冰冻切片制作及质量控制课件

1、,云南省肿瘤肿瘤医院病理科 李 磊,浅谈冰冻切片的体会,1,冰冻切片制作及质量控制,影响术中病理诊断准确性的因素,2,冰冻切片制作及质量控制,取材,速冻,如何提高冰冻切片的质量,技术员,温度,切片,固定,染色,包埋,3,冰冻切片制作及质量控制,相互沟通理解,取材医生,临床医生,技术员,诊断医生,4,冰冻切片制作及质量控制,取材,送检组织宜新鲜、及时并避免遇水,取材器械保持干燥、清洁,组织本身含水较多则可用滤纸吸干,避免不必要的脂肪附着,通过申请单的病史及所取组织有初步认知程度,小结： 以上诸多要求，其实我们最主要的目的就是从根源上控制冰晶的产生，因为冰晶会导致细胞间针状裂隙，细胞结构改变，细胞

2、核普遍增大，影响诊断准确性。,5,冰冻切片制作及质量控制,6,冰冻切片制作及质量控制,冰冻组织的包埋,包埋组织时应将组织周边多留出 O. C. T . 用于 牵引展开切片之用,否则出刀、 入刀处会有皱褶影响 制片效果。O. C. T . 中的小气泡应尽量去除, 以免影 响旁边组织产生挤压和皱褶。较小的组织在包埋时 可以先制作一个 O. C. T . 冻托, 待冻托基本凝固时, 将组织放在冻托上,再在周围放上 O. C. T . 后速冻。 囊壁类组织需要立埋时, 可将几条囊壁紧靠一起卷 成 U字形,可以帮助囊壁更好保持侧立。OCT的放置 不宜过多，太多了影响速冻时间产生冰晶。,包埋,7,冰冻切片

3、制作及质量控制,8,冰冻切片制作及质量控制,速冻,为什么速冻呢？,如何才能保证速冻？尽量减少冰晶的产生,当然是为了减少冰产生,冻锤的使用,半导体制冷,液氮,9,冰冻切片制作及质量控制,冻锤的使用,在组织冷冻过程中,组织内可产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生最好的办法是使用冻锤。新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织 受挤压变形。应该待 O. C. T. 60 % 70 %凝固时 再将冻锤轻压在组织上,这样既能防止冰晶的产生 又能得到较平整的切面。,10,冰冻切片制作及质量控制,11,冰冻切片制作及质量控制,温度,温度过低,组织过硬,12,冰

4、冻切片制作及质量控制,温度过高,硬度不够,13,冰冻切片制作及质量控制,小结：,14,冰冻切片制作及质量控制,切片,组织冻结后将组织连同样本托固定到冷冻头 上,设定切片厚度 4um。用样品快进按钮 将样品移 近刀口,调整要切的平面, 利用慢进按钮 先粗切修出 组织最完整切面后细切 1 2张弃用,继续细切时左 手持毛笔轻拉 O. C. T. 边缘,右手切片,双手匀速配 合。待组织切片完整拉下铺于组织样品上, （也可以使用废 片轻轻拖至切片刀刃上，右手半切组织过程中，顺势将废弃组织与待切组织片粘连，轻轻向后拉动，当组织切到位点以后，就形成一张完整的切片）再用常温载玻 片粘贴后迅速放入乙醚酒精混合固

5、定液中中固定2分钟左右。,15,冰冻切片制作及质量控制,16,冰冻切片制作及质量控制,切片注意事项,1、样本托放入机头时，必须根据组织的结构及走势来放置。 2、较硬的组织切片时，组织表面呈胶冻状时，将其修切去，因为冷冻是自下而上，表面呈胶冻状时(例如内膜癌的子宫肌壁带全层)，下面组织已符合切片最佳时机。 3、组织过冻时，可带上薄膜手套用拇指置于组织块表面几秒钟。 4、组织有部分不需要或阻碍我们获得高质量切片时，可将其挖除。 5、切片时，注意观察组织表面有无包膜，结节，但修片时也必须注意观察重点病变的微小病灶避免修切过度，造成误诊，漏诊，切片厚度45um，淋巴结切片 3 um 为宜。,17,冰冻

