15-岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养操作规程

云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码1 10 文件类别工作标准颁发部门质量部文件编号SOP 03 015 00 制 定 审 核 批准 制定日期年 月 日审核日期年 月 日批准日期年 月 日 分发部门质量部 生产部实施日期年 月 日 文件状态修订 口 新订 口 原因 执行 2010 年版药品生产质量管理规范 1 1 目目的的 建立岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 确保仪器的 正确操作 2 2 范范围围 本规程适用于岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养 3 3 责责任任 化验室负责人 化验员 4 4 内内容容 4 1 概述 本系统由四元低压梯度系统输送泵 自动进样器 UV 检测器 柱温箱 LabSolutions 色谱数据工作站和电脑等组成 4 2 原理 储液器中的流动相被高压泵打入系统 样品溶液经进样器进入流动相 被流动相载 入色谱柱固定相内 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数 在两相中 作相对运动时 经过反复多次的吸附 解吸的分配过程 各组分在移动速度上产生较大的 差别 被分离成单个组分依次从柱内流出 通过检测器时 样品浓度被转换成电信号传送 到记录仪 数据以图谱形式打印出来 4 3 技术参数 流量设定范围0 0001 10 mL min流速精度 1 或 2 L min 最大操作压力44MPa进样数216 个样品 外形尺寸 mm410 500 605mm波长重现性 0 1nm 温控精度 0 1 波长范围190 700nm 噪声 2 5 10 6AU漂移100 10 6AU h 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码2 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 4 设备安装位置 设备名称放置房间 LC 2030 型高效液相色谱仪精密仪器室 4 5 操作方法 4 5 1 准备 4 5 1 1 准备所需的流动相 用合适的 0 45 m 滤膜过滤 超声脱气 20 30min 4 5 1 2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱 注意方向 4 5 1 3 配制样品和标准溶液 也可在平衡系统时配制 用合适的 0 45 m 滤膜过滤 4 5 1 4 检查仪器各部件的电源线 数据线和输液管道是否连接正常 4 5 2 开机 接通电源 依次开启高效液相色谱仪开关 电脑主机 显示器 待高效液相色谱 仪自检结束后 打开色谱工作站 4 5 3 等度洗脱 4 5 3 1 排气 打开 Purge 点击程序中的 自动排气 系统自动进行排气 若使用多通道 根 据实际需要选择通道进行排气 如果不出液 用针头接上 p 的管路 进行抽气 至 到有液体从 Purge 这个管路排出 4 5 3 2 参数设定 4 5 3 2 1 波长设定 在 数据采集 窗口的 时间程序视图 中 检测器 A 选择波长 1 输 入所需波长 4 5 3 2 2 流速设定 在 数据采集 窗口的 时间程序视图 中 泵 选择泵总流量 输 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码3 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 入所需流速 4 5 3 2 3 流动相比例设定 在 数据采集 窗口的 时间程序 中 泵 选择所用泵 输 入泵项下所需的浓度比例 4 5 3 3 设置好后 点击 下载 系统自动按照设置好的方法 进行走基线 4 5 3 4 基线平稳后 方可进样 可以进行单次分析或批处理分析 4 5 3 4 1 单次分析 单击 数据采集 窗口助手栏上的 单次开始 图标 设置 样品 名 方法文件 数据文件 样品瓶 样品架 进样体积 等信息 点击确定 系统 即自动进行单次分析 4 5 3 4 2 批处理分析 单击 数据采集 窗口助手栏上的 批处理 图标 从 文件 菜 单中选择 新建批处理文件 设置 样品名 方法文件 数据文件 样品瓶 样品 架 进样体积 等信息 点击保存 保存批处理文件 点击 批处理 助手栏中的 批 处理开始 系统即执行批处理程序 4 5 4 梯度洗脱 4 5 4 1 排气 打开 Purge 点击程序中的 自动排气 系统自动进行排气 若使用多 通道或梯度 根据实际需要选择通道进行排气 如果不出液 用针头接上 p 的管路 进行抽气 至到有液体从 Purge 这个管路排出 4 5 4 2 参数设定 4 5 4 2 1 波长设定 在 数据采集 窗口的 时间程序视图 中 检测器 A 选择波长 1 输 入所需波长 4 5 4 2 2 流速设定 在 数据采集 窗口的 时间程序视图 中 泵 选择泵总流量 输 