 原电流的增大来测定样品中的v p 。在优化的免疫反应条件及电化学检 测条件下，设定判定标准如下：a 0 1 肚为阳性。 该免疫电极具有较好的特异性、重现性( r s d 9 ) 、稳定性( 一周后电 流响应为初始值的8 7 ) 和准确性( 与e l i s a 符合率为9 5 ) 。因此，该 免疫传感器可初步用于v p 的快速筛检。 4 基于琼脂糖纳米金膜和丝网印刷电极的副溶血性弧菌电流型酶免 疫传感器的研制 本实验将h r p a n t i v p 掺杂于琼脂糖和纳米金中，并修饰于丝网 浙江工商大学硕士学位论文 印刷电极表面，从而制备一次性副溶血性弧菌免疫传感器。实验中采 用循环伏安法和激光扫描共聚焦显微镜表征免疫传感器。采用一步法 检测v p ，免疫传感器在待测样品中室温孵育3 0m i n 。抗原一抗体免疫 反应生成的免疫复合物部分屏蔽了免疫电极表面h r p 的活性中心，从 而减弱了h r p 对硫堇和过氧化氢的催化能力。采用循环伏安法监测酶 促反应，利用还原电流的减小来测定样品中的v p 。在优化的免疫反应 条件及电化学检测条件下，设定判定标准如下：a 0 0 5u a 为阳性。该免疫电极具有较好的特异性、重现性f r s d 6 ) 、稳定性( 一周后电流响应为初始值的9 1 ) 和准确性( 与e l i s a 符 合率为9 7 5 ) 。因此，该免疫传感器可初步用于v p 的快速筛检。 5 基于n a t i o n 硫堇纳米金的副溶血性弧菌无试剂电流型免疫传感器 的研制 本实验采用静电吸附原理和自组装技术将n a t i o n 、硫堇、纳米金 和a n t i v i a 修饰到玻碳电极表面形成敏感膜，从而制备副溶血性弧菌无 试剂电流型免疫传感器。实验中采用电化学方法表征免疫传感器的制 备过程。无需酶标抗体和复杂操作，根据抗原抗体特异性结合形成的 免疫复合物使得敏感膜有效扩散截面积减小，从而抑制硫堇氧化还原 来实现对v p 的检测。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下，设 定判定标准如下：a 0 5 a 为阳性。该免疫电极 具有较好的特异性、重现性( r s d 1 0 ) 、稳定性( 一周后电流响应为初 始值的9 3 ) 和准确性( 与e l i s a 符合率为9 7 5 ) 。因此，该免疫传感 器可初步用于v p 的快速筛检。 1 1 1 浙江工商大学硕士学位论文 本论文以v p 作为实验模型，对其进行了免疫学和电分析化学的研 究，构建了定性检测v p 的框架。该方法同时也可应用于其他抗原一抗体 的研究。 关键词：副溶血性弧菌；电化学免疫传感器；丝网印刷电极；纳米金； 循环伏安法；激光扫描共聚焦显微镜 i v 浙江工商大学硕士学位论文 f a b r i c a t i o no ft h ee l e c t r o c h e m i c a li m m u n o s e n s o rf o r d e t e c t i o no fh b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s b a c t e r i a lf o o dp o i s o n i n gi so n eo ft h em o s ti m p o r t a n tf a c t o r st h a t i m p a c t i n gf o o ds a f e t y h b r i op a r a h a e m o l y t i c u s ( v p ) i sat y p eo fh a l o p h i l i c b a c t e r i a ，u s u a l l y e x i s t si n o f f i n gs e a w a t e r , s e a b e ds e d i m e n t ，p l a n k t o n ， s e a f o o d ( 6 s ha n ds e a s h e l l ) a n dp i c k l e df o o d v pi st h ep r i m a r yp a t h o g e n t h a tc a u s e df o o dp o i s o n i n gi nl i t t o r a ld u r i n gs u m m e ra n da u t u m n p e o p l e c o u l db ei n f e c t e dm o s t l yb e c a u s eo fe a t i n gu n c o o k e ds e a f o o do rp i c k l e d f o o dw h i c hc o n t a m i n a t e db yv p t h el a t e n tp e r i o do ft h ed i s e a s ei s c o m m o n l y2 - 2 6h ，a n dt h es h o r t e s ti so n l y1h t h ep r i m a r ys y m p t o m sa r e b e l l y a c h e ，d i a r r h e a ，v o m i t ，f e v e r , w a t e r yo rh y d r a e m i ad e j e c t aa n ds oo n l i f ew i l lb ed a n g e r o u si ft h ep a t i e n tc o u l d n tb et r e a t e di nt i m e i m m u n o s e n s o r , w h i c hi san e wf i e l db a s e do nm u l t i s u b j e c ts u c ha s b i o l o g y , m e d i c i n e ，p h y s i c s ，c h e m i s t r ya n de l e c t r o