《DNA的粗提取与鉴定》复习要点及延伸题例析.doc

DNA的粗提取与鉴定复习要点及延伸题例析曾小军（江西省泰和县第二中学 343700）一、复习要点提炼1 制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，使血液分层，取下层血细胞沉淀。获取较多DNA的关键；向鸡血细胞液中加入足量的蒸馏水并充分搅拌，使细胞膜和核膜充分破裂，释放出核内物质。盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器，因为鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃器皿吸附去一部分，提取的DNA会更少。实验过程中使用塑料的烧杯和试管，可以减少提取过程中DNA的损失。2实验涉及的材料及作用小结试剂操作作用柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固蒸馏水（）与鸡血细胞混合加快血细胞破裂蒸馏水（）加入到溶解有DNA的NaCl溶液中降低NaCl溶液的浓度，析出DNA丝状物2molL-1NaCl溶液加入到含鸡血细胞核内DNA的溶液中溶解DNA0.015molL-1NaCl溶液加入到DNA丝状物中溶解DNA冷却的酒精加入到过滤后含DNA的NaCl溶液中析出DNA丝状物二苯胺试剂加入到溶有DNA的NaCl溶液中（沸水浴）产生特定的颜色反应3、实验中有3次过滤，过滤时使用的纱布的层数与取其滤液或粘稠物有关。第1、3次要取其滤液，使用的纱布为12层；第二次是要取其滤出的粘稠物，使用的纱布为多层。4、实验中出现的丝状物是DNA，但它的直径比DNA分子的直径大很多。实际情况是丝状物中的每一根“丝”是许多DNA分子凝集是一起形成的。因此，丝状物的直径并不表示一个DNA分子直径的大小。5、实验中会出现DNA提取量不足。可能的原因是：经蒸馏水处理的红细胞，使用玻璃棒搅拌的时间偏少，使红细胞破裂数量少，所以释放出来的核物质就少；用氯化钠进行盐析时，加水稀释时氯化钠的浓度没有达到0.14mo/L，使DNA析出得少； 玻璃棒搅拌的方向不一致，影响DNA粘稠物再溶解。6、DNA的沉淀与浓缩原理：除去了蛋白质的核酸溶液，必须再进一步沉淀和浓缩。最常用的方法是酒精沉淀法。就是将含有Na+的DNA溶液，加入到相当于两倍体积的体积分数为95%的冷却的酒精溶液中，均匀后可以使DNA丝状物，可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起（因为玻璃棒有吸附DNA的作用）7、DNA中的核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成一种戊醛（-羟基-酮基戊醛），它再和二苯胺作用而显现蓝色，从而使溶液显浅蓝色。鉴定时溶液蓝色的深浅与溶液中DNA含量多少有关。蓝色较深，则溶液中DNA含量较多。二、延伸题例析例1 下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是 （ ）A、使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B、搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C、在析出DNA粘稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多D、在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却解析：选B。在B项所述的操作中，可以保证DNA分子的完整性，但并不影响提取量。A项中，若鸡血细胞不充分破裂，核物质不能完全释放出来，则提取到的DNA量少；C项操作，若蒸馏水加得过快，刚析出而溶解于其中，对提取量影响较大；D项操作，冷酒精利于DNA的提纯，直接影响提取量。例2 “DNA提取与鉴定”实验中，对三次过滤的叙述中，不正确的是 （ ）A、第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中B、第二次过滤后，使用多层纱布，DNA存在于纱布上的粘稠物中C、第三次过滤后，DNA存在于滤液中，可进一步除去非DNA物质D、上述BC两项均正确解析：A。本题要求学生熟悉实验步骤，重点掌握三次过滤的作用。第一次过滤，DNA应该存在于滤液中。例3 某研究性学习小组，用新鲜菜花（或蒜苗、菠菜）作实验材料，通过材料准备、取材、研磨、过滤、加冷酒精提取、鉴定等，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验。回答下列问题：（1）用新鲜菜花（或蒜苗、菠菜）作实验材料进行“DNA提取与鉴定”实验，必须用到的不同于课本上用鸡血细胞提取与鉴定DNA实验的实验仪器是_。（2）已知SDS（十二烷基磺酸钠）可使蛋白质变性，从而促使蛋白质与DNA分离；EDTA（乙二胺四乙酸二钠）是DNA酶抑制剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA；TriS/HCI：可提供缓冲体系，可使DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。请推测该实验在配制研磨液是应该用到的物质有（ ）A、SDS、EDTA、TriS、蒸馏水B、SDS、EDTA、TriS、HCl、蒸馏水C、SDS、EDTA、TriS、HCl、NaCl、蒸馏水D、SDS、EDTA、TriS、HCl、二苯胺、蒸馏水解析：注意分析题中所给的信息，结合所学的知识进行回答。用新鲜菜花（或蒜苗、菠菜）作实验材料，通过材料准备、取材、研磨过滤、加冷酒精提取、鉴定等，进行“DNA的精提取与鉴定”实验，与课本上用鸡血细胞提取与鉴定DNA实验的不同是多了研磨这一步骤，而研磨要用到研钵。另根据题中所知的SDS、E