反复流产患者血清MMP—9和TIMP—1的表达

反复流产患者血清MMP9和TIMP1的表达摘要目的探讨反复自然流产患者血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）和其抑制剂（TIMP-1）的表达。方法收集反复自然流产（实验组）血清30份；采集正常早孕需终止妊娠者（对照组）血清30份，用肝素抗凝管空腹取静脉血，分离血浆，测MMP-9及TIMP-1，并对结果进行分析。结果在正常早孕的血清中MMP-9含量均明显高于反复自然流产者，在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者，差异均有高度统计学意义（均P0.01）。结论TIMP-1含量较多可显著减少MMP-9活化及侵袭能力，阐明正常早孕者绒毛组织的侵袭力强于反复自然流产者。关键词基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶抑制剂；反复流产中图分类号R714.21文献标识码A文章编号1673-7210（2013）02（a）-0032-02基质金属蛋白酶（MMPs）是参与细胞外基质降解和重塑正常组织的重要酶类，正常情况下MMPs和其组织抑制物（TIMPs）维持着一个动态平衡，该平衡对妊娠建立极为关键1。本研究通过对反复自然流产患者（实验组）和正常早孕需终止妊娠者（对照组）血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）和其抑制剂（TIMP-1）水平进行检测和临床应用价值评价，以探讨其与相应指标表达的关系，从分子水平研究反复自然流产患者的发病相关因素。1材料与方法1.1材料收集2010年7月2012年3月深圳市宝安区人民医院妇产门诊，其中反复自然流产（实验组）血清30份；采集正常早孕需终止妊娠者（对照组）血清30份，上述病例均符合下列条件：孕周0.05），具有可比性。所有患者均用肝素抗凝管空腹取静脉血，分离血浆，测MMP-9及TIMP-1的含量。1.2试剂采集患者入院后第2天的空腹静脉血3mL，4000r/min离心5min后吸取血清，-75下保存备测。人血清MMP-9和TIMP-1定量酶联检测试剂盒（美国Biosourc公司），酶联免疫吸附测定（ELISA）检测：按双抗体夹心ABC2ELISA法试剂说明操作，对标本和试剂盒提供的标准品进行一次性检测。1.3双抗体夹心ABC2ELISA法检测：采用0.05MPH9碳酸盐包被抗体稀释至蛋白质含量为110g/mL。每个反应孔添加0.1mL，4过夜。次日去掉孔内溶液并洗涤3次，每次3min。加标本样品0.1mL于反应孔中，置37下孵育1h。然后洗涤。于反应孔中加酶标抗体0.1mL，37孵育0.51.0h，洗涤。最后加TMB底物0.1mL，37下1030min。1.4评价标准2于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。1.5统计学方法数据采用SPSS15.0软件包进行处理，计量资料数据以均数标准差（xs）表示，比较采用t检验，以P0.05为差异有统计学意义。2结果反复自然流产患者（实验组）血清30份，正常早孕需终止妊娠者血清30份，测MMP-9和TIMP-1水平：在正常早孕的血清中MMP-9含量均明显高于反复自然流产者，在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者，差异均有高度统计学意义（均P0.01）。见表1。3讨论反复自然流产是指连续发生2次或2次以上的自然流产，病因十分复杂，确切机制尚不明确，可能是多因素共同作用的结果，目前所了解的病因主要包括、遗传、内分泌、感染、免疫等因素3。MMPs家族是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，主要的生理作用是降解细胞外基质（ECM）4。MMPs由5个结构域（除MMP-7外）组成：信号肽域、前肽域、催化域、铰链区、血红素结合蛋白样或纤维结合素样的COOH末端域。MMPs在生理状态下参与胚胎形成，并与一系列妊娠疾病的发病机制有关5-6。MMP-9在排卵前后表达最强，在着床期前后分泌入腺腔和宫腔液中，与胚胎识别有关7-8。本实验选取的病例数据显示，在正常早孕的血清中MMP-9的含量均明显高于反复自然流产者，在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者，笔者查阅和收集了大量有关MMPs及TIMPs与反复流产的相关性的国内外研究的最新文献，初步阐明正常早孕者绒毛组织的侵袭力强于反复自然流产者9-10；TIMP-1含量在正常早孕组中明显低于反复自然流产组，表明在反复自然流产者中绒毛侵袭力相对较弱，可能与反复自然流产的发生相关。本实验目前病例研究初步表明，TIMP-1含量较多可显著减少MMP-9活化及侵袭能力，二者之间可能呈负相关。据此，笔者推测，TIMP-1可能通过抑制明胶酶活化，从而抑制滋养细胞的侵袭能力，参与早孕滋养细胞浸润调控。反复自然流产机制尚不明确。而反复自然流产是妇产科常见病、多发病，严重影响妇女精神健康，给家庭和谐带来不同程度影响并产生巨大的经济压力。因此，探讨反复流产患者是否存在MMPs和（或）TIMPs的表达异常，针对性预防和治疗，能够为不孕患者或辅助生殖技术的研究提供新思路。本研究因关注点的特殊性，从分子水平为进一步明确反复自然流产发病原因提供有力证据。参考文献1赵红彩，钟慧芳，刘燕飞，等.早期妊娠的丢失与MMP-2，MMP-9，及TIMP-1，TIMP-2的研究进展J.中国优生与遗传杂志，2010，18（10）：118-119.2JeziorskaM，NagaseH，SalamonsenLA，etal.ImmunolocalizationofthematrixmetalloproteinasesgelatinaseBandstromelysin1inhumanendometriumthroughoutthemenstrualcycleJ.ReproductionandFertility，1996，107（1）：43-51.3刘春晖，高云荷，郭钰珍.蜕膜组织MMP-9/TIMP-3水平与自然流产关系J.临床与实验病理学杂志，2004，20（5）：551-553.4GuoJ，ZouL.CorrelationofRECKwithmatrixmetalloproteinase-2inregulationoftrophoblastinvasionofearlypregnancyJ.JHuazhongUnivSciTechnologMedSci，2006，26（6）：738-740.5FigueiraRC，GomesLR，NetoJS，etal.CorrelationbetweenMMPsandtheirinhibitorsinbreastcancertumortissuespecimensandincelllineswithdifferentmetastaticpotentialJ.BMCCancer，2009，9（3）：20-23.6乐杰.妇产科学M.7版.北京：人民卫生出版社，2008：83-86.7JokimaaV，OksjokiS，KujariA.AlteredexpressionofgenesinvolvedintheproductionanddegradationofendometrialextracellularmatrixinpatientswithunexplainedinfertilityandrecurrentmiscarriagesJ.MolecularHumanReproduction，2002，8（12）：1111-1117.8ChangCK，HungWC，ChangHC.TheKazalmotifsofRECKproteininhibitMMP-9secretionandactivityandreducemetastasisoflungcancercellsinvitroandinvivoJ.JCellMolMed，2008，12（6B）：2781-2789.9KangHG，KimHS，KimKJ，etal.RECKexpressioninosteosarcoma：correlationwithmatrixmetall