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第十一单元 现代生物科技专题 11.1 基因工程1(2016高考全国乙卷)某一质粒载体如图所示,外源dna插入到ampr或tetr中会导致相应的基因失活(ampr表示氨苄青霉素抗性基因,tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用bamh 酶切后,与用bamh 酶切获得的目的基因混合,加入dna连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有_(答出两点即可),而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是_;并且_和_的细胞也是不能区分的,其原因是_。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落,还需使用含有_的固体培养基。(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其dna复制所需的原料来自于_。解析:(1)质粒作为载体,应具备的基本条件有:有一个至多个限制酶切割位点,供外源dna片段(基因)插入其中;在受体细胞中能自我复制,或能整合到染色体dna上,随染色体dna进行同步复制;有特殊的标记基因,供重组dna的鉴定和选择;等等。(2)在培养基中加入氨苄青霉素进行筛选,其中未被转化的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌,因不含氨苄青霉素抗性基因而都不能在此培养基上存活,二者不能区分。含有质粒载体的大肠杆菌和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因,都能在此培养基上存活,二者也不能区分。若要将含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌进一步筛选出来,还需要使用含有四环素的固体培养基。(3)某些噬菌体经改造后作为载体,导入受体细胞后,其dna复制所需的原料来自于受体细胞。答案:(1)能自我复制、具有标记基因(答出两点即可)(2)二者均不含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均不生长含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒)二者均含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长四环素(3)受体细胞2(2016高考全国丙卷)图(a)中的三个dna片段上依次表示出了ecor 、bamh 和sau3a三种限制性内切酶的识别序列与切割位点,图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的ecor 、sau3a 的切点是唯一的)。根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)经bamh 酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被_酶切后的产物连接,理由是_。(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图(c)所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_,不能表达的原因是_。(3)dna连接酶是将两个dna片段连接起来的酶,常见的有_和_,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。解析:(1)由题图可知,bamh 和sau3a 两种限制性内切酶的共有识别序列是,二者切割可以形成相同的黏性末端,因此经bamh 酶切得到的目的基因可以与图(b)所示表达载体被sau3a酶切后的产物连接。(2)在基因表达载体中,启动子应位于目的基因的首端,终止子应位于目的基因的尾端,这样基因才能顺利地转录,再完成翻译过程,即顺利表达。图中甲所示的目的基因插入在启动子的上游,丙所示目的基因插入在终止子的下游,二者的目的基因均不能被转录,因此目的基因不能表达。(3)常见的dna连接酶有e.colidna连接酶和t4dna连接酶,其中t4dna连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端。答案:(1)sau3a两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端(2)甲和丙甲中目的基因插入在启动子的上游,丙中目的基因插入在终止子的下游,二者的目的基因均不能被转录(3)e.colidna连接酶t4dna连接酶t4dna连接酶3(2014高考新课标全国卷)植物甲具有极强的耐旱性,其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因,并将其转移到耐旱性低的植物乙中,有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题:(1)理论上,基因组文库含有生物的_基因;而cdna文库中含有生物的_基因。(2)若要从植物甲中获得耐旱基因,可首先建立该植物的基因组文库,再从中_出所需的耐旱基因。(3)将耐旱基因导入农杆菌,并通过农杆菌转化法将其导入植物_的体细胞中,经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达,应检测此再生植株中该基因的_,如果检测结果呈阳性,再在田间试验中检测植株的_是否得到提高。(4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交,子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为31时,则可推测该耐旱基因整合到了_(填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。解析:(1)基因组文库包含某种生物的全部基因,cdna文库又称为部分基因文库,含有生物的部分基因。(2)植物甲基因组文库中有该种植物的全部基因,从中可筛选出耐旱基因。(3)植物乙的耐旱性低,所以植物乙体细胞作为受体细胞;要确定耐旱基因是否正确表达,应检测该基因的表达产物,对于个体水平的检测,应在干旱的田间进行试验,检测植物乙耐旱性是否得到了提高。(4)将耐旱基因看作a,不耐旱基因看作a,aaaa耐旱与不耐旱数量比为31,则耐旱基因整合到了同源染色体的一条上。答案:(1)全部部分(2)筛选(3)乙表达产物耐旱性(4)同源染色体的一条上4(2012高考新课标全国卷)根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)限制性内切酶切割dna分子后产生的片段,其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用ecor切割后产生的片段如下:aattcg gcttaa为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的dna除可用ecor切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是_。(3)按其来源不同,基因工程中所使用的dna连接酶有两类,即_dna连接酶和_dna连接酶。(4)反转录作用的模板是_,产物是_。若要在体外获得大量反转录产物,常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外,_和_也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是_。解析:此题考查基因工程应用的相关知识。(1)dna分子经限制酶切割产生的dna片段末端通常有黏性末端和平末端两种类型。(2)为使运载体与目的基因相连,应使二者被切割后产生的末端相同,故用另一种限制酶切割产生的末端必须与ecor切割产生的末端相同。(3)根据酶的来源不同,dna连接酶分为ecoli dna连接酶和t4dna连接酶。(4)以rna为模板,合成dna的过程称为逆转录,若要体外获得大量dna分子,可以使用pcr技术。(5)在基因工程中,通常利用质粒作为运载体,另外噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。(6)大肠杆菌作为受体细胞时,常用ca2处理,使之成为能吸收周围环境中dna
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