入所需流速 4 5 4 3 梯度洗脱设置程序 在 数据采集 窗口的 时间程序视图 选择 时间程序 图标中的 LC 时间程序 设置程序洗脱的时间及流动相比例 设置完后应以 controllerstop 控制仪器停止 为结尾 点击 时间程序 查看设置时间程序是否 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码4 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 正确 点击 泵 选择泵 调节压力限制 最大压力设为 20 0MPa 4 5 4 4 设置好后 点击 下载 系统自动按照设置好的方法 进行走基线 4 5 4 5 基线平稳后 方可进样 可以进行单次分析或批处理分析 4 5 4 5 1 单次分析 单击 LC 实时分析 窗口助手栏上的 单次开始 图标 设置 样 品名 方法文件 数据文件 样品瓶 样品架 进样体积 等信息 点击确定 系 统即自动进行单次分析 4 5 4 5 2 批处理分析 单击 数据采集 窗口助手栏上的 批处理 图标 从 文件 菜 单中选择 新建批处理文件 设置 样品名 方法文件 数据文件 样品瓶 样品 架 进样体积 等信息 点击保存 保存批处理文件 点击 批处理 助手栏中的 批 处理开始 系统即执行批处理程序 4 5 5 泵的清洗 检测完毕后 如流动相无盐 酸及缓冲液 可直接用甲醇或乙腈冲洗 30 分钟即 可 如流动相含有盐 酸及缓冲液 先用甲醇 水 10 90 冲流 30 分钟 再用甲醇冲洗 30 分钟即可 4 5 6 样品测试完毕后 绘制标准曲线 方法如下 4 5 6 1 点击 LabSolutions 中的再解析图标 LC 再解析开始 4 5 6 2 单击 再解析 助手栏中的 LC 数据分析 图标 出现 LC 数据分析 窗口 4 5 6 3 选择 文件 菜单中的 打开数据文件 然后选择与测量的数据文件 数据文件 打开 4 5 6 4 单击助手栏中的 向导 图标 出现 化合物向导 4 5 6 5 请确保设置了正确的积分参数 然后单击 下一步 4 5 6 6 记录要识别的峰的保留时间 然后单击 下一步 4 5 6 7 指定定量计算方法和校准曲线类型 然后单击 下一步 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码5 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 5 6 8 设置识别的方法 然后单击 下一步 4 5 6 9 提供化合物表的详细设置 然后单击 完成 4 5 6 10 单击 LC 数据 助手栏中的 应用到方法 图标 4 5 6 11 命名方法文件并单击 保存 4 5 6 12 单击 确定 而不进行任何更改 4 5 6 13 单击 再解析 助手栏中的 校准 图标 4 5 6 14 打开用于生成校准曲线的方法文件 4 5 6 15 拖入需要作校准曲线的数据 即得出校准曲线 4 5 7 使用校准曲线计算数据浓度 4 5 7 1 选择 文件 菜单中的 打开数据文件 然后指定数据文件名 4 5 7 2 选择 文件 菜单中的 加载方法参数 然后指定方法文件名 出现 方法参数 屏幕 4 5 7 3 使用方法文件中的校准曲线计算数据的浓度 4 5 8 出具报告 4 5 8 1 根据需要设置相应的报告格式 4 5 8 2 把测定的数据拖入设置好的报告模块中 即得报告 4 5 9 关机 全部分析完毕后 先关检测器和柱温箱电源 再用适宜的溶剂清洗色谱系统 依 次关闭系统控制器 泵和微机电源 拔下各插头 做好使用记录 4 6 泵的使用和维护注意事项 4 6 1 为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性 必须按照下列注意事项进行操作 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码6 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 6 1 1 防止任何固体微粒进入泵体 因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞 密 封环 缸体和单向阀 因此应预先除去流动相中的任何固体微粒 而常用的方法是滤过 可采用微孔滤膜 0 2 m 或 0 45 m 等滤器 泵的入口都应连接砂滤棒 或片 输液 泵的滤器应经常清洗或更换 4 6 1 2 流动相不应含有任何腐性物质 含有缓冲液的流动相不应保留在柱内 尤其是 在停泵过夜或更长时间的情况下 如果将含缓冲液的流动相留在泵内 由于蒸发或泄 漏 甚至是由于溶液的静置 就可能析出盐的微细晶体 这些晶体将和上述固体微粒 一样损坏密封环和柱塞等 因此 必须泵入加入少量甲醇或乙腈和纯水将泵充分清洗 后 再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂 对于反相键合硅胶固定相 可 以是甲醇或甲醇水 4 6 1 3 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完 