微生物无菌操作技术.ppt

微生物实验无菌测试，微生物接种：将微生物放入适合繁育和繁殖的人工培养基或活生物的过程。微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技术。无菌技术：在微生物实验工作中，控制或防止各种微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和相关措施。无菌操作是微生物接种技术的核心。无菌操作的主要目的：(1)确保实验过程中不被环境中的微生物污染。(2)防止微生物在工作中污染环境或感染工人。微生物接种过程，1，实验材料准备工作(1)培养基准备和相关器具准备(2)灭菌和消毒2，无菌工作(1)接种前准备工作(2)接种，1，实验材料准备工作(1)培养基准备和相关器具准备1，其中最常用的接种工具或移植工具是接种环。3、准备其他器械，(2)灭菌和消毒：用更温和的物理或化学方法杀死物品中绝大多数微生物的措施，实际上是部分灭菌。例如酒精擦。杀菌：使用强有力的物理化学元素的措施，使任何物体或里面的所有微生物永远失去繁育和繁殖能力。灭菌、干热灭菌、湿热灭菌、过滤杀菌、紫外线消毒、化学药品杀菌中高压蒸汽灭菌是微生物学研究和教学中应用最广、效果最好的湿热杀菌方法。灭菌原理：将要杀菌的物体放入装有适量水的高压蒸汽灭菌锅内。把锅里的水加热煮沸，然后把里面原来的冷空气完全赶走，封闭锅里。再继续加热，锅里的蒸气压逐渐上升，温度上升到100 以上。灭菌通常需要在121(压力0.1MPa)下保持15-30分钟。还可以使用在低温度(115，压力0.075MPa)下保持35分钟的方法。注意：积累杀菌剂的时候，不要堵塞安全阀和暴风雪阀的出口，要留下空位，使空气流通良好。否则，安全阀和暴风雪阀会被空气排放堵塞，无法工作，从而导致事故发生。灭菌液体的时候，最好在凝固的耐热玻璃瓶中装满液体，不要超过3/4，瓶口要用棉纱塞，不要用未打孔的橡胶或软木。灭菌液体结束后，不要立即释放蒸汽，压力计指针必须回到0，才能放入蒸汽。多种不同杀菌剂需要的物品，为了避免损失，不能一起杀菌。灭菌结束后，压力表指针返回到0，如果盖子不容易打开，则可以将暴风雪舱放在排出者蒸汽中。让外部空气进入灭菌机内，消除真空后，可以打开盖子。高压灭菌锅内的冷气去除完全重要。高压灭菌锅里的冷气清除不干净，就达不到灭菌所需的温度。第二，灭菌操作，(1)接种前准备工作1，仪器超净工作台超净工作台，是安全的微生物专用清洁工作台，通过专用过滤通道人工控制工作空间中受污染的空气，为实验室工作保护实验，同时对外部环境提供一定程度的保护。原则：超净工作台的干净环境是在特定空间内通过风扇将空气吸入预过滤器，通过正压送风系统进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气输送到垂直或水平气流状态，并形成干净的空气(过滤空气)沿设定的方向流动。使工作区适合所需的清洁度。，超净工作台的使用及注意事项在最初30 60分钟内，用75%的酒精或0.5%的醋酸喷雾擦消毒工作台，打开紫外线灯30分钟；前10分钟启动风扇，调节空气量，操作时关闭杀菌灯。使用中有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精性棉棒擦拭。请用水性棉膏擦掉。保持超清洁台清洁干燥，以免妨碍工作空间的清洁气流。禁止在工作台上记录笔记，工作时要避免明显阻碍气流的行动。防止因进气口引起的风量减少，为了减少净化能力，禁止在预过滤器入口部分放置项目。使用完毕后，用消毒液擦工作台，关掉鼓风机，重新打开紫外线灯，照射15分钟，最后关闭电源。生物安全柜生物安全柜，设计为在操作初级培养物、细菌菌株及诊断标本等传染性实验材料的情况下，保护操作者自身、实验室环境及实验材料，避免暴露于上述操作过程中可能发生的感染性气溶胶和喷出物。生物安全柜使用程序必须将这项工作所需的所有物品移到安全柜，气幕损坏气流不会经常通过双臂；然后在移动前用70%的酒精擦拭表面，消毒，消除污染。