DB37T 3771-2019 枣疯病综合防控技术规程

ICS65.020B 16DB37山东省地方标准DB 37/T 37712019枣疯病综合防控技术规程Technical regulation for integrated management of jujube witches-broom2019 - 12 - 05发布2020 - 01 - 05实施山东省市场监督管理局 发布DB 37/T 37712019前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。本标准由山东农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省果树研究所、山东省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：高瑞、王洁、周广芳、路兴波、杨淑珂、孙红炜、艾呈祥、张琼、王中堂、余贤美。8枣疯病综合防控技术规程1 范围本标准规定了枣疯病发病规律、发病症状、普查、鉴定及综合防治措施。本标准适用于山东省枣产区枣疯病综合防治。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T 393绿色食品农药使用准则NY/T 1276农药安全使用规范总则3 术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1植原体Phytoplasma一类无细胞壁、不能人工培养的单细胞原核生物、专性寄生于寄主植物韧皮部筛管组织和传播介体昆虫的肠道、淋巴、唾腺等组织，对四环素类抗生素敏感。侵染植物后常引起叶片黄化、丛枝、矮化、茎杆带化及花器绿变等症状。3.2枣疯病Jujube witches-broom 由枣疯病植原体（Jujube witches-broom phytoplasma）侵染引起的一种枣树致死性、维管束系统性病害。3.3枣疯病双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测利用枣疯病植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）及碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔进行ELISA检测样品的吸光值（I）与健康植株（H）的吸光值。根据I/H的比值来判断枣疯植原体的存在与否。4 发病规律4.1 传播途径枣疯病植原体主要通过媒介昆虫、嫁接和带病苗木进行传播。4.2 发病特点枣疯病潜伏期及危害情况与品种、生态环境和管理条件等因子有关。在冷凉地区发病较轻，管理粗放的枣树发病较重。品种间枣疯病发生情况差异很大，一般从局部枝条先发病，逐渐蔓延，一般感病枣树发病后，小树1年2年，大树5年6年全树即死亡。5 发病症状5.1 根部症状初期表皮呈褐色，萌生的根蘖呈丛枝状，后期形成点发性溃疡斑，继而枯死。5.2 枝条症状病株枝条的主芽、隐芽和副芽多次萌发，形成节间缩短的细弱丛生状枝条，伴随叶片变小黄化，休眠期不脱落。5.3 花器症状花器退化返祖，花梗延长至正常花梗的3倍6倍，有些病株萼片、花瓣、雄蕊发育成小叶，呈花变叶状；有些病株萼片、花瓣变为绿色，雄蕊和雌蕊败育，呈绿瓣状。5.4 果实症状结果少或不结果，果实小、花脸，肉质硬，口感差。6 普查与鉴定6.1 田间普查每年8月10月进行逐株检查，枝条节间缩短、簇生，叶片黄化变小为病害诊断主要依据，对查出的病株做好明显标记，统计发病率。6.2 室内病原鉴定6.2.1 聚合酶链式反应（PCR）检测方法检测方法见附录A。6.2.2 双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测方法检测方法见附录B。7 防治措施7.1 检疫措施加强枣树接穗、砧木等繁殖材料和苗木的检疫和检测，不使用来自枣疯病发生区的枣苗建园。发现带病或带菌植物繁殖材料应及时销毁，防止病害扩散蔓延。7.2 建园要求7.2.1 园地选择新建枣园宜在没有发生枣疯病的地块建园。7.2.2 立地条件平原、丘陵、山地均可栽培，选择地势较高，土质疏松，耕作层深厚，排水良好的沙壤土或壤土种植。盐碱土壤地区，应选5 cm60 cm土层，总盐量低于0.3 %的地块。7.2.3 品种及苗木选择建园时优先选用耐病品种的苗木、砧木或接穗。推广应用脱毒苗，在网室内建立优良品种无毒采穗圃。7.3 栽培管理措施7.3.1 肥水管理因地制宜，秋季施基肥，适时追肥，合理施用叶面肥。土壤水分保持在田间土壤相对含水量60 %70 %为最佳，根据土壤墒情、不同生长时期适时灌水，并应设置排水沟，雨季及时排水防涝。