n i c s ，h a sb e e nw i d e l y a p p l i e dt of o o ds a f e t yr a p i dd e t e c t i o n ，c l i n i c a lm e d i c i n e ，e n v i r o n m e n t a l m o n i t o r i n g ，m i l i t a r y a f f a i r sa n do t h e ra r e a s b e c a u s eo fi t s p o t e n t i a l a d v a n t a g e ss u c ha sm i n i a t u r i z a t i o n ，l o wc o s t ，h i g hs p e c i f i c ，h i g hs e n s i t i v i t y , s i m p l e d i r e c td e t e c t i o na n do n - l i n ea n a l y s i s i m m u n o s e n s o rh a sb e c o m e t h er e s e a r c hh o t s p o t a n t i g e n a n t i b o d yi m m o b i l i z a t i o nt e c h n i q u ei st h e v 浙江工商大学硕士学位论文 m o s ti m p o r t a n ta n dc r i t i c a lp a r to ff a b r i c a t i o no ft h ei m m u n o s e n s o r t h er e s e a r c h e sc a r r i e do u ti nt h i sp a p e rw o u l db ed e s c r i b e da sf o l l o w s 1p r e p a r a t i o no fv pa n da n t i v p i nt h i se x p e r i m e n t v pa n da n t i v pw e r es u c c e s s f u l l yp r e p a r e d v p c o n c e n t r a t i o n ( 1 0 1 0c f u m l ) w a sa c q u i r e db yp l a t ec o l o n y c o u n t i n gm e t h o d r e s u l t so fm o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r i z a t i o nw e r ei na g r e e m e n tw i t hl i t e r a t u r e r e p o r t v a l e n c eo fa n t i b o d y ( 1 2 8 ) w a so b t a i n e db ym i c r o t i t e ra g g l u t i n a t i o n e x p e r i m e n t a l r e s u l t si n d i c a t e dt h a tv pa n da n t i v pa l l p o s s e s s e dg o o d b i o a c t i v i t ya n ds p e c i f i c i t y f o l l o w i n ge x p e r i m e n tc o u l db es u c c e s s f u l l y c a r r i e do nb e c a u s eo ft h es u p p o r to ft h ea b o v ew o r k 2p r e t r e a t m e n ta n dc h a r a c t e r i z a t i o no ft h ee l e c t r o d e g l a s s yc a r b o ne l e c t r o d ea n ds c r e e n p r i n t e de l e c t r o d ew e r ep r e t r e a t e d i nt h i se x p e r i m e n t ，a n dc h a r a c t e r i z e db ym o r p h o l o g i c a la n de l e c t r o c h e m i c a l m e t h o d s e x p e r i m e n t a lr e s u l t si n d i c a t e dt h a ta n t i c i p a t i v ep u r p o s eh a db e e n a c c o m p l i s h e db ye l e c t r o d ep r e t r e a t m e n t ；b o t hg l a s s yc a r b o ne l e c t r o d ea n d s c r e e n - 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a n t i v pf o r3 0m i n a tr o o mt e m p e r a t u r e c vw a su s e da se l e c t r o c h e m i c a lm e a n st od e t e c tt h e p r o d u c t so ft h ee n z y m a t i cr e a c t i o n h r p a n t i v p w h i c hc o n n e c t e do nt h e s u r f a c eo ft h ei m m u n o s e n s o r b yi m m u n