紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量.doc

紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度1、 引言维生素C（抗坏血酸）和维生素E(-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。2、实验原理根据朗伯比尔定律，用紫外可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。混合组分中在1处的吸收等于组分A和组分B分别在1处的吸光度之和A1A+B，即：A1A+B=1AbcA+1BbcB同理，混合组分在2处吸光度之和A2A+B应为：A2A+B=2AbcA+2BbcB若先用A、B组分的标样，分别测的A、B两组分在1和2处的摩尔吸收系数1A、2A、1B、2B；当测的未知试样在1和1处的吸光度A1A+B和A2A+B后，解下列二元一次方程组：A1A+B=1AbcA+1BbcBA2A+B=2AbcA+2BbcB即可求得A、B两组分各自的浓度cA和cB。cA=（A1A+B2B-A2A+B1B）/（1A2B-2A1B）cB=（A1A+B-1AcA）/1B一般来说，为了提高检测的灵敏度，1和2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量3.1、仪器试剂仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(-生育酚)，无水乙醇3.2、实验步骤3.2.1、 检查仪器开机预热20min，并调试至正常工作状态。3.2.2、 配制系列标准溶液（1）配制维生素C系列标准溶液：称取0.0132g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为7.5010-5mol/L。分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。（2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为1.1310-4mol/L. 分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。3.2.3、 绘制吸收光谱曲线以无水乙醇为参比，在220320 nm范围测定维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，确定维生素C和维生素E的最大吸收波长maxVc和maxVe，分别作为1和2。3.2.4、 绘制标准曲线（1）维生素C标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长1和2处测定5个维生素C标准溶液的吸光度值。（2）维生素E标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长1和2处测定5个维生素E标准溶液的吸光度值。3.2.5.、 未知液的测定取未知液5.00 mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇匀.在波长1和2处分别测定其吸光度。3.2.6、 结束工作（1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。（2）清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。4、实验数据处理4.1、1、2测定红色曲线维生素C光度吸收曲线黑色曲线维生素E光度吸收曲线由仪器作图分析直接可得1=273.1nm，2=291.9nm。4.2、Vc与Ve在1、2处的光度吸收图Vc/Ve（mL）Vc1=8Vc2=12Vc3=16Vc4=20Ve1=8Ve2=12Ve3=16Ve4=20未知1=273.1nm0.0590.06280.06790.07210.06080.0630.06680.06820.0682=291.9nm0.04030.04190.04250.04380.05740.06490.07520.08160.07244.3、Vc与Ve的标准曲线图 Vc在1处的线性回归方程为：y=1480x+0.04991， 1Vc=1480.Vc在2处的线性回归方程为：y=370x+0.03824，2Vc=370. Ve在1处的线性回归方程为：y=575.22124x+0.0556，1Ve=575.22124. Ve在2处的线性回归方程为：y=1834.070x+0.04076， 2Ve=1834.070.4.4、Vc、Ve的浓度A1A+B=0。068 A2A+B=0。07241Vc=1480 2Vc=370 1Ve=575.22124 2Ve=1834.070代入下式有cA=（A1A+B2B-A2A+B1B）/（1A2B-2A1B）cA=3.3210-5mol/L代入下式有cB=（A1A+B-1AcA）/1BcB=3.2810-5mol/L5、结果分析与讨论在本实验中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，这是因为一般紫外光区用石英比色皿,可见光区用玻璃比色皿。石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波长,因为玻璃不透紫外光。本实验中所用的参比溶液为乙醇，参比溶液又叫空白溶液，测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液，主要是用作空白调零，即直接从仪器上减去空白试验产生的干扰值。因此本实验中根据维生素C、E的溶解性质，需要用乙醇作为本次实验的参比溶液而不是水。紫外可见光度法测定参数是吸光度A，该值与入射光强度和透射光比值有关，入射光增大，透射光也增大，增大检测器的放大倍数，也影响入射光和透射光的检测，而且除待测物之