7.3.2 合理修剪适度修剪，合理整形，提高树体通透性和光照强度。7.4 病株的处理与更新7.4.1 销毁补栽新建园应首先对传病媒介等进行一次防治，然后将病株连根挖除并销毁，经土壤消毒、充分晾晒树坑后再进行补栽。7.4.2 输液治疗在进行疯枝清理后，可辅助树干输液（滴注）延缓病情发展，最佳治疗时期为枣树展叶期。输液治疗方法见附录C。7.5 防治媒介昆虫主要传毒媒介为中华拟菱纹叶蝉（Hishimonoides chinensis A.）、凹缘菱纹叶蝉（Hishimonus selltus U.）、片突菱纹叶蝉（Hishimonus lamellatus C.）和红闪小叶蝉（Typhlocyba sp.）等。可选用内吸性、触杀性的杀虫剂，使用方法按照GB/T 8321、NY/T 393和NY/T 1276执行。AA附录A （规范性附录）枣疯病病原聚合酶链式反应（PCR）检测方法A.1 感病和健康枣树总DNA提取方法采取症状明显的和健康的枣树幼嫩枝条、叶片或者花样本，样本短时间（1周内）可于4 冰箱保存，长时间需于-80 冰箱保存。用商品化植物基因组DNA快速提取试剂盒提取。A.2 PCR扩增引物、反应体系及程序A.2.1.1 以植原体16S rRNA基因通用引物R16mF2（5-CAT GCA AGT CGA ACG GA-3）/R16mR1（5-CTT AAC CCC AAT CAT CGA C-3）进行PCR扩增。并设置健康枣树组织DNA为阴性对照，清水为空白对照。A.2.1.2 PCR 反应体系： PCR反应体系参照Taq 酶说明书。扩增程序： 预变性温度94 ，3 min；然后94变性 45 s，60 退火1 min，72 延伸2 min，35个循环。最后72 延伸10 min。A.3 电泳检测PCR产物于1.0 %琼脂糖凝胶电泳检测。阳性材料直接PCR扩增片段大小约1.4 kb，阴性对照及空白对照均应无扩增片段。A.4 序列测定及分析PCR产物直接送测序公司测序。将所得DNA序列输入GenBank（）进行Blast检索，初步确定病原种类。BB附录B （规范性附录）枣疯病植原体双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测方法B.1 样品处理将疑似病样按照1:10或1:100的比例加入抗原包被缓冲液，研磨后取上清备用。B.2 样品包被取150 L稀释的检测样品液加入96孔酶标板中，以枣疯植原体阳性标准品为阳性对照，以健康枣树标准品为阴性对照，在4 条件下孵育过夜或37 孵育1 h2 h。B.3 洗板将酶联板迅速反扣，弃去孔中液体，每孔加入PBST液200 L，静置3 min5 min后迅速弃去孔中液体，并在吸水纸上扣打几下以尽量除去孔中液体，重复3次。B.4 封闭去除酶标板中的PBST缓冲液，每孔加入150 L的封闭缓冲液，37 恒温箱孵育1.5 h。B.5 洗板同步骤C.3。B.6 加一抗用PBST稀释枣疯植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）至合适的工作浓度（1:1 000），每孔样品加150 L，37 恒温箱孵育2 h。B.7 洗板同步骤C.3。B.8 加酶标抗体每孔加入150 L PBST稀释的碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔（1:5 000），37 恒温箱孵育2 h。B.9 洗板同步骤C.3。B.10 底物显色每孔加底物溶液150 L；室温避光显色30 min60 min； 酶联仪在405 nm下读数。B.11 结果判定I/H=（待测样品读数空白读数）/（阴性样品的读数空白读数）3判断为阳性反应；反之则为阴性。CC附录C （规范性附录）药剂防治枣疯病的方法药剂防治枣疯病的方法见表C.1。表C.1 药剂防治枣疯病的方法药剂选择四环素类农用抗生素使用时间枣树展叶期，5月上旬使用方法配药药液需随用随配。按照药剂使用说明，用适量的干净清水溶解药后，用4层6层纱布或滤纸过滤，减少沉淀。每瓶装药液500 mL。打孔对应疯枝方向在主干距地面20 cm处，向下倾斜45 钻深达木质部2 cm3 cm，孔径0.45 cm的注药孔。若多侧均有疯枝时，打孔数量依据树干直径决定，树干直径10 cm，只需打对应最严重的疯枝方向打1个孔，树干直径10 cm，打2个孔，树干直径每增加10 cm，就多增加1个孔，1棵树最多打4个孔。孔与孔之间沿树干水平均匀分布，垂直有10 cm落差。注意注药孔附近不能有树洞和裂缝，避免造成漏液。输液输液瓶悬挂在距地面至少1.5 m的