磺胺药物残留量检验操作规程

磺胺类药物残留量检验操作规程磺胺类药物残留量检验操作规程 1 引用标准 NY5029 2001 附录 E 磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法 2 适用范围 用于组织中磺胺类药物残留的检验 3 分析方法 3 1 试剂 乙腈 色谱纯 正己烷 分析纯 无水硫酸钠 分析纯 乙酸 分析纯 正丙醇 分析纯 标准品 纯度 99 3 2 标准溶液 3 2 1 标准储备液 准确称取磺胺标准品各 10 0mg 分别入各自的 100ml 容量瓶 用甲醇溶解 并 用甲醇稀释定容 混匀 即得磺胺标准储备液 每种磺胺标准品的浓度为 100 g mL 3 2 2 混合标准中间液 分取磺胺标准储备液各 250uL 入 25mL 容量瓶 用流动相稀释定容 即得 混合标准溶液 该混合标准溶液含每种磺胺 1 0 g mL 3 2 3 混合标准工作液 移取所需容积的混合标准中间液 用流动相稀释定容至 1ml 即得混合标准 工作液 该工作液当日新配 3 3 测定步骤 3 3 1 提取和纯化 称取 2 00g 精确到 0 1g 均匀试样 加入乙腈 5mL 无水硫酸钠 5g 涡旋混合后 以 3000 转 min 的速度离心 5min 分离后的残渣再用 5 mL 乙腈处理 振荡 10min 后 以 3000 转 min 的速度离心 5min 合并两次的上清液 加入正己烷 10mL 振荡 10min 后 以 3000 转 min 的 速度离心 5min 取下层液体 加入正丙醇 10mL 50 以下减压干燥 残留物用 95 乙腈 3mL 溶解 过氧化铝柱 用 95 乙腈 5mL 过柱 不收集 再用 70 乙腈洗脱后 洗脱液中加入 5mL 正丙醇 50 以下减压干燥 残留物用 2 0mL 流动相溶解 用于高效液相色谱仪检测 3 4 色谱条件 a 色谱柱 不锈钢柱 150mm 4 6mm 内径 C18 柱 b 柱温 40 c 流动相 乙腈 甲醇 乙酸 水 2 2 0 2 9 d 流动相流速 1 00mL min e 检测器 UV270nm f 进样量 20 L 3 5 样品测定 分别向液相色谱仪注入等体积标准工作液和样液 在 40 以 1 0mL min 的流速洗脱 用 UV 检测器于 270nm 处检测 记录色谱峰高 并与相应的标准峰高进行比较 外标法定量 样品测定过程中要穿插进标准工作液 以便准确定量 3 6 空白试验 除不加试样外 按上述步骤进行 3 7 结果汁算和表述 用色谱数据处理机或按下列公式计算 式中 X 试样中磺胺类药物残留量 mg kg h 试样中磺胺类药物的峰高 mm h s 标准工作溶液中磺胺类药物的峰高 mm c s 标准工作溶液中磺胺类药物的浓度 g mL m 称取的试样量 g v 试样最终定容体积 mL 注 计算结果需扣除空白值 4 检测精度 4 1 仪器检测限及定量限 项 目 标准溶液 浓度 mg kg 峰高 mm 曲线方程Sy x 仪器的 响应值 YLOD 仪器的响 应值 YLOQ 仪器的 检测限 LOD 仪器的 定量限 LOQ 0 0162 0 02124 0 05300 0 1624 磺胺 甲基 嘧啶 0 21251 y 6271 31x 4 41957 6 03728968713 692355 953330 0028880 009627 0 0153 0 02104 0 05257 0 1534 磺胺 二甲 基嘧 啶 0 21081 y 5425 207x 6 51575 5 82734826810 966351 75770 003220 01074 0 0138 0 0288 0 05212 0 1447 磺胺 间甲 氧嘧 啶 0 2904 y 4555 39x 8 40962 5 3166197487 5402444 75660 00350 01167 0 0250 0 05110 0 1225 磺胺 二甲 氧嘧 啶0 2449 y 2230 522x 2 176707 3 50730734612 698637 24980 004720 01572 0 0226 0 0580 0 1152 磺胺 喹惡 啉 0 2329 y 1671 8876x 7 899598 6 25463683410 864354 64680 011220 03741 mh vch X s s 4 2 添加回收率及方法检测限 项 目 添加标准 溶液浓度 mg kg 检测值 mg kg X 的标准 偏差 方法的检 测限 LOD 方法的定 量限 LOQ 平 均 回收率 磺胺甲基 嘧啶 0 050 0330 0360 0370 0360 00150 0069060 02071871 0 磺胺二甲 基嘧啶 0 050 0340 0350 0360 0360 00082920 0038170 01145270 5 磺胺间甲 氧嘧啶 0 050 0350 0380 0380 0380 0012990 0059810 01794274 5 磺胺二甲 氧嘧啶 0 050 0260 0310 0310 0330 0025860 0119060 03571860 5 磺胺喹惡 啉 0 050