否则空泵运转也会磨损柱塞 缸体或密封环 最终产生漏液 4 6 1 4 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力 否则会使高压密封环变形 产生 漏液 4 6 1 5 流动相应该先脱气 以免在泵内产生气泡 影响流量的稳定性如果有大量气泡 泵就无法正常工作 4 6 2 如果输液泵产生故障 须查明原因 采取相应措施排除故障 4 6 2 1 没有流动相流出 又无压力指示 原因可能是泵内有大量气体 这时可打开泄 压阀 使泵在较大流量下运转 将气泡排尽 也可用一个 50ml 针筒在泵出口处帮助抽 出气体 另一个可能原因是密封环磨损 需更换 4 6 2 2 压力和流量不稳 原因可能是气泡 须要排除 或者是单向阀内有异物 可卸 下单向阀 进入丙酮内超声清洗 有时可能是砂滤棒内有气泡 或被盐的微细晶粒或 滋生的微生物部分堵塞 这时 可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡 或将纱滤棒 浸入稀酸内迅速除去微生物 或将盐溶解 再立即清洗 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码7 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 6 2 3 压力过高的原因是管路被堵塞 需要清除和清洗 压力降低的原因则可能是管 路有泄漏 检查堵塞或泄漏时应逐段进行 4 6 3 关于试剂 4 6 3 1 试剂类别 有机溶剂 无机化合物 水 4 6 3 2 试剂的要求 4 6 3 2 1 有机溶剂的级别优级纯以上专用试剂 4 6 3 2 2 无机化合物要求分析纯以上 4 6 3 2 3 水要求是去离子纯净水 4 6 4 流动相 4 6 4 1 无气泡 通过超声脱气 通氦气等方法进行脱气 4 6 4 2 纯净无杂质 常用方法为用 0 45 m 微孔过滤膜进行过滤 4 6 5 色谱柱的注意事项 4 6 5 1 压力 注意每根柱的耐压 最大使用压力 4 6 5 2pH 的范围 不同柱子的 pH 值范围有所不同 4 6 5 3 清洗 柱子需要必要的清洗 请用户参考柱子的说明书 4 6 5 4 保存 长时间不使用柱子时需要用合适的试剂进行保存 请参考柱子的说明书 4 6 6 关于吸滤过滤器堵塞 4 6 6 1 现象 塞吸现象 管路中不断产生气泡 4 6 6 2 处理方式 将吸滤头 1 从溶剂管中拔出 放在正己烷或稀硝酸 一般 10 中超声清洗 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码8 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 6 7 在线过滤器堵塞 4 6 7 1 现象 不连接柱子及管路 混合器 松开泵进混合器或柱子的管路接头 设 定泵流速为 1ml min 泵压力大于 0 3MPa 说明在线过滤器堵塞 4 6 7 2 处理方式 一般建议用户更换新的过滤器 也可以将在线过滤器拆下 用稀硝 酸 浓度小于 10 进行超声清洗 4 6 8 压力波动的原因及处理方法 4 6 8 1 产生波动的原因 有气泡 密封圈有磨损 产生微量的泄液 进口单向阀中有 异物 较常见 在线过滤器 管路 柱子进口处有盐析出或杂物 4 6 8 2 处理方法 流动相进行脱气 排除流路中的气泡 更换密封圈 清洗进出口 单向阀 将单向阀置于烧杯中 用异丙醇进行超声清洗 检查并清洗过滤器及流路 4 6 9 引起柱压升高的原因 4 6 9 1 色谱柱长时间使用后用户发现柱压比以往要高出许多 造成此情况可能由以下 几个因素引起 在线过滤器堵 高压混合器堵 进样器堵 流路中部分细管堵 流通池堵 柱子 内部吸附样品产生堵 4 6 9 2 确认方法 进行分段检测 确认的确是柱子压力高还是以上5 点原因中某个引 起的 4 6 10 进样峰分叉的原因 4 6 10 1 流路及柱子等没有做任何改变的情况下 分析样品时 被检测峰产生分叉 则说明保护柱或分析柱柱效下降 需再生保护柱或分析柱 4 6 10 2 柱的出口到检测池的管路偏长或管路内径宽所致 常用内径 0 3mm 以下 导 致样品扩散 造成峰分叉 4 6 11 什么情况下需更换 D2Lamp 氘灯 云云南南品品斛斛堂堂生生物物科科技技有有限限公公司司 文件名称 岛津 LC 2030 高效液相色谱仪使用 维修 保养操作规程 页 码9 10 文件类别工作标准文件编号SOP 03 015 00 4 6 11 1 显示 D2LampERROR 时 一般情况下认为氘灯不良需更换 4 6 11 2 氘灯超过使用时间 理论为 2000 小时 需要更换氘灯 4 6 12 造成检测池能量低的原因 4 6 12 1 氘灯使用时间过长 大于 2000 小时 灯老化所致 4 6 12 2 光路系统受到污染或老化 说明 检测池能量高低以参比池为准 4 6 13 检测池中有气泡如何排除 一般情况下 很小的气泡会停留在检测池中 所以需要在池管路出口 1 处加一个 背压管 池中气泡不易在池中产生 加背压 出口处加上一段阻尼管增加压力 4 6 14 如何清洗流通池 一般情况下 请