双缩脲法测定血清总蛋白

1、 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 了解血清总蛋白测定的临床意义。 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。 蛋白质分子中含有肽键（CO NH ） 与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩 脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度 与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正 比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比 较，即可求得溶液中蛋白质的含量。 C测 测 = C标标 A标 标 加入物 （ml） 调零 管 标本空 白管(B) 试剂空 白管(RB) 标准管 (S) 测定

2、管 (U) 血清0.10.1 蛋白质标 准液 0.1 蒸馏水5.00.1 双缩脲空 白试剂 5.0 双缩脲试 剂 5.05.05.0 混匀，置25 水浴放置30min或37水浴水浴 放置放置10min，以空白管调零，在540nm波长 处进行比色，分别读取各管的吸光度值。 计算公式： 血清总蛋白（g/L）= C标 标 AU- ARB- AB AS-ARB 参考范围： 正常人：6080g/L 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法：五种经典方法： 双缩脲法（双缩脲法（BiuretBiuret法）：法）：1 12mg 2mg 定氮法：灵敏度定氮法：灵敏

3、度0.20.21.0mg 1.0mg FolinFolin酚试剂法（酚试剂法（LowryLowry法）：法）：5050100g 100g 紫外吸收法：紫外吸收法：5g 5g 考马斯亮蓝法（考马斯亮蓝法（BradfordBradford法）：法）：1 15g5g 双缩脲法优缺点：双缩脲法优缺点： 优点优点 操作简单，使用方便，作为临床测定血清操作简单，使用方便，作为临床测定血清 总蛋白的首选常规方法且重复性好。总蛋白的首选常规方法且重复性好。 缺点缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。倍左右。 血清总蛋白降低血清总蛋白降低 1 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损、蛋白

4、合成障碍：肝功能严重受损 2 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等大出血；肾病综合症等 3 3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性 消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原 因引起的水钠潴留。因引起的水钠潴留。 血清总蛋白升高血清总蛋白升高 1 1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤 患者，主要是因为异常球蛋白增加患者，主要是因为异常球蛋白增

5、加 2 2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！ 凡分子内含有凡分子内含有2 2个或个或2 2个以上肽健（个以上肽健（CO CO NH NH ）的化合物均可呈双缩脲反应。）的化合物均可呈双缩脲反应。 双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比 关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的 组成无明显关系。组成无明显关系。 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对 本法有明显干扰，故用标本空白管来消除；本法有明显干扰，故用标本空白管来消除； 因双缩脲试剂中含有因双缩脲试剂中含有CuSOCuSO4 4具有颜色，故用具有颜色，故用 试剂空白管消除干扰。试剂空白管消除干扰。 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下 列方法消除：取列方法消除：取2 2支离心管，各家待测血清支离心管，各家待测血清 0.1ml0.1ml，再加蒸馏水，再加蒸馏水0.5ml0.5ml和丙酮和丙酮10ml10