（食品科学专业论文）蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究.pdf

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 乃如需保密，解密时间年 月 日 谚 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 金t 岛哆 时间：2 0 f o 年 6 月2 0 日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文( 即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文) 在解密后适用于本授权书。 学位论文作者始镓物 导师签名：马吴例 签名日期：洳f o 年月2 0 日 签名日期：劲矽年多月多秒日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 蛋清中溶茵酶的高效提取及其定量测定方法研究 目录 摘要i a b s t r a c t 。i i i 缩略语表v 第一章文献综述l 1溶菌酶的结构与性质。l 1 1溶菌酶的结构与抑菌机理1 1 2溶菌酶的理化性质2 2溶菌酶的分离纯化研究进展。2 2 1食盐直接结晶法3 2 2离子交换色谱法3 2 3亲和色谱法4 2 4膜色谱技术4 2 5超滤法4 2 6反胶团萃取法5 2 7膨胀床吸附法6 2 8分子印迹技术6 3溶菌酶的应用研究。6 3 1溶菌酶在食品中的应用6 3 1 1 在乳制品中的应用6 3 1 2 在水产品及肉制品保鲜中的应用7 3 1 3 在果蔬保鲜中的应用7 3 1 4 在低度酒类及饮料中的应用7 3 1 5 在其他食品中的应用8 3 2溶菌酶在医学中的应用8 3 2 1 在多种疾病诊断方面的应用8 3 2 2 在抗菌消炎、增强免疫力方面的应用8 3 3溶菌酶在生物工程中的应用8 4课题构想9 4 1本课题研究意义9 4 2本课题研究内容9 第二章离子交换法提取鸡蛋清溶菌酶。l1 l材料与方法1 1 1 1实验材料1 1 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 1 1 1 原料1 1 1 1 2 试剂1 1 1 1 3 主要仪器1 2 1 2实验方法1 2 1 2 1 溶菌酶标准曲线的绘制1 2 1 2 2 阳离子交换树脂提取鸡蛋清溶菌酶工艺1 3 1 2 3 单因素实验1 4 1 2 3 1 树脂种类对溶菌酶提取效果的影响1 4 1 2 3 2 树脂用量对溶菌酶提取效果的影响1 4 1 2 3 3 吸附时间对溶菌酶提取效果的影响1 4 1 2 3 4 洗脱液浓度对溶菌酶提取效果的影响1 4 1 2 3 5 洗脱时间对溶菌酶提取效果的影响1 4 1 2 4 正交实验15 1 2 5 溶菌酶粗品的超滤纯化工艺1 5 1 2 6 洗脱液中溶菌酶浓度的测定1 5 1 2 7 蛋清溶菌酶得率的计算1 6 1 2 8 膜通量的计算1 6 1 2 9 比浊法测定溶菌酶活力1 6 1 2 9 1 培养基的制备1 6 1 2 9 2 溶壁微球菌菌体活化1 6 1 2 9 3 底物菌悬液的制备1 7 1 2 9 4 酶液的制备1 7 1 2 9 5 活力测定1 7 1 2 9 6 溶菌酶活力的计算17 1 2 1o 数据分析17 2结果与分析18 2 1树脂种类对溶菌酶提取效果的影响。l8 2 2树脂用量对溶菌酶提取效果的影响。1 8 2 3 吸附时间对溶菌酶提取效果的影响1 9 2 4洗脱液浓度对溶菌酶提取效果的影响。1 9 2 5洗脱时间对溶菌酶提取效果的影响。2 0 2 6正交实验结果及模型分析2 0 2 6 1 正交响应面组合设计实验结果2 0 2 6 2 回归模型的建立与检验2 0 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 2 6 3 回归模型的分析2 2 2 6 4 验证试验2 4 2 7溶菌酶粗品的超滤除盐及浓缩2 5 2 8 溶菌酶的得率和活性2 5 3小结与讨论2 5 第三章超滤法分离鸡蛋清溶菌酶2 7 1材料与方法2 8 1 1实验材料2 8 1 1 1 原料2 8 1 1 2 试剂2 8 1 1 3 主要仪器。2 8 1 2实验方法。2 8 1 2 1 超滤设备及膜的准备2 8 1 2 2 蛋清料液的前处理2 9 1 2 3 蒸馏水超滤实验3 0 1 2 4 超滤法直接分离蛋清溶菌酶的实验设计一3 0 1 2 4 1 跨膜压力对溶菌酶分离效果的影响3 0 1 2 4 2 搅拌速度对溶菌酶分离效果的影响3 0 1 2 4 3 料液稀释倍数对溶菌酶分离效果的影响3 0 1 2 4 4 溶液p h 值对溶菌酶分离效果的影响3 0 1 2 5 膜通量的计算31 1 2 6 总蛋白含量的测定31 1 2 7 溶菌酶得率的计算。