o r e a c t i o n ，c o u l dc a t a l y z e t h e o x i d a t i o nr e a c t i o no ft h i o n i n eb yi - 1 2 0 2 a c c o r d i n gt ot h ei n c r e a s eo f r e d u c t i o nc u r r e n t ，v pc o u l db ed e t e c t e d u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n so f i m m u n o r e a c t i o na n de l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n ，ar e s p o n s ec u r r e n t ( a ) o f m o r et h a n0 1n aw a sd e t e r m i n e dt ob eas t a t i s t i c a lc u t o f f p o s i t i v e c r i t e r i o nt od i s t i n g u i s hs a m p l e s ，n a m e l ya o 。1 a ， p o s i t i v e t h ei m m u n o s e n s o rh a da c c e p t a b l es p e c i f i c i t y , r e p r o d u c i b i l i t y ( r s d 9 ) ，s t a b i l i t y ( t h ea m p e r o m e t r i cr e s p o n s ew a s8 7 o ft h ei n i t i a l r e s p o n s ea f t e raw e e k ) a n da c c u r a c y ( 9 5 o ft h er e s u l t so b t a i n e db yt h e i m m u n o s e n s o rw e r ei n a g r e e m e n tw i t h t h o s eo b t a i n e db ye l i s a ) t h e r e f o r e t h ei m m u n o s e n s o rc o u l db eu s e dt or a p i d l yd e t e c tv p 4f a b r i c a t i o no fa m p e r o m e t r i ce n z y m ei m m u n o s e n s o rf o rd e t e c t i o no f v pb a s e do na g a r o s e n a n o - 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a u a r e a g e n t l e s se l e c t r o c h e m i c a li m m u n o s e n s o rf o r d e t e c t i o n o fv p b a s e do np o s i t i v e n e g a t i v ec h a r g ea d s o r p t i o na n ds e l f - a s s e m b l yc o a t e dw i t h s e n s i n gm e m b r a n et h a tc o n s i s t e do fn a n o - a u t h i o n i n e n a f i o na n da n t i v p h a sb e e nd e v e l o p e di nt h e e x p e r i m e n t t h ep r e p a r a t i o np r o c e s so ft h e v 1 1 1 浙江工商大学硕士学位论文 i m m u n o s e n s o rw a sc h a r a c t e r i z e db yc v w i t h o u te n z y m e l a b e la n t i b o d y a n dc o m p l i c a t e do p e r a t i o n ，t h ei n h i b i t e dr c d o xo ft h i o n i n ew h i c hc a u s e db y i m m u n o c o m p l e xf r o ma n t i g e n a n t i b o d yi m m u n o r e a c t i o nd e c r e a s i n g t h e e f f e c t i v ed i f f u s i o na r e ac o u l db eu s e dt od e t e c tv p u n d e rt h eo p t i m u m c o n d i t i o n so fi m m u n o r e a c t i o na n de l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n ，ar e s p o n s e c u r r e n t ( m ) o fm o r et h a n0 5 “aw a sd e t e r m i n e dt ob eas t a t i s t i c a lc u t - o f f p o s i t i v ec r i t e r i o nt od i s t i n g u i s hs a m p l e s ，n a m e l ya i 0 5 肚，n e g a t i v e ；a 0 5 ap o s i t i v e t h ei