1挑战杯资料 大挑 校赛 第十一届挑战杯各学院资料汇总初赛-200812 动科学院 何桑

序号： 编码： 第十一届“挑战杯”全国大学生课外学术科技作品竞赛华南农业大学选拔赛作品申报书 作品名称： pIFN-多位点基因打靶载体的构建 所在学院： 动物科学学院 申报者姓名 （集体名称）： 何桑 何英俊 李凯华 袁玉娟 类别：自然科学类学术论文哲学社会科学类社会调查报告和学术论文科技发明制作A类科技发明制作B类说 明1. 申报者应在认真阅读此说明各项内容后按要求详细填写。2申报者在填写申报作品情况时只需根据个人项目或集体项目填写A1或A2表，根据作品类别（自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作）分别填写B1、B2或B3表。所有申报者可根据情况填写C表。3表内项目填写时一律用打印，字迹要端正、清楚，此申报书可复制。4序号、编码由竞赛组委会填写。5学术论文、社会调查报告及所附的有关材料必须是中文（若是外文，请附中文本），请用4号楷体打印在A4纸上，附于申报书后，字数在8000字以内, 调查报告类每篇在15000字以内。6其他参赛事宜请向校团委咨询。联系电话：85283396，电子邮箱：A2申报者情况（集体项目）说明：1.必须由申报者本人按要求填写； 2.申报者代表必须是作者中学历最高者，其余作者按学历高低排列； 3.本表中的学籍管理部门签章视为对申报者情况的确认。申报者代表情况姓名何桑性别男出生年月1989-6-25学院动物科学学院系别、专业、年级动物科学专业2007级学历高中学制4年入学时间2007-9作品名称pIFN-多位点基因打靶载体的构建毕业论文题目通讯地址华南农业大学华山宿舍11栋302邮政编码办公电住地通讯地址华南农业大学华山宿舍11栋302邮政编码住宅电话其他作者情况姓 名性别年龄学历所在单位何英俊男20高中华南农业大学动物科学学院李凯华女22高中华南农业大学动物科学学院袁玉娟女19高中华南农业大学动物科学学院资格认定学院学籍管理部门意见以上作者是否为2009年7月1日前正式注册在校的全日制非成人教育、非在职的高等学校中国籍本科生、硕士研究生或博士研究生。是 否 （学院盖章）2008年 12 月 14 日院、系负责人或导师意见本作品是否为课外学术科技或社会实践活动成果。是 否负责人签名：2008年 12 月14 日B1申报作品情况（自然科学类学术论文）说明：1必须由申报者本人填写；2本部分中的科研管理部门签章视为对申报者所填内容的确认；3作品分类请按作品的学术方向或所涉及的主要学科领域填写；4硕士研究生、博士研究生作品不在此列。作品全称作品分类（D） A机械与控制（包括机械、仪器仪表、自动化控 制、工程、交通、建筑等） B信息技术（包括计算机、电信、通讯、电子等） C数理（包括数学、物理、地球与空间科学等） D生命科学（包括生物、农学、药学、医学、健 康、卫生、食品等） E能源化工（包括能源、材料、石油、化学、化 工、生态、环保等）作品撰写的目的和基本思路本论文通过基因克隆获得猪rRNA基因，并利用其ITS重复序列作为靶位点，以pIFN-为目的基因构建多位点打靶载体，为后期结合精子载体法生产转基因猪提供重要材料。作品的科学性、先进性及独特之处转基因技术育种可以根据人们的需要向动物基因组导入外源基因，甚至可以避开物种间杂交不育的生殖隔离导入外种生物的基因，在较短的时期内培育出自然界不能产生或常规育种方法不能培育或难以培育的动物新品种，从而加快动物改良进程，提高选择效率。猪pIFN-是机体内具有调节免疫应答和抗病毒感染作用的重要细胞因子之一，能够促进T细胞分化成熟和增殖，激活细胞毒性T细胞和NK细胞，增强这些细胞的杀伤活性。从而提高猪的抗疾病能力。本作品所用技术科学、先进，转基因猪可能获得较好的抵抗疾病的能力。作品的实际应用价值和现实意义以pIFN-为目的基因构建多位点打靶载体，为后期结合精子载体法生产转基因猪提供重要材料。如果成功获得转pIFN-基因的猪，将可能提高猪的抗疾病能力，增加养猪生产效益。学术论文文摘在传统的转基因方法中，外源基因一般随机整合到染色体的基因组上或以附加体形式存在，难以在转基因动物体内稳定表达和遗传。利用基因打靶技术可以做到外源基因的定点整合。但是常规的基因打靶又存在技术要求高、打靶效率太低的问题。动物rRNA基因是一种GC含量高、结构复杂的重复序列，以其ITS序列作为基因打靶位点可以显著提高基因的打靶效率，而且使外源基因得到高水平稳定表达。本研究以猪的全基因组DNA为模板成功扩增猪rRNA基因间的ITS重复序列，并以此重复序列作为靶位点，以pIFN-基因为目的基因构建多位点基因打靶载体，为后期结合精子载体法生产转pIFN-基因猪提供载体材料。研究以pUC18质粒作为骨架，从猪基因组DNA扩增HRDS1,并从已有的质粒上获得pIFN-基因，将pIFN-基因插入到pCDNA3.1(+)质粒中，设计引物扩增出含有CMV启动子和BGH终止信号的基因表达盒CMV-IFN。