31 1 2 8 比浊法测定溶菌酶活力3l 1 2 9 溶菌酶产品纯度的鉴定3 l 2 结果与讨论3l 2 1蒸馏水超滤实验31 2 2跨膜压力对溶菌酶分离效果的影响3 3 2 3搅拌速度对溶菌酶分离效果的影响3 3 2 4 料液稀释倍数对溶菌酶分离效果的影响3 4 2 5 溶液p h 值对溶菌酶分离效果的影响3 4 2 6溶菌酶的得率和活性3 7 2 7溶菌酶的纯度鉴定3 7 2 8溶菌酶制品的比较分析3 8 r 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 3小结与讨论3 8 第四章金纳米粒子做探针共振瑞利散射光谱法测定溶菌酶4 0 1材料与方法4 0 1 1实验材料4 0 1 1 1 原料4 0 1 1 2 试剂4 1 1 1 3 主要仪器4 1 1 2 实验方法4 1 1 2 1 主要试剂的配制4 1 1 2 2 金纳米粒子的制备4 2 1 2 3 共振r a y l e i g h 散射光谱( r r s 光谱) 的测定4 2 1 2 4 非线性散射光谱( s o s 、f d s 光谱) 的测定4 2 1 2 5 吸收光谱的测定4 3 1 2 6 样品中溶菌酶的定量测定4 3 2 结果与讨论4 3 2 1 金纳米粒子及其与溶菌酶结合产物的透射电子显微镜图4 3 2 2共振瑞利散射光谱( r r s 光谱) 4 4 2 3吸收光谱4 5 2 4非线性散射光谱( s o s 光谱和f d s 光谱) 4 6 2 5 溶液p h 值对a - u 1 ) r z 体系r r s 散射强度的影响4 7 2 6 金纳米溶液用量对a u 1 y z 体系r r s 散射强度的影响4 7 2 7 试剂加入顺序对a u - l y z 体系r r s 散射强度的影响4 8 2 8金纳米粒子与溶菌酶结合产物r r s 强度的稳定性4 9 2 9金纳米粒子与溶菌酶结合产物r r s 散射强度增强的机理探讨4 9 2 1 0 共存物质的影响。5 1 2 11 标准曲线的建立5 2 2 12 分析应用5 2 2 1 2 1合成样品中溶菌酶的定量测定5 2 2 1 2 2 新鲜鸡蛋清中溶菌酶含量的测定5 3 3小结与讨论5 4 第五章溶菌酶的酶学特性及其体外抑菌活性研究5 5 1材料与方法5 5 1 1实验材料5 5 1 1 1 原料5 5 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 1 1 2 试剂5 5 1 1 3 主要仪器5 6 1 2实验方法5 6 1 2 1 比浊法测定溶菌酶活力。5 6 1 2 2 溶菌酶的酶学性质实验设计。5 6 1 2 2 1 p h 值对溶菌酶活力的影响5 6 1 2 2 2 温度对溶菌酶活力的影响5 6 1 2 2 3 溶菌酶的p h 稳定性5 7 1 2 2 4 溶菌酶的温度稳定性5 7 1 2 2 5 金属离子对溶菌酶活力的影响5 7 1 2 2 6 表面活性剂对溶菌酶活力的影响5 7 1 2 3 溶菌酶的体外抑菌活性研究5 7 1 2 3 1 培养基的制备5 7 1 2 3 2 菌株活化培养5 8 1 2 3 3 溶菌酶样品液的制备5 8 1 2 3 4 溶菌酶抑菌活性的测定5 8 1 2 3 5 最小抑菌浓度( m i c ) 和最小杀菌浓度( m b c ) 的测定5 8 2 结果与分析。5 9 2 1 p h 值对溶菌酶活力的影响5 9 2 2温度对溶菌酶活力的影响5 9 2 3溶菌酶活力的p h 稳定性6 0 2 4溶菌酶活力的温度稳定性6 0 2 5 金属离子对溶菌酶活力的影响6 l 2 6表面活性剂对溶菌酶活力的影响6 1 2 7溶菌酶对三种供试菌株的抑制作用6 2 2 8溶菌酶的最小抑菌浓度( m i c ) 和最小杀菌浓度( m b c ) 6 3 3小结与讨论6 3 第六章结论与展望6 4 1结论6 4 2实验创新点6 4 3 展望6 5 参考文献6 6 致谢7 5 发表论文情况7 6 r l 1。 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ - _ _ - _ - - - _ _ - - _ - - _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ - _ - _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ _ _ - _ _ _ _ _ - _ - _ _ _ _ _ _ _ - _ - - - _ - _ _ - - _ _ _ - - _ - _ _ _ - _ _ - _ - _ _ _ _ - _ - - _ _ _ 一 摘要 本文采用多种现代分离技术对鸡蛋清中的溶菌酶进行了提取分离，比较了不同 方法对分离效果的影响；并利用新兴的共振瑞利散射技术建立了溶菌酶的快速检测 方法；另外对溶菌酶酶学性质及其体外抑菌活性进行了初步探讨。主要研究结果如 下： 采用离子交换法提取鸡蛋清溶菌酶，考察了离子交换树脂种类、用量、吸附反 应时间、洗脱液浓度和洗脱时间等对溶菌酶提取效果的影响，采用三因素三水平正 交响应面组合设计进行实验，对提取工艺进行了优化，建立了树脂用量、吸附时间、 洗脱液浓度三个提取工艺参数间的数学模型y = 0 3 3 9 6 6 7 + 0 0 4 1x l + 0 0 3 8 3 7 5x 2 0 0 2 1 3 7 5x 3 + 0 0 0 9 2 5x i x 2 0 0 0 4 2 5x 1 x 3 0 0 1 0 5x 2 x 3 - 0 0 5 1 5 8 3x i z 一0 0 6 8 8 3 3 x 2 2 0 0 3 9 8 3 3x 3 2 ，得到最佳的提取工艺条件为：树脂用量占蛋清液体积的3 2 ， 吸附时间6 5h ，硫酸铵洗脱液的质量浓度为9 3 。在此条件下提取的溶菌酶得率 为0 3 2 4 ，酶活力为1 6 3 0 0u m g 。 