m m u n o s e n s o rp o s s e s s e da c c e p t a b l es p e c i f i c i t y , r e p r o d u c i b i l i t y ( r s d 1 0 ) ，s t a b i l i t y ( t h ea m p e r o m e t r i cr e s p o n s ew a s 9 3 o ft h ei n i t i a lr e s p o n s ea f t e raw e e k ) a n da c c u r a c y ( 9 7 5 o ft h er e s u l t s o b t a i n e db yt h ei m m u n o s e n s o rw e r ei na g r e e m e n tw i t ht h o s eo b t a i n e db y e l i s a ) t h e r e f o r e ，t h ei m m u n o s e n s o rc o u l db eu s e dt or a p i d l yd e t e c tv p i nt h i sp a p e r , i m m u n o l o g i c a la n de l e c t r o a n a l y t i c a lr e s e a r c h e sh a v e b e e nc a r d e do u t ，a n dt h ef r a m eo fq u a l i t a t i v ed e t e c t i o no fv ph a sb e e n c o n s t r u c t e d ，w h i c hc o n s i d e r e dv p a st h ee x p e r i m e n t a lm o d e l t h em e t h o d s a l s oc o u l db eu s e dt os t u d yo t h e ra n t i g e n - a n t i b o d y k e y w o r d s ：1 4 b r i op a r a h a e m o l y t i c u s ；e l e c t r o c h e m i c a li m m u n o s e n s o r ； s c r e e n - p r i n t e de l e c t r o d e ；n a n o - a u ；c y c l i cv o l t a m m e t r y ；l a s e rs c a n n i n g c o n f o c a lm i c r o s c o p e i x 浙江工商大学硕士学位论文 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 本人为获得浙江工商大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的 材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 签名： 珲蒸颦一日期：刁年月2 日 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解浙江工商大学有关保留、使用学位论文 的规定：浙江工商大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的 复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内 容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 签名：导师签名： 日期： i v 浙江工商大学硕士学位论文 第一章绪论 1 食品安全与细菌性食物中毒 1 9 9 6 年，世界卫生组织( w h o ) 将食品安全定义为“对食品按其原定用途进行 制作和食用时不会使消费者受害的一种担保”【1 】口影响食品安全的因素非常多，细 菌性食物中毒是其中一个非常重要的因素。在我国，细菌性食物中毒是所有食物 中毒中最普遍、最具暴发性的一种食物感染。国家食源性疾病监测网分析1 3 个监 测地区1 9 9 2 2 0 0 1 年食源性疾病暴发上报资料后得出，十年间共上报57 7 0 件食 源性疾病暴发事件，涉及患者人数达1 6 29 9 5 人。微生物引起的食源性疾病事件和 涉及人数最多，分别占总体的3 8 5 和5 0 9 ；其中副溶血性弧菌( 3 1 1 ) 是主要的 病因物质1 2 1 。由于缺乏快速诊断及溯源技术，食源性疾病漏报率极高，据w h o 估 计，发展中国家食源性疾病漏报率高达9 5 以上。我国目前掌握的食物中毒数据 也可能仅为我国实际发生的食源性疾病的“冰山一角”1 3 1 。 2 副溶血性弧菌的危害及其检测现状 2 1 副溶血性弧菌及其危害 副溶血性弧菌( f i b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s ，v p ) 是一种嗜盐性细菌，通常存在于近 海海水、海底沉积物、浮游生物、海产品( 鱼类和贝类) 及腌渍食品中，是夏秋季沿 海地区引发食物中毒的首要病原菌。1 9 5 0 年，v p 首次在日本大阪引起食物中毒并 暴发流行1 4 j 。 v p 为革兰氏阴性、无芽孢、具有鞭毛的杆菌，一般大小为( 0 3 o 7 ) , u m x ( 1 2 ) m 【4 】。v p 生长的最适n a c l 含量为2 4 ，最适p h 为7 6 8 6 ，最适温度为 3 0 3 5 。c 【5 1 。v p 在淡水中生存2d ，在海水中则可生存4 7d 以上【6 1 。 大多数v p 致病菌株能使人、免等动物红细胞破裂，称为神奈川现象( k a n a g a w a p h e n o m o n o n ，k p ) ，此为鉴定菌株是否有致病性的重要指标。