综合分析pUC18和两个序列的酶切位点，首先把猪CMV-IFN表达盒插入pUC18质粒中构建成PUCIFN质粒，然后成功的构建多位点基因打靶载体PUCIFN-HRDS1。作品在何时、何地、何种机构举行的会议上或报刊上发表及所获奖励待发表鉴定结果待鉴定请提供对于理解、审查、评价所申报作品具有参考价值的现有技术及技术文献的检索目录 提交作品时提供申报材料清单（申报论文一篇，相关资料名称及数量） 科研管理部门签章 情况属实。 2008年 12 月 14 日C.当前国内外同类课题研究水平概述说明：1.申报者可根据作品类别和情况填写； 2.填写此栏有助于评审。转基因研究水平：自1982年美国科学家Palmiter等将大鼠生长激素(GH)基因导入小鼠受精卵中获得转基因“超级鼠”以来，转基因动物已经成为当今生命科学中发展最快，最热门的领域之一。1985年，美国人用转移GH基因、GRF基因和IGFl基因的方法，生产出转基因兔、转基因羊和转基因猪。同年，德国Berm转入人的GH基因生产出转基因兔和转基因猪；1987年，美国的Gordon等人首次报道在小鼠的乳腺组织中表达了人的tPA基因；1991年，英国人在绵羊乳腺中表达了人的抗胰蛋白酶基因。随后，世界各国先后开展此项技术的研究，并相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼等动物上获得成功。我国在转基因动物研究方面也取得了较大的进展。1985年首次成功获得转基因鱼，1990年成功研制出转基因猪，1991年获得快速生长的转基因羊。1998年2月中国科学家又获得了在所分泌的乳汁中含有蛋白凝血因子X的转基因山羊。目前大部分转基因家畜均已在我国研制成功。基因打靶水平：基因打靶技术兴起于20世纪80年代（Doetschman et al,1987; Thomas et al,1987; Koller et al,1989）。具体是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。目前国际上已经建立了条件性、可诱导性基因打靶系统，它使得对基因靶位点在时间和空间上的调控更加精确（Orban PC et al,1992; Lakso M et al,1996）。pIFN-研究：pIFN-是机体内具有调节免疫应答和抗病毒感染作用的重要细胞因子之一，能够促进T细胞分化成熟和增值，激活细胞毒性T细胞和NK细胞，增强这些细胞的杀伤活性。pIFN-基因全长为501bp，编码166个氨基酸，前23个氨基酸组成信号肽，后143个氨基酸为pIFN-活性成熟蛋白，不含有半胱氨酸（Kishko et al,1999）。实验表明，重组pIFN-能抑制感染传染性胃肠炎病毒的猪上皮细胞和肺巨噬细胞中的病毒复制；Bautista(1999) pIFN-能明显一只猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在猪肺泡巨噬细胞中的增值（Bautista et al,1999），在抗猪瘟病毒（CSFV）的细胞免疫中发挥重要作用（Suradhat et al,2001）。非病毒源的佐剂功能研究表明，pIFN-能够增强仔猪对痢疾抗原的免疫应答（Heath et al,1990），其在抗沙门氏菌感染中也起重要作用（Bao et al,2000）。据研究报道，通过原核表达系统对pIFN-的体外表达取得了成功（郭瀛军，2001；吴文学等，2002；曹瑞兵等，2004闫丽萍等，2004），且表达产物具有抗病毒的生物学活性（任慧英，2005）。目前，尚无成功地构建转pIFN-基因的打靶载体的报道，也没有发现成功地将pIFN-基因转入家畜体内并得到表达的报道。D.推荐者情况及对作品的说明说明：1由推荐者本人填写； 2推荐者必须具有高级专业技术职称，并是与申报作品相同或相关 领域的专家学者或专业技术人员（教研组集体推荐亦可）； 3推荐者填写此部分，即视为同意推荐； 4推荐者所在单位签章仅被视为对推荐者身份的确认。推荐者情况姓 名刘德武性别男年龄42职称副教授工作单位华南农业大学动物科学学院通讯地址广东省广州市天河区五山路483号华南农业大学动物科学学院邮政编码510642单位电宅电话推荐者所在单位签章刘德武老师是华南农业大学动物科学学院副教授 （签章） 2008 年 12 月 14 日请对申报者申报情况的真实性作出阐述申报者在本校动物遗传育种实验室完成上述工作，申报内容属实请对作品的意义、技术水平、适用范围及推广前景作出您的评价转基因猪的生产是目前国内外研究的热点问题。08年我国发布的重大转基因专项中就将转基因猪新材料的培育作为重要内容。转pIFN-基因的打靶载体的构建对进一步生产转基因猪打下了良好的基础。转pIFN-基因猪的生产将为培育抗病新品种提供新材料。其它说明推荐者情况姓 名吴珍芳性别男年龄38职称教授工作单位华南农业大学动物科学学院通讯地址广东省广州市天河区五山路483号华南农业大学动物科学学院邮编5106