将离子交换法制得的溶菌酶粗品用超滤法除盐，选择截留分子量为1 0 0 0 0 的聚 醚砜膜，跨膜压力设为o 2m p a ，搅拌速度为2 0 0r m i n ，研究了超滤除盐过程中浓 缩液体积、膜通量以及脱盐率的关系，得出当超滤至浓缩液体积为原始料液体积的 1 0 左右时，脱盐效果最好，可以除去9 0 以上的硫酸铵，此时溶菌酶得率为 0 2 7 5 ，酶活力为2 1 5 0 0u m g 。 此外，本实验还研究了超滤法直接从蛋清液中分离溶菌酶的工艺条件，探讨了 跨膜压力、搅拌速度、料液稀释倍数及溶液p h 值对膜通量和蛋白质渗透率的影响， 得到最佳的超滤条件：0 1m o l l n a c i 溶液以1 ：1 ( v v ) 的比例稀释蛋清液，料液 p h 值6 5 ，跨膜压力0 2m p a ，搅拌速度2 0 0r m i n ，在此条件下分离鸡蛋清中溶菌 酶，得率为0 3 0 1 ，酶活力为18 2 0 0u m g 。 以金纳米粒子作探针，建立了共振瑞利散射光谱法定量测定溶菌酶的方法。研 究了金纳米溶菌酶体系的共振瑞利散射( i 汰s ) 光谱、非线性散射( s o s 和f d s ) 光谱和吸收光谱特征，并探讨了金纳米粒子与溶菌酶反应的最适宜条件，包括：溶 液p h 值、金纳米粒子用量、试剂混合顺序以及共存离子等，确定了反应的最优条 件，结果表明共存离子对共振瑞利散射法测定溶菌酶的影响很小。本实验还初步探 讨了导致体系共振瑞利散射光强度显著增强的原因。该溶菌酶检测方法灵敏度高， 检出限为3 0 1n g m l ，且具有较好的选择性，应用于合成样品和新鲜鸡蛋清样品中 溶菌酶含量的测定，结果令人满意。 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 溶菌酶的酶学特性研究表明：其最适反应p h 值约为6 ，最适反应温度为5 5 ； 溶菌酶在p h 值为6 7 和温度为2 0 6 0 范围内，能较好的保持酶活，且温度 变化对酶活力影响很小；另外大部分金属离子能与溶菌酶产生良好的配伍作用，对 酶活力影响不大，其中n a + 、c a 2 + 、m n 2 + 对溶菌酶有一定的激活作用；几种表面活 性剂都对溶菌酶活力有一定抑制作用，但抑制作用相对较弱。 溶菌酶的体外抑菌实验表明：其对大肠杆菌、沙门氏菌有很好的抑制效果，在 较高浓度下对金黄色葡萄球菌也有一定的抑制作用，对三种菌的最小抑菌浓度 ( m i c ) 和最小杀菌浓度( m b c ) 分别是e c o l i0 3 1 3m g m l 和0 6 2 5m g m l ，s a u r e u s 1 2 5m g m l 和5 0m g m l ，s a l m o n e l l a0 6 2 5m g m l 和1 2 5m g m l 。 关键j 间：溶菌酶；离子交换；超滤；共振瑞利散射；酶学性质；体外抑菌 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 a bs t r a c t i nt h i sp a p e r ，t h el y s o z y m ew a se x t r a c t e da n dp u r i f i e df r o mc h i c k e ne g gw h i t e t h r o u g hm o d e ms e p a r a t i o nt e c h n i q u e s a n dt h es e p a r a t i o ne f f i c i e n c yo fd i f f e r e n tp r o c e s s w a sc o m p a r e d i na d d i t i o n , an e wr a p i dm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fl y s o z y m eu s i n g r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n gt e c h i q u eh a sb e e nd e v e l o p e d f i n a l l y , t h ee n z y m o l o g i c a l p r o p e r t i e sa n dv i t r o a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t yo fl y s o z y m ew e r ea n a l y z e d t h e m a i n i n v e s t i g a t e dr e s u l t sa r el i s t e da sf o l l o w s ： t h ec h i c k e n e g g w h i t e l y s o z y m e w a sa b s t r a c t e d u s i n gi o n - e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y e f f e c t so ft h er e s i nt y p ea n di t sc o n s u m p t i o n ，a d s o r p t i o nt i m e ， a m m o n i u ms u l f a t ee l u e n tc o n c e n t r a t i o na n de l u t i o nt i m eo nt h ey i e l do fl y s o z y m ew e r e s t u d i e dr e s p e c t i v e l y o p t i m i z et h ee x t r a c t i o np r o c e s su s i n go r t h o g o n a lr e s p o n s es u r f a c e c o m b i n a t i o nd e s i g nw i t ht h r e ev a r i a b l e so fc a t i o ne x c h a n g er e s i nc o n s u m p t i o n ( x o ， a d s o r p t i o nt i m e ) a n da m m o n i u ms u l f a t ec o n c e n t r a t i o n ( x 3 ) t h er e g r e s s i o ne q u a t i o n i sy = 0 3 3 9 6 6 7 + 0 0 4 1x 1 + 0 0 3 8 3 7 5x 2 0 0 2 1 3 7 5x 3 + 0 0 0 9 2 5x 1 x 2 - 0 0 0 4 2 5x i x 3 0 0 1 0 5x 2 x 3 0 0 5 1 5 8 3x 1 2 0 0 6 8 8 3 3x 2 2 0 0 3 9 8 3 3x 3 2 t l l eo p t i m u me x t r a c t i o n c o n d i t i o n sw e r e ：r e s i na c c o u n t sf o r3 2 o ft h ev o l u m eo fe g gw h i t es o l u t i o n ，a d s o r p t i o n f o r6 5ha n dt h em a s sc o n c e n t r a t i o no fa m m o n i u ms u l f a t ee l u t i o n9 3 u n d e rs u c h c o n d i t i o n s ，i tc o u l dp r o d u c el y s o z y m e 晰t hy i e l do f0 3 2 4 a n da c t i v i t yo f16 3 0 0u m g t h el y s o z y m e ，w h i c hw a se x t r a c t e df r o mc h i c k e ne g gw h i t eu s i n gi o n - e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y , w a sf u r t h e rd e s a l t e da n dp u r i f i e db yu l t r a f i l t r a t i o nt e c h n i q u e t h e 10 k d ap o l y e t h e rs u l f o n e ( p e s ) m e m b r a n ew a sc h o s e nf o rt h i sp r o c e s sw i t ht r a n s m e m b r a n e p r e s s u r e0 2m p a , s t i r r e rs p e e d2 0 0 r m i n t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nc o n c e n t r a t ev o l u m e s ， p e r m e a t ef l u xa n dd e s a l i n a t i o nr a t ew a ss t u d i e d a sar e s u l t ，w h e nt h ev o l u m eo ft h e c o n c e n t r a t es o l u t i o nw a s10 o ft h eo r i g i n a lf e e d ，m o r et h a n9 0 o f ( y h 4 h s 0 4c o u l db e r e m o v e d a n dt h el y s o z y m ey i e l dw a s0 2 7 5 ；t h ee n z y m a t i ca c t i v i t yw a s2 15 0 0u m g i na d d i t i o n , t h i sa r t i c l ee x a m i n e st h es e p a r a t i o no fl y s o z y m ed i r e c t l yf r o mn a t u r a l c h i c k e n e g g w h i t es o l u t i o n u s i n g u l t r a f i l t r a t i o n t e c h n i q u e t h e i n f l u e n c eo f t r a n s m e m b r a n ep r e s s u r e ，s t i 玎i n gs p e e d ，f e e ds o l u t i o nd i l u t i o nm u l t i p l ea n dp hv a l u eo n p e r m e a t ef l u xa n dp r o t e i np e r m e a b i l i t yw e r ed i s c u s s e d f i n a l l y , t h eo p t i m u mc o n d i t i o n s f o ru l t r a f i l t r a t i o nw e r eo b t a i n e d ：d i l u t i n gt h ee g gw h i t es o l u t i o nw i t h0 1m o l ln a c l s o l u t i o n 诵t ht h er a t i oo f1 ：l ，p h6 5 ，t r a n s m e m b r a n ep r e s s u r e0 2m p aa n ds t i r r e r i i i r 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 s p e e d2 0 0d m i n s e p a r a t e dl y s o z y m ef r o mc h i c k e ne g g w h i t eu n d e rt h e s ec o n d i t i o n s ，t h e l y s o z y m ey i e l dw a s0 3 0 1 ；e n z y m a t i ca c t i v i t yw a s 18 2 0 0u m g an e wm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fl y s o z y m eb a s e do nr e s o n a n c er a y l e i g h s c a t t e r i n gw i t hg o l dn a n o p a r t i c l e s a sp r o b ew a sp r o p o s e di nt h i se x p e r i m e n t t h e r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n g ( r r s ) s p e c t r u m ，n o n l i n e a rs c a t t e r i n g ( s o sa n df d s ) s p e c t r aa n da b s o r p t i o ns p e c t r u mo ft h eg o l dn a n o p a r t i c l e s - l y s o z y m es y s t e mh a v eb e e n a n a l y z e d a n dt h ee f f e c t so fs e v e r a lf a c t o r so ns c a t t e r i n gi n t e n s i t i e sw e r ei n v e s t i g a t e d ， i n c l u d i n gp hv a l u eo fs o l u t i o n ，a m o u n to fg o l dn a n o p a r t i c l e s ，m i x i n gs e q u e n c eo fe a c h r e a g e n ta n dt h ec o e x i s t i n gs u b s t a n c e s ，e t c t h er e s u l t ss h o w e dt h a t t h ec o e x i s t i n g s u b s t a n c e sh a v el i t t l ei n f l u e n c eo nt h er r si n t e n s i t i e so ft h es y s t e m s m o r e o v e r , t h e p o s s i b l em e c h a n i s mf o rt h er r se n h a n c e m e n t o fg o l dn a n o p a r t i c l e sa n dl y s o z y m e b i n d i n gp r o d u c t sw a sp r e l i m i n a r yd i s c u s s e d t h er r sm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no f l y s o z y m eh a sg o o ds e n s i t i v i t ya n ds e l e c t i v i t y 、析t ht h ed e t e c t i o nl i m i t s3 0 1n g m l a n d i tw a sp r o v e dt h a tt h em e t h o de s t a b l i s h e di nt h i ss t u d yi ss u i t a b l ef o rt h ed e t e r m i n a t i o no f l y s o z y m ei ns y n t h e t i ca n dn a t u r a lc h i c k e ne g g w h i t es a m p l e s t h es t u d i e so ft h ee n z y m o l o g i c a lp r o p e r t i e so fl y s o z y m ei n d i c a t e dt h a ti th a st h e h i g h e s te n z y m ea c t i v i t yw h e np hw a s6a n dt e m p e r a t u r ew a s5 5 i np h6 - 7a n d t e m p e r a t u r er a n g eo f2 0 6 0 ，t h ea c t i v i t yo fl y s o z y m ec o u l db ew e l lm a i n t a i n e da n d w i l ln o tc h a n g eg r e a t l ya l o n gw i t ht h ec h a n g e so ft e m p e r a t u r e m o s to fm e t a li o n s ，w h i c h c a nb ew e l lc o m b i n a t i o nw i t hl y s o z y m e ，h a v el i t t l ee f f e c t so nt h ee n z y m ea c t i v i t y a n d t h el y s o z y m ec o u l db ea c t i v a t e db yn a + 、c a 2 + 、m n + i o n s s e v e r a ls u r f a c t a n t sh a v ea c e r t a i ni n h i b i t o r ye f f e c to nl y s o z y m ea c t i v i t y , b u tt h ei n h i b i t i o ni sr e l a t i v e l yw e a k t h ev i t r oa n t i m i c r o b i a le x p e r i m e n ts h o w e dt h a tt h el y s o y m eh a sb e t t e ri n h i b i t o r y e f f e c to ne c o l ia n ds a l m o n e l l a i ta l s oh a sac e r t a i ni n h i b i t o r ye f f e c t so ns a u r e u sa t h i g h e rc o n c e n t r a t i o n t h em i n i m u mi n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o n s ( m i c ) a n dm i n i m u m b a c t e r i c i d a lc o n c e n t r a t i o n s ( m b c ) a r e0 313m g m la n d0 6 2 5m g m lf o rec o l i ，1 2 5 m g m la n d5 0m g m lf o rsa u r e u s ，0 6 2 5m g m la n d1 2 5m g m lf o rs a l m o n e l l a , r e s p e c t i v e l y k e yw o r d s ：l y s o z y m e ，i o n - e x c h a n g ec h r o m a t o g r a p h y , u l t r a f i l t r a t i o n ，r e s o n a n c e r a y l e i g hs c a t t e r i n g ，e n z y m o l o g i c a lp r o p e r t i e s ，v i t r oa n t i b a c t e r i a la c t i v i t y i v 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 缩略语表 v r 蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究 第一章文献综述 溶菌酶( l y s o z y m e ，e c3 2 1 1 7 ) ，是一种糖苷水解酶，专门作用于微生物细胞壁， 又称胞壁质酶。n i c o l l e1 9 0 7 年发表的枯草芽孢杆菌中的溶解子是已知的对溶菌酶的 最早研究；之后，1 9 2 2 年f l e m i n g 等发现，在人的眼泪、唾液中存在能够溶解细菌 细胞壁从而杀死细菌的酶，并命名为溶菌酶( l e h e n i n g e re ta l ，1 9 9 3 ) 。溶菌酶能够水 解细胞壁肽聚糖结构中的n 乙酰胞壁酸和n 乙酰葡萄糖胺之间的b 1 ，4 糖苷键，因 此可以溶解大多数革兰氏阳性菌的细胞壁而具有溶菌作用，例如可作用于溶壁微球 菌、巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，另外溶菌酶对一些革兰氏阴性菌，如大肠杆菌 ( e s c h e r i c h i ac o l i ) 、伤寒沙门氏菌( s a l m o n e l l a ) ，也有溶菌作用( 船津等，1 9 8 2 ) 。 溶菌酶广泛存在于鸟类和家禽的卵清中，哺乳动物的乳汁、唾液、血液、尿液、 白细胞以及其它体液( 如淋液) 和组织( 如肝、