6、切片制作及质量控制,18,冰冻切片制作及质量控制,冷冻常见问题及对策,1、取材常见问题及对策,1.1取材常见问题及对策 组织被挤压:取材刀剪必须锋利， 切割时不可来回锉动 夹取组织时切勿猛压， 以免挤压损伤组织。 1.2组织块过大:冷冻时间延长易产生冰晶，在不影响病理诊断的前提下， 标本取材尽量小一些,19,冰冻切片制作及质量控制,切片后用载玻片贴片时手不能颤抖,而且在贴附组织时手要有一个向下伸展的动作, 切片机的盖打开越小越好。,2.组织贴附不平或有皱褶:,20,冰冻切片制作及质量控制,常见于组织结构软硬不同的组织, 解决方法:标本较硬的部分摆在上端, 先切较软的部分, 依次切到硬的部分,同

7、时用毛笔轻轻地展开, 或用抗卷板才能切出完整的切片。,3.组织挤压、 皱缩:,21,冰冻切片制作及质量控制,4.组织破碎,组织破碎: 如果组织冰冻过头,使之发脆就会发生破碎,这时用手贴在组织上片刻稍加温使其软化即可切出完整的切片。,22,冰冻切片制作及质量控制,5脱片,冰冻切片一般很少脱片, 偶尔见于坏死组织或纤维较多的组织，或者载玻片不清洁 切片太厚或组织本身的原因。 解决方法: 将组织切片切得更薄2-3um,切片固定后用吹风机吹干或用防脱片贴片后染色，染色时轻拿轻放，防止人为脱片。,23,冰冻切片制作及质量控制,6冷冻欠佳致切片困难:,不易成形，产生搓板状 ，厚薄不均 破碎或糊糊状:组织冷

8、冻时间不够或冷冻机内设定的温度未达到要求 可延长冷冻时间或调低冷冻机冷冻温度 若为刀片的温度不够冷，要预冷刀片。,24,冰冻切片制作及质量控制,7、切片出现冰晶,主要是冷冻速度不够快捷 ，组织取材太厚 、切片时组织温度太低 、动作力度过大等因素造成 。因此组织取材要适中为避免组织脱落 ，取好的组织底部及周围要及时入放适量的 OCT,然后迅速放入冷冻机内 ,不宜过多, 否则会影响速冻时间而产生冰晶,25,冰冻切片制作及质量控制,染色常见问题及对策,细胞核不清晰， 核浆染色对比度不好 应选择合适的苏木精和伊红配方， 为了加快染色时间， 苏木精提前配制成熟后再加温使用， 成熟苏木精加温后染色时间1

9、2 min即可 ，由于苏木精加温后容易被破坏， 应及时更换 ，苏木精染色后应显微镜下观察， 确认细胞核染色清晰方可进行下一步 染伊红前切片一定要用流水冲洗干净， 否则， 伊红难着色或着色不均匀。,26,冰冻切片制作及质量控制,固定,冰冻切片在病理快速诊断中运用广泛，但要做好一张优良的冰冻切片并非容易，尤其是冰冻组织固定不良会造成切片背景不清，染色不良等问题。所以一种合适的固定液是冰冻切片的必备条件。我院病理科产用乙醚酒精冰醋酸苦味酸混合固定液。,27,冰冻切片制作及质量控制,染色,28,冰冻切片制作及质量控制,染色,固定,苏木素,盐酸酒精,蓝化,70%AL,伊红,95%AL,80%AL,无水酒

10、精1,无水酒精2,无水酒精4,无水酒精3,二甲苯1,二甲苯2,封片,29,冰冻切片制作及质量控制,冰晶会导致细胞间针状裂隙，细胞结构改变，细胞核普遍增大，影响诊断准确性。,30,冰冻切片制作及质量控制,31,冰冻切片制作及质量控制,组织过冻以后照成的组织破碎，影响诊断准确性,32,冰冻切片制作及质量控制,请大家看一下这张切片是什么原因照成的？,回答对了有香吻哦！亲,33,冰冻切片制作及质量控制,小结,总之制作一张优良的冰冻切片，诊断医生和技术员都需要高度的责任心及相互之间的沟通与合作，尤其是技术员在日常工作中不断的摸索、学习和提高，练就一身过硬的技术，尽可能一次把切片做好，更好的为临床服务，减少病人的痛苦。,34,冰冻切片制作及质量控制,讨论,1、冰冻固定液固定标本时间的长短对组织切片的影响有没有?如果有，到底影响了哪些方面？除了适当的固定时