耐热溶血毒素是致病 的主要物质，该毒素为不含糖或脂质的蛋白质，由两个相同的亚单位组成，分子 量4 20 0 0 。其溶血机制可能是与动物红细胞膜表面的神经节育脂受体结合而导致 溶血。人多因食入未煮熟的海产品或污染此菌的盐渍食物而感染，潜伏期为2 2 6 h ，最短仅1h ；主要症状为腹痛、腹泻、呕吐和发热等，粪便为水样，少数呈血 1 浙江工商大学硕士学位论文 水样或粘液血便。v p 感染者一般在l 7d 内恢复，若病后免疫力不强，可重复感 染吲。 我国华东沿海地区海水v p 检出率为5 7 4 6 6 5 ；海产鱼虾平均带菌率为 4 5 6 4 8 7 ，夏季可高达9 0 。该地区夏秋季淡水鱼虾带菌率高达5 0 6 9 5 。 此菌繁殖速度快，传代时i 日j 仅8m i n 左右，因此鲜鱼在很短时问内就可被v p 污染。 2 0 0 4 年6 月2 4 同中午，舟山某跨海大桥6 名建设民工在某饭店就餐后出现恶 心、呕吐和腹泻等症状，经流行病学调查、临床症状和实验室证实为1 起由v p 污 染引起的食物中毒1 8 1 。 2 2 副溶血性弧菌的检测现状 v p 是海产品检测的一项重要指标。我国农产品安全质量无公害水产品安全 要求( g b1 8 4 0 6 扯2 0 0 1 ) 中规定副溶血性弧菌不得检出【9 】。欧盟2 0 0 1 年4 6 6 号指 令【1 0 l 要求致病菌、细菌总数控制在5 x 1 0 5 g ( 3 0 。c ) 内，其中沙门氏菌、金黄色葡萄 球菌、单胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌和大肠杆菌不得检出。美国、 同本对进口水产品安全要求中规定各种致病微生物均不得检出( 沙门氏菌、金黄色 葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌和大肠杆菌等v 1 1 】。2 0 0 1 年国家出入境检验检疫局和大韩民国海洋水产部签订的中韩进出口水产品卫生 管理协议 1 2 1 中规定对于无需蒸煮即可食用的冻鱼及软体贝类，其副溶血弧菌检 测须为阴性。 目前，国内v p 的标准检测方法是g b t4 7 8 9 7 - 2 0 0 3 廿】，该方法准确性高；但 检测周期通常需要3 5d ，操作过程比较繁琐。k p 溶血试验、免疫学方法( e l i s a ) 、 核酸杂交和p c r 都可以快速检测v p 堋。 1 9 9 6 年，台湾c h a n gt c 等利用荧光免疫显微镜快速检验牡蛎中v p ，检 测限为1 7c f u g 。1 9 9 6 年，印度k a r u n a s a g a ri 等【1 6 1 采用p c r 快速检测海产品中神 奈川阳性v p ，1 0 个以内的v p 可以被检出。1 9 9 7 年，任少章掣1 刀利用p c r 检测 粪便中v p 的t d h 基因。1 9 9 7 年，封幼玲等【1 8 l 应用p c r 快速检测食品中v p 。1 9 9 9 年，美国b c j ak 等【1 9 i 利用多重p c r 检测贝壳中总的和溶血性v p ，检出限为l o i c f u g ，检测时间8 h 。 2 0 0 2 年，美国k h a naa 等l 刎采用基于属间保守序列的p c r 检测v p 。2 0 0 2 年，香港k o n gr y c 等1 2 1 1 采用多重p c r 检测海水中包括v p 在内的6 种致病微 生物。2 0 0 3 年，美国b l a c k s t o n egm 等【2 2 l 采用实时p c r 检测牡蛎中致病性v p ， 2 浙江工商大学硕士学位论文 检测时问 3 0m v 为阳性，a e 吕 苗 t s 图1 - 9 差分脉冲伏安法中电位随时间的变化关系 f i g 1 - 9 t h ed e p e n d e n c eo f p o t e n t i a l o i l t h e t i m e o f d i f f e r e n t i a l p u l s e v o l t a m m e t r y 5 6 电化学免疫传感器的发展趋势【3 5 , 5 6 1 由于其操作简便、快速和灵敏度高等优点，电化学免疫传感器在社会各个领 域的应用越来越广泛，并正朝着如下方向发展：( 1 ) 标记物种类层出不穷，灵敏度 不断提高。从电活性分子和酶标记发展到用亲和素、纳米金、碳纳米管、磁性颗 粒和金属离子等物质来标记；( 2 ) 向微型化、商品化方向发展，低成本的一次性免 疫传感器潜力巨大；( 3 ) 向集成化方向发展，开发微型生物芯片；( 4 ) 与计算机联 用，向智能化和自动化方向发展；( 5 ) 可在传感界面上修饰多种生物组分，从而实 现多元组分同时测定；( 6 ) 应用范围日渐扩大，已深入到食品检测、环境监测、临 床诊断和军事等领域。 随着分子生物学、材料学、微电子学和光纤化学等学科的迅猛发展，免疫传 感器会逐步由实验室小规模制备转变为工厂大规模批量生产，并在食品检测、临 床诊断、环境监测、地质勘探、通讯、军事、交通管理和汽车工业等方面起着日 益重要的作用。 6 抗体固定化方法 抗体固定化方法1 3 3 , 5 7 , 5 8 1 是研制免疫传感器的关键技术之一，其直接决定着免疫 浙江工商大学硕士学位论文 传感器的性能。抗体固定化方法应满足以下条件：固化后的抗体仍能保持良好的 生物活性和高度选择性；固定化层需具有良好的稳定性和耐用性，能适应多种测 试环境。抗体固定化方法大致可划分为4 类：吸附法、电聚合法、包埋法和共价 键交联法。 6 1 吸附法 6 1 1 物理吸附法 抗体在电极表面的物理吸附是一种较为简单的固定化技术，此法无需化学试 剂，只需极少的活化或者清洗步骤。与其他方法相比，物理吸附法对抗体活性影 响较小，但对溶液p h 、温度、离子强度和电极基底状况较为敏感，并且抗体易从 电极表面脱落。 此法主要依靠极性键、氢键、疏水力和兀电子的帽互作用将抗体吸附在不溶性 惰性载体上。常用的载体有多孔玻璃、纤维素膜、琼脂糖和聚氯乙烯膜等。 6 1 2 离子交换吸附法 在适宜的p h 下，具有离子交换作用的载体与