打开风扇5 10分钟，进行实验，直到室内空气净化和气流稳定。双臂慢慢伸入安全柜内，至少停留一分钟，稳定机柜内的气流，然后操作。安全柜不放与本实验无关的东西。储物柜内的物品要与清洁区、半污染区、污染区基本区分，操作过程中物品的接近方便，3区之间不能有交集。货物应尽可能放在后面，但不能阻止空气横截面，以免气流正常流动。为了避免交叉污染，要从清洁区运行到污染区。为了防止可能洒的水滴，用消毒液浸泡的毛巾或纱布垫在上衣上，但不能盖住安全柜格栅。为了避免机柜操作过程中产生的热量引起的气流，稳定机柜内的气流，严禁使用酒精灯等火焰。火焰会损坏赫波过滤器。为了防止安全柜的气流不稳定，工作时将后面的移动次数和门开关最小化。实验的时候不要打开玻璃窗，要确认工作人员的脸在工作窗口上方。在机柜内工作时，应保持平稳、平稳的行为，以免影响机柜的气流。病房里使用的物品要消毒后取出，防止病原体微生物引起环境污染。完全启动后，关上玻璃窗，风扇继续运转10 15分钟，打开紫外线灯，照亮30分钟。安全柜要定期清洁消毒，橱柜内部台面污染物要在工作完成后用紫外线灯消毒后用2% 84消毒液擦拭。橱柜的外部表面每天要用1% 84消毒液擦拭。cleanbench不同于BiosafetyCabinet。超清洁工作台是一个负压系统，只保护工作台上工作的试剂等免受污染，不保护工作人员，而生物安全柜则是有效保护工作人员。2，无菌室操作规则将所有实验设备和用品一次放入无菌室(要同时放入徽章，必须用牛皮纸盖好)。操作过程中，尽量避免进出无菌室或传递物品。工作前，打开紫外线灯半小时，关闭紫外线灯后开始工作。进入缓冲室后，要戴上工作服、鞋、帽子、口罩，用手消毒药清洗后进入工作室。操作时严格按照灭菌操作法工作的话，废料要扔在废物桶里。工作后，要将台面清理干净，去除培养物和废物桶，用消毒药清理干净，然后打开紫外线灯30分钟。，3，灭菌操作要求操作时不应有大动作或快动作；玻璃制品的使用要轻放。在火焰上工作；接种设备使用前必须燃烧灭菌。培养物接种，合作要轻巧准确；不能直接用嘴吸吸管。含有细菌的吸管、幻灯片等要放在含有5%西格尔溶液的消毒罐里消毒。禁止在复水水中移动手臂；(2)接种1，接种的一般过程，接种工具灭菌，接种工具冷却，抽样，接种，接种工具灭菌，预防污染标本，防止环境污染，2，平，3，倾斜接种技术斜面接种，从生长良好的菌株坡度中挑选少量菌株，移植到其他新鲜倾斜培养基中用于接种良好的空气微生物。具体措施：贴标签：接种前在试管上贴标签，标记菌名、接种日期、接种者姓名等，也可以在距试管口约2 3厘米的地方贴，使用标记。打开酒井灯。接种：1)拿起试管，将两个倾斜的试管与菌管连接起来，将拇指和另外四个手指抓住左手，使中间的中指位于两个试管之间。斜坡面向工人，位于水平位置。管子插头首先用右手松开试管插头，以便在接种时拔出。通过接种回流，抓住灭菌右手，在火焰中溶解并灭菌伤口，然后重复能够扩大试管其他部分的烧伤和杀菌。拔掉管子插头，用右手的无名指、小指、手掌依次去除试管菌株和试管塞子，然后慢慢消毒试管入口(不要太热)，接种菌后要冷却。轻埋少量菌体或细胞器后，将接种环移至菌株试管外，注意接种环不要接触管壁，清除后，补菌接种环不要通过火焰。接种将火焰旁埋在菌株中的接种环迅速延伸到其他斜颈试管。在倾斜徽章底部以“z”形前后密集地划线，不要刮胸章。在某些情况下，可以从倾斜培养基的中间直线地只接种一种，也可以通过直线接种观察各种菌种的生长特性。去掉插头管插头接种环，燃烧试管入口，在火焰旁插入试管插头。接种环燃烧杀菌。倾斜接种图，4，液体接种具体操作：与倾斜接种基本一致，但液体与管壁接触时轻轻摩擦环，菌体分散，试管插头轻微摇动。如果菌株在液体培养基中培养，通常用吸管或滴管接种。5、划线接种目的：形成单菌落，获得混合细菌单分散生长、纯细菌、活细菌数。方法：分划法：适合含有大量细菌的标本连续分划法：适合含有较少细菌的标本，分划法，连续法，6，穿刺接种预防法，从菌种坡度中选择少量菌体